小柴胡湯加減方對(duì)慢性胰腺炎大鼠胰腺外分泌功能的影響*

卓玉珍，張淑坤，張艷敏，徐新生，崔乃強(qiáng)

（天津市中西醫(yī)結(jié)合急腹癥研究所，天津市南開醫(yī)院，天津 300100）

·實(shí)驗(yàn)研究·

小柴胡湯加減方對(duì)慢性胰腺炎大鼠胰腺外分泌功能的影響*

卓玉珍，張淑坤，張艷敏，徐新生，崔乃強(qiáng)

（天津市中西醫(yī)結(jié)合急腹癥研究所，天津市南開醫(yī)院，天津 300100）

[目的]觀察小柴胡湯加減方對(duì)慢性胰腺炎大鼠胰腺外分泌的影響。[方法]體質(zhì)量180～200 g健康雄性Wistar大鼠30只，隨機(jī)分為3組：對(duì)照組、模型組及中藥組。模型組及中藥組大鼠尾靜脈注射二氯二丁基酯（DBTC）溶液（7 mg/kg），對(duì)照組僅尾靜脈注射相同體積的溶劑。自造模第2天起中藥組給予小柴胡湯加減方灌胃（10 mL/kg），每日1次。常規(guī)飼28 d，3組大鼠行苯洛肽（BT-PABA）實(shí)驗(yàn)，收集6 h總尿量，計(jì)算6 h大鼠尿PABA排出率；同時(shí)留取糞便，用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）法檢測(cè)大鼠糞彈力蛋白酶1（FE-1）含量。之后，麻醉大鼠，下腔靜脈取血，用于血清淀粉酶、脂肪酶檢測(cè)；取胰腺組織，用于組織病理學(xué)觀察。[結(jié)果]組織病理學(xué)可見模型組腺泡萎縮，纖維組織增生明顯，中藥組病理損傷程度減輕。與對(duì)照組比較，模型組大鼠尿PABA排出率下降（P＜0.05），模型組糞FE-1含量降低（P＜0.05）。與模型組比較，中藥組尿PABA排出率升高（P＜0.05），糞FE-1含量明顯增加（P＜0.05）。中藥組血清淀粉酶及脂肪酶活性均較模型組降低（P＜0.05）。[結(jié)論]小柴胡加減方能夠改善大鼠慢性胰腺炎胰腺外分泌功能。

小柴胡湯加減方；慢性胰腺炎；胰腺外分泌

慢性胰腺炎（CP）是各種原因引起胰腺持續(xù)性、彌漫性或局限性炎癥，導(dǎo)致胰腺細(xì)胞被逐漸破壞，胰腺不可逆轉(zhuǎn)纖維化，胰管變窄或閉塞。臨床表現(xiàn)主要為胰腺外分泌功能不全導(dǎo)致的食欲減退、飯后飽脹、脂肪瀉等癥狀。目前，對(duì)胰腺外分泌功能不全的診斷主要依賴臨床表現(xiàn)和實(shí)驗(yàn)室輔助檢查。檢測(cè)糞彈力蛋白酶（FE-1）含量和苯洛肽（BT-PABA）實(shí)驗(yàn)都能間接反映胰腺外分泌功能的變化。中醫(yī)認(rèn)為CP屬于腹痛、胃脘痛、脅痛等范疇，病位在胰腺，但與肝膽、脾胃關(guān)系密切。近年來中醫(yī)藥在治療本病方面積累了豐富的經(jīng)驗(yàn)，小柴胡湯為《傷寒論》中治療少陽病的主方，已有研究發(fā)現(xiàn)它對(duì)CP的治療確有療效。本研究采用大鼠尾靜脈注射二氯二丁基酯（DBTC）溶液制備CP模型，觀察小柴胡加減方對(duì)CP大鼠胰腺外分泌功能的影響。

1 材料及方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 體質(zhì)量170～200g的健康雄性Wistar大鼠30只，購自天津市民樂養(yǎng)殖場(chǎng)，動(dòng)物合格證號(hào)SCXK（津）2009-001。

