復方中藥痤瘡凝膠對兔耳痤瘡模型治療作用的實驗研究*

夏慶梅，景春暉，杜天樂

（天津中醫(yī)藥大學，天津 300193）

復方中藥痤瘡凝膠對兔耳痤瘡模型治療作用的實驗研究*

夏慶梅，景春暉，杜天樂

（天津中醫(yī)藥大學，天津 300193）

[目的]采用Kligman法，建立兔耳痤瘡模型，觀察復方中藥痤瘡凝膠對兔耳實驗性痤瘡的治療作用。[方法]煤焦油稀釋液（95%乙醇配成的2%濃度煤焦油溶液）外涂于兔耳內(nèi)側(cè)導管開口處2 cm×2 cm范圍，連續(xù)14 d。肉眼及病理確認兔耳痤瘡造模成功。造模成功后將兔隨機分為A、B、C三組，分別于皮損處外涂5%濃度復方中藥痤瘡凝膠、10%濃度復方中藥痤瘡凝膠、維A酸乳膏治療。治療兩周后，根據(jù)分級標準對兔耳痤瘡進行分級，統(tǒng)計學分析復方中藥痤瘡凝膠對兔耳痤瘡模型的治療作用。[結(jié)果]治療兩周后，維A酸組與5%、10%濃度復方中藥痤瘡凝膠組與治療前相比均取得顯著效果，但三組療效間比較無顯著性差異。[結(jié)論]復方中藥痤瘡凝膠對實驗性兔耳痤瘡模型有確切治療效果。

復方中藥痤瘡凝膠；兔耳；痤瘡治療

痤瘡是一種累及毛囊皮脂腺的慢性炎癥性皮膚病，多見于青春期男女，可表現(xiàn)為粉刺、丘疹、膿皰、囊腫、結(jié)節(jié)、瘢痕等皮損?；拣畀徍?，很多患者在情緒和行為方式上發(fā)生改變，且多伴隨焦慮和抑郁[1]。有效的治療可以使痤瘡患者的心理健康，提高生活質(zhì)量。近年來中西醫(yī)對此病進行了深入的研究，均取得了一定療效。但是，西藥內(nèi)服外用不良反應明顯并易反復發(fā)作。傳統(tǒng)中藥外用劑型也有一定的不足，如軟膏劑、霜劑會造成毛囊皮脂腺堵塞，甚至加重病情，洗劑容易受到汗水的影響使藥物附著力下降，影響藥效；酊劑氣味刺鼻，對皮膚刺激性大。為了尋求一種有效、安全、方便、快捷且不含油類的外用中藥制劑，筆者經(jīng)過多年臨床療效觀察，對外用中藥組方進行優(yōu)化，并利用現(xiàn)代科學技術(shù)對中藥劑型進行改良，制成一種新型的凝膠制劑，其特點有療效好，外觀清澈透明，涂展性和透皮吸收效果好,無油膩感，不堵塞毛孔，用于痤瘡的外治。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 成年新西蘭大耳白兔22只，體質(zhì)量2.0～3.0 kg。

1.2 實驗藥物與試劑 5%濃度復方中藥（丹參、黃芩、白花蛇舌草、野菊花、紅花、白薇、甘草）痤瘡凝膠（天津中醫(yī)藥大學制劑中心制備）、10%濃度復方中藥（丹參、黃芩、白花蛇舌草、野菊花、紅花、白薇、甘草）痤瘡凝膠（天津中醫(yī)藥大學制劑中心制備）、維A酸乳膏（重慶華邦制藥股份有限公司生產(chǎn)）、煤焦油、95%濃度乙醇（山東利爾康消毒科技股份有限公司生產(chǎn)）。

1.3 動物造模 22只成年新西蘭大耳白兔右耳內(nèi)側(cè)耳管開口處2 cm×2 cm范圍，每天涂煤焦油稀釋液（95%乙醇配成的2%濃度煤焦油溶液）0.25 mL一次，左耳不做任何處理作為對比，肉眼觀察造模后兔耳皮損的情況和毛囊口有無角質(zhì)栓等，連涂14d。隨機取2只成年新西蘭大耳白兔，用空氣栓塞法處死，取下雙耳導管開口處的全層皮膚，10%福爾馬林液固定，脫水后用硬蠟進行包埋，然后切片并烘干。HE染色后進行常規(guī)病理觀察，驗證造模成功。