1.2 主要試劑及儀器 DBTC和BT-PABA購自美國Sigma公司，氨基苯甲酸（PABA），分析純，為北京化工廠試劑；脂肪酶、淀粉酶試劑盒均購自南京建成生物工程研究所；FE-1酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）試劑盒購自武漢華美生物工程有限公司。其他試劑均為國產(chǎn)分析純。中藥柴胡、黃芩等飲片購自南開醫(yī)院中藥房。722型分光光度計(jì)為上海精密科學(xué)儀器有限公司產(chǎn)品；酶標(biāo)儀為上?？迫A有限公司產(chǎn)品；全自動(dòng)洗板機(jī)為Rayto公司產(chǎn)品。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 動(dòng)物分組及模型制備 30只健康雄性Wistar大鼠采用隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分成3組：對(duì)照組、模型組和中藥組，每組10只。模型組及中藥組大鼠尾靜脈注射DBTC溶液（7 mg/kg，將DBTC先溶于1份無水乙醇，然后再與2份甘油和2份二甲基亞砜混合配制成DBTC溶液），對(duì)照組尾靜脈注射相同體積的DBTC溶解劑。中藥組自第2天起給予小柴胡湯加減方灌胃（10 mL/kg），每日1次。第28天，行BT-PABA，同時(shí)留取糞便測(cè)FE-1含量。之后，各組用10%水合氯醛（3 mL/kg）腹腔注射麻醉大鼠，常規(guī)消毒，開腹，取下腔靜脈血，用于檢測(cè)血清淀粉酶及脂肪酶活性；取胰腺組織，用于組織病理學(xué)觀察。

1.3.2 中藥湯劑制備 將中藥飲片加8倍量水浸泡30 min，煎煮兩次，兩次均在沸騰后煎煮30 min，將兩次藥液合并過濾，濃縮為1 g/mL的水煎劑。

1.3.3BT-PABA實(shí)驗(yàn) 大鼠禁食水8 h，刺激排尿后，25 mg BT-PABA（含8.5 mg PABA）溶于8 mL水中灌胃，編號(hào)入代謝籠，籠下方放一容器收集尿量。之后每小時(shí)4 mL水灌胃，共5次。收集并準(zhǔn)確稱量首次灌胃后6 h大鼠總尿量，取2 mL尿液至有刻度、密閉良好的試管中，加10%鹽酸0.25 mL，100℃水解1 h，自然冷卻后備用。制備PABA標(biāo)準(zhǔn)曲線，與其比較根據(jù)公式即可算得尿中PABA的含量及排出率。

1.3.4 糞FE-1檢測(cè) 稱量糞便50 mg，按ELISA試劑盒操作步驟操作檢測(cè)糞中FE-1含量。

1.3.5 組織病理學(xué)觀察 取出的胰腺組織固定于10%福爾馬林溶液中，逐級(jí)脫水，常規(guī)石蠟包埋切片，HE染色，鏡下觀察組織病理學(xué)變化。

1.3.6 血清淀粉酶、脂肪酶活性測(cè)定 在天津市南開醫(yī)院檢驗(yàn)科用全自動(dòng)生化儀檢測(cè)。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法 采用SPSS18.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，正態(tài)分布計(jì)量資料的組間比較采用單因素方差分析，偏態(tài)分布計(jì)量資料的組間比較采用秩和檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大鼠一般情況 造模第2天大鼠逐漸出現(xiàn)蜷臥少動(dòng)、豎毛無光澤，飲食飲水量減少，體質(zhì)量增加緩慢，部分大鼠糞質(zhì)稀軟不成形，肛周污染明顯。中藥組在灌胃1周左右，以上癥狀逐漸減輕，而對(duì)照組一般情況始終良好，體質(zhì)量增加明顯。

2.2 6 h尿PABA排出率 模型組大鼠6 h尿PABA排出率較對(duì)照組降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P< 0.05），中藥組與模型組比較排出率升高（P<0.05）。見表1。

表1 3組大鼠6 h尿中PABA排出率（±s）Tab.1 ThePABAexcretionratein6hurineof3groups（±s）

表1 3組大鼠6 h尿中PABA排出率（±s）Tab.1 ThePABAexcretionratein6hurineof3groups（±s）

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05；與模型組比較，#P<0.05。

組別 n 6 h尿中PABA排出率（%）對(duì)照組 10 72.17±12.96模型組 10 40.32±5.00*中藥組 10 57.79±7.64#

2.3 糞FE-1檢測(cè) 3組中，模型組與對(duì)照組比較FE-1含量明顯降低（P<0.01）；中藥組FE-1含量比模型組明顯升高（P<0.05）。見表2。

2.4 組織病理學(xué)觀察 肉眼下可見模型組胰腺顏色變淺呈灰白色，部分大鼠出現(xiàn)胰管明顯擴(kuò)張，胰腺表面粗糙不規(guī)則，伴有周圍組織粘連。中藥組胰腺變化不明顯，表面光滑飽滿，與周圍組織無粘連，胰管未見明顯擴(kuò)張。對(duì)照組胰腺正常，未見明顯變化。HE染色鏡下可見：模型組腺泡萎縮變形、壞死，炎細(xì)胞浸潤(rùn)，纖維組織增生明顯，小葉結(jié)構(gòu)不清甚則消失。對(duì)照組小葉結(jié)構(gòu)清晰可見，無明顯的纖維組織增生及炎細(xì)胞浸潤(rùn)。中藥組炎細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減少，纖維組織增生輕微。