1.4 療效判斷標準

1.4.1 療效肉眼判定標準

正常（0）：正常組織，無痤瘡。

輕度（Ⅰ級）：粉刺為主要皮損，可有少量丘疹和膿皰?？偛≡顢?shù)少于30個。

中度（Ⅱ～Ⅲ級）：其中Ⅱ級有粉刺，伴有中等量的丘疹和膿皰?？偛≡顢?shù)在31～50個之間；Ⅲ級在粉刺基礎上伴大量丘疹和膿皰，偶見大的炎性損害，分布廣泛，有少數(shù)結(jié)節(jié)形成?？偛≡顢?shù)在51～100個之間。

重度（Ⅳ級）除上述皮損外，還伴有3個以上的結(jié)節(jié)或囊腫[2]。

1.4.2 療效組織病理學判定標準 （－）為無痤瘡；（+）為毛囊輕度角化，皮脂腺輕度增生或無明顯增生；（++）毛囊面積輕度擴大，漏斗部可見中等量的角化物質(zhì)，皮脂腺輕度增生；（+++）毛囊面積明顯擴大，內(nèi)有大量的角化物質(zhì)，皮脂腺直徑明顯增大[3]。

1.5 統(tǒng)計學方法 采用SPSS18.0進行統(tǒng)計分析,等級資料用頻數(shù)描述,等級資料治療前后比較采用配對秩和檢驗，等級資料組間比較采用Kruskal－Wallis檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

1.6 復方中藥痤瘡凝膠對實驗性痤瘡的治療作用20只成年新西蘭大耳白兔造模成功后，隨機選取18只再隨機分為A、B、C 3組，每組6只。其余兩只不做任何處理以便病理驗證。A、B兩組為治療組，C組為對照組。3組分別經(jīng)1.4.1判定標準分級，結(jié)果如表1所示。經(jīng)秩和檢驗，3組兔耳肉眼皮損差異無顯著性（P＞0.05），組間具有可比性。

表1 3組兔耳涂藥前后肉眼觀察統(tǒng)計Tab.1 Observation statistics before and after treatment in 3 groups obtained by naked eyes

A、B兩組皮損處分別外涂5%、10%濃度復方中藥痤瘡凝膠，每日兩次，每次1 mL，C組左耳皮損處外涂維A酸乳膏，每日1次，每次1 mL。14 d后肉眼觀察兔耳皮損的恢復情況。然后用空氣栓塞法將兔全部處死，取下左耳導管開口處的全層皮膚，采用10%福爾馬林液固定，脫水后使用硬蠟進行包埋，然后切片并烘干。HE染色以后進行常規(guī)病理觀察。

2 結(jié)果

2.1 兔耳肉眼觀察及組織學判定 肉眼觀察下，正常未造模兔耳表面光潔，呈淡粉白色，透光度好，兔耳導管開口處毛囊整齊排列，不見角栓，無粉刺（如圖1）。造模3 d后毛孔開始變粗，周圍皮膚開始角化。14 d造模完成后，兔耳增厚明顯，毛囊口隆起，撫摸兔耳造模處皮膚表面感覺明顯粗糙礙手，用手擠壓可出現(xiàn)白色碎米汁狀物和黑色角栓，結(jié)節(jié)數(shù)量顯著增多（如圖2）。皮損肉眼觀察情況均符合1.4.1中描述的Ⅲ～Ⅳ級痤瘡皮損程度，以Ⅳ級多見。

圖1 未造模的正常兔耳Fig.1 Normal rabbit ear before molding

圖2 14天造模后的兔耳痤瘡模型Fig.2 Rabbit ear acne model after molding for 14 days

電子顯微鏡下觀察，正常未造模兔耳表皮較薄，細胞排列整齊，角化正常，只有1層顆粒層；棘細胞為2～3層，透明層不明顯，毛囊口未擴張，毛囊、真皮、表皮交界清楚可見（如圖3）。造模完成后，兔耳角質(zhì)層明顯增厚，皮脂腺毛囊口充滿角化栓塞物質(zhì)，并向皮脂腺延伸。毛囊壁增厚，散在淋巴細胞浸潤。棘細胞層增厚顯著，由未造模前的2～3層變?yōu)?～10層，且明顯變大。真皮淺層毛細血管擴張明顯，淋巴細胞增多（如圖4）。提示兔耳痤瘡模型造模成功。