表2 3組大鼠糞FE-1含量Tab.2 The levels of FE-1 in feces of 3 groups

2.5 血清淀粉酶、脂肪酶測(cè)定 與模型組比較，中藥組能明顯降低血清淀粉酶及脂肪酶的活性（P＜0.05）。見表3。

表3 3組大鼠血清淀粉酶、脂肪酶水平（±s）Tab.3 The level of serum amylase and lipase in 3 groups（±s）

表3 3組大鼠血清淀粉酶、脂肪酶水平（±s）Tab.3 The level of serum amylase and lipase in 3 groups（±s）

注：與模型組比較，*P<0.05。

組別 n 淀粉酶（U/L） 脂肪酶（U/L）對(duì)照組 10 1931.6±18.8 28.6±7.4模型組 10 2198.8±102.3 39.7±13.2中藥組 10 1789.4±124.2* 21.6±7.2*

3 討論

胰腺外分泌功能檢查是評(píng)后胰腺功能的主要方法[2-3]。而中醫(yī)古書籍中對(duì)胰腺之名及其生理功能均沒有明確的論述，但在古代有“脺臟”、“散膏”、“腎脂”之稱?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為[1]胰腺是人體的的第二大消化腺，主要由外分泌部和內(nèi)分泌部混合組成。食物中的糖、脂肪、蛋白質(zhì)等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，都需經(jīng)過胰腺分泌的各種酶消化后，才能被機(jī)體吸收利用，這與中醫(yī)“脾主運(yùn)化”的生理功能很相符，因此胰腺的生理功能可歸屬于中醫(yī)學(xué)“脾”的功能范疇。據(jù)慢性胰腺炎的臨床癥狀和體征可將其歸屬于中醫(yī)學(xué)的“腹痛”、“胃脘痛”、“泄瀉”等范疇。

胰腺外分泌功能受損導(dǎo)致CP患者消化不良目前仍然是臨床治療該病的難點(diǎn)，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)主要應(yīng)用胰酶制劑、制酸劑、促消化道動(dòng)力藥等進(jìn)行綜合治療，效果常不穩(wěn)定，有時(shí)還需進(jìn)行外科手術(shù)治療[4]。因此，越來越多的專家學(xué)者將目光投向了中醫(yī)藥對(duì)CP的防治，并且也取得了較滿意的療效[5-9]。本研究是以《傷寒論》經(jīng)典方小柴胡湯加減為研究對(duì)象，觀察其對(duì)CP大鼠的防治作用。胰腺位于中焦，CP病在胰腺，但與肝膽、脾胃關(guān)系密切，胰腺受損常導(dǎo)致三焦樞機(jī)不利，氣化失常，日久則使肝失調(diào)達(dá)，脾胃失和，最終導(dǎo)致肝氣郁結(jié)，脾不運(yùn)化，氣血脈絡(luò)運(yùn)行不暢，甚則瘀血凝滯，百癥叢生。小柴胡湯是治療少陽證的主方，是和法的代表方劑之一。方中柴胡質(zhì)輕味苦，能疏少陽郁滯為君；黃芩味苦，味重，能清胸腹蘊(yùn)熱為臣，君臣合用能和解少陽之邪；參、棗、草合用可和中益氣，扶正祛邪為佐使藥。具有外可和解少陽，舒解少陽之樞機(jī)，內(nèi)可疏利三焦，舒解肝膽之氣郁。全方配伍有攻補(bǔ)兼施、寒溫并用、升降協(xié)調(diào)的特點(diǎn)。隨著近代醫(yī)家對(duì)小柴胡湯認(rèn)識(shí)的不斷深入，其使用已不僅僅局限于少陽證。筆者以小柴胡湯為基礎(chǔ)方，根據(jù)CP虛實(shí)夾雜的臨床特點(diǎn)加減化裁用以治療CP取得了較好的療效。

BT-PABA實(shí)驗(yàn)是一項(xiàng)具有歷史傳統(tǒng)的胰腺外分泌功能檢測(cè)實(shí)驗(yàn)。BT-PABA僅能被糜蛋白酶分解，生成PABA，在小腸吸收，經(jīng)過肝臟乙?；?，由腎臟排出。胰腺外分泌功能低下時(shí)，糜蛋白酶分泌量減少，BT-PABA不能充分裂解生成PABA，導(dǎo)致從尿中排出的PABA下降，所以用尿中排出PABA的量可間接反應(yīng)胰腺的外分泌功能。FE-1是由外分泌腺分泌的一種胰腺內(nèi)切蛋白酶，經(jīng)十二指腸乳頭排入十二指腸，其濃度降低特異性地提示胰腺外分泌功能不全[10]。FE-1存在于人類胰腺分泌物和糞便中，穩(wěn)定性好，且結(jié)果不受胰酶替代療法的影響，能較好地反映胰腺外分泌功能。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)：模型組的FE-1水平及尿中PABA的排出率均較對(duì)照組明顯降低，表明了CP大鼠存在外分泌功能下降；中藥組較模型組均有明顯升高，說明小柴胡加減方對(duì)CP大鼠胰腺外分泌功能有良好的改善作用。

糞FE-1和BT-PABA實(shí)驗(yàn)都能間接反映胰腺外分泌功能，均可以作為臨床診斷CP的輔組檢查手段，但兩者也有一定的區(qū)別[11]。有研究顯示[12]：BTPABA的敏感性較高，但服藥前需排尿且3 d停用磺胺、芳香族及噻嗪類藥物，同時(shí)需要收集6 h總尿量，耗時(shí)長(zhǎng)；糞FE-1的特異性較高，但對(duì)重度胰腺炎患者其敏感性也較高，且無需進(jìn)食停藥，同便常規(guī)一起留檢即可，省時(shí)。但糞FE-1需用ELISA試劑檢測(cè)，費(fèi)用較高，BT-PABA實(shí)驗(yàn)用國產(chǎn)的苯洛肽能降低費(fèi)用且不降低敏感性[10]。CP時(shí)，胰腺組織炎性損傷導(dǎo)致胰酶釋放增加，胰管阻塞導(dǎo)致逆流入血的胰酶增加，這些都使血清胰酶活性增加。本實(shí)驗(yàn)中小柴胡加減方可以明顯降低血清中淀粉酶及脂肪酶的活性，但未能發(fā)現(xiàn)CP大鼠血清淀粉酶、脂肪酶活性增加，可能由于CP后期淀粉酶、脂肪酶活性增加已不明顯有關(guān)。

結(jié)合BT-PABA實(shí)驗(yàn)和糞FE-1檢測(cè)結(jié)果提示小柴胡加減方對(duì)胰腺外分泌功能有保護(hù)作用，為小柴胡湯用于臨床治療CP提供了理論依據(jù)，但其具體機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

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Effect of modified minor Radix Bupleuri decoction on pancreatic exocrine function in rats with chronic pancreatitis

ZHUO Yu-zhen,ZHANG Shu-kun,ZHANG Yan-ming,XU Xin-sheng,CUI Nai-qiang
（Tianjin Institute of Acute Abdominal Disease of Integtated Traditional Chinese and Western Medicine，Tianjin Nankai Hospital，Tianjin 300100，China）

[Objective]To investigate the effects of minor Radix Bupleuri decoction on exocrine pancreatic function in rats with chronic pancreatitis.[Methods]Thirty male Wistar rats,weighing 180～200 g were randomly divided into three groups:control group，medicinal herbal group，model group.The model group and the medicinal group were injected with Dibutyltin dichloride(DBTC)solution into the caudal vein at a dose of 7 mg/kg body weight.The control group was treated with vehicle at the same volume.The medicinal herbal group lavaged with modified minor Radix Bupleuri decoction for 28 days.The n-benzoyl-tyrosyl para-aminobenzoic acid (BT-PABA)test was carried out to evaluate the exocrine pancreatic function.Feces was collected to detect the FE-1.Then rats were sacrificed and the pancreas tissue was harvested for histological examination.The activity of amylase and lipase was detected at same time.[Results]Compared with the control group,the levels of FE-1and and the excretion rate of PABA were reduced in rat with chronic pancreatitis.Compared with the model group,treatment of the modified Minor Radix Bupleuri decoction could significantly reduce the activity of amylase and lipase（P＜0.05）.It could increase the levels of FE-1（P＜0.05）and the excretion rate of PABA.[Conclusion]The modified Minor Radix Bupleuri decoction can improve the exocrine pancreatic function in rat with chronic pancreatitis.

modified minor radix bupleuri decoction；chronic pancreatitis；exocrine pancreas

R285.5

：A

：1672-1519（2014）05-0292-04

2013-12-06）

（本文編輯：馬 英，張震之）

10.11656/j.issn.1672-1519.2014.05.15

國家自然科學(xué)基金青年科學(xué)基金項(xiàng)目（81102686）；天津市衛(wèi)生行業(yè)重點(diǎn)攻關(guān)項(xiàng)目（12KG110）。

卓玉珍（1979-），女，碩士，助理研究員，從事慢性胰腺炎中西醫(yī)結(jié)合基礎(chǔ)研究。