圖3 電鏡下未造模的正常兔耳（HE染色×200）Fig.3 Normal rabbit ear before molding under electron microscopy(HE×200)

圖4 電鏡下造模完成后的兔耳痤瘡模型（HE染色×200）Fig.4 Rabbit ear acne model after molding under electron microscopy(HE×200）

2.2 復方中藥痤瘡凝膠對兔耳痤瘡模型的治療作用 用藥14 d后，3組兔耳皮損均有不同程度改善（見圖5～8，表1）。A組肉眼觀察下兔耳表皮增厚有所減輕，角質(zhì)物和皮脂腺分泌物較造模時明顯減少，但仍有未治愈粉刺存在。鏡下觀察棘細胞層數(shù)由原來的7～10層恢復到4層，毛囊口擴張程度減輕，其內(nèi)角化物疏松，炎癥細胞有所減少。B組肉眼觀察下兔耳表皮厚度以達正常水平，角質(zhì)物和皮脂腺分泌物較造模時明顯減少。鏡下觀察棘細胞層數(shù)已恢復到正常未造模兔耳的2～3層，炎癥細胞明顯減少，毛囊口擴張程度減輕，部分已恢復到正常水平。C組肉眼觀察脫屑明顯，表皮厚度已恢復到正常水平，摸之不粗糙礙手。電鏡觀察下C組棘細胞層數(shù)已恢復到4層水平，仍有少量疏松角化物質(zhì)填充。真皮內(nèi)炎癥細胞減少。組織病理學統(tǒng)計情況見表2。

圖5 A組兔耳涂藥兩周后鏡下觀察情況（HE染色×200）Fig.5 Condition of group A after treatment for 2 weeks under electron microscopy(HE×200)

肉眼直觀觀察：復方中藥痤瘡凝膠高劑量組（B組10%）效果優(yōu)于復方中藥痤瘡凝膠低劑量組（A組5%）。但經(jīng)統(tǒng)計學進行3組間兩兩比較得知，3組間無論肉眼或病理觀察，差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。故得出結(jié)論：經(jīng)14 d治療之后，維A酸組與5%、10%濃度復方中藥痤瘡凝膠組均可取得一定效果，但3組間療效無顯著性差異。

圖6 B組兔耳涂藥兩周后鏡下觀察情況（HE染色×200）Fig.6 Condition of group B after treatment for 2 weeks under electron microscopy(HE×200)

圖7 C組兔耳涂藥兩周后鏡下觀察情況（HE染色×200）Fig.7 Condition of group C after treatment for 2 weeks under electron microscopy(HE×200)

圖8 B組兔耳涂藥兩周后肉眼觀察情況Fig.8 Observation by naked eyes of group B after treatment for 2 weeks

表2 3組兔耳涂藥兩周后組織病理學判定統(tǒng)計Tab.2 Statistics of histopathological changes after treatment for 2 weeks in 3 groups

3 討論

尋常痤瘡中醫(yī)之稱“粉刺”，是一種累及毛囊皮脂腺的慢性炎癥性皮膚病，發(fā)病率高。臨床多表現(xiàn)為丘疹、結(jié)節(jié)、膿皰、囊腫、瘢痕等皮膚損害。據(jù)報道，青春期患者尋常痤瘡發(fā)病率高達82.7%，男性患病率高于女性[4]。西醫(yī)多認為此病多與雄激素代謝異常、毛囊寄生物產(chǎn)生及繁殖、炎癥與宿主免疫反應、5-α受體還原酶及Toll樣受體2作用有關(guān)，此外還與遺傳有密切關(guān)聯(lián)。治療尋常痤瘡西醫(yī)多采用抗生素、維甲酸、抗雄激素類藥物為主。雖可取得一定治療效果,但抗生素類藥物不良反應較多，且肝腎毒性強[5]；維甲酸類藥物使皮膚脫屑嚴重，且有嚴重肝毒性、眼毒性和致畸性[6]；抗雄激素類藥會導致人體激素水平紊亂，尤其影響女性月經(jīng)規(guī)律性，嚴重者可致不孕。中醫(yī)辨證論治多將痤瘡分為肺經(jīng)風熱、腸胃濕熱、痰濕瘀滯三型?！夺t(yī)宗金鑒》有關(guān)粉刺記載曰：“此證由肺經(jīng)血熱而成。每發(fā)于面鼻，起碎疙瘩，形如黍屑，色赤腫痛，破出白粉汁，日久皆成白屑，形如黍米白屑。宜內(nèi)服枇杷清肺飲，外敷顛倒散，緩緩自收功也?！币虼擞腥藦臐駸嵴撝伪静7]。筆者應用中醫(yī)內(nèi)外結(jié)合治療方法治療本病，取得很好療效[8]。在此治療基礎上，進一步篩選臨床確有療效的外用中藥，應用現(xiàn)代制劑技術(shù)，制成復方中藥痤瘡凝膠治療尋常痤瘡，取得顯著療效。本凝膠主要功效為清熱涼血，散瘀止痛。凝膠中丹參有活血調(diào)經(jīng)、祛瘀止痛、涼血消癰之功效。丹參中主要化學物質(zhì)為丹參酮。丹參酮既對革蘭陽性球菌,特別是耐藥金黃色葡萄球菌有較強抗菌作用，也具有抗雄激素樣作用[9]。有研究還證實了丹參酮有加快皮膚的新陳代謝的作用[10]。黃芩有清熱燥濕，涼血解毒之功效。其體外抗菌作用良好[11]。現(xiàn)代醫(yī)學研究證明黃芩中黃酮類物質(zhì)具有強力抗炎作用，可有效降低毛細血管通透性，且劑量越高抑制作用越明顯[12]。黃芩中所含的黃芩苷可通過抑制人皮脂細胞內(nèi)雄性激素受體表達而具有抗雄激素樣作用[13]。白花蛇舌草主清熱解毒，利濕通淋。體外抗菌實驗結(jié)果顯示，白花蛇舌草總黃酮對常見的球菌和桿菌均有不同程度的抑菌和殺菌作用,此外還具有一定抗炎和抗雄激素作用，參與免疫調(diào)節(jié)，抑制皮脂腺分泌[14]。野菊花清熱解毒功效卓著?，F(xiàn)代藥理研究證實，野菊花有較強的抗炎殺菌和提高免疫力的功能[15]。白薇有清熱涼血，利尿通淋，解毒療瘡之功效，可有效治療血熱毒盛的瘡癰腫毒，內(nèi)服外敷均可[16]。紅花擅活血通經(jīng)、祛瘀止痛?，F(xiàn)代醫(yī)學證實其具有抗炎抗氧化效應、改善微循環(huán)并抑制毛細血管通透性增加的作用。甘草既可補脾益氣，調(diào)和諸藥，又能清熱解毒，緩急止痛。甘草酸是從甘草中提取出的有效成分，由甘草酸合成的甘草鋅具有類似激素抗炎、抗免疫等方面的作用，卻沒有激素樣的不良反應[17]，故特別適合作為激素替代物治療痤瘡。七味藥共奏清熱涼血，散瘀止痛，活血消癰之療效。有文獻研究中藥在體外對痤瘡丙酸桿菌的抑制作用后發(fā)現(xiàn)黃芩單體成分小檗堿表現(xiàn)出良好的抑制痤瘡丙酸桿菌活性的效果[18]。此外，筆者研制的復方中藥痤瘡凝膠制劑既克服了傳統(tǒng)乳膏、軟膏等易阻塞皮脂腺的缺點，也克服了酊劑、洗劑、擦劑的刺激性大或給藥吸收率差的問題。該凝膠水溶性強，以低濃度卡波姆為基質(zhì)，具有易涂展，無油膩性和刺激性等特點，附著性和均勻性良好，顯著提高藥物利用率；加入甘油和尼泊金乙酯對藥物起到一定防腐、緩沖和潤滑作用；同時選擇兩種滲透促進劑合用也增強了中藥的利用度和透皮吸收效果。由此可見，復方中藥痤瘡凝膠是中醫(yī)外科經(jīng)皮給藥治療痤瘡的最好選擇。

本研究肉眼觀察，發(fā)現(xiàn)10%中藥濃度痤瘡凝膠皮損恢復情況較5%中藥濃度痤瘡凝膠皮損恢復相對較好，但是經(jīng)過統(tǒng)計學驗證沒有意義。有待今后深入研究。

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Experimental study of compound Chinese medicine acne gelatum on acne on rabbit ear

XIA Qing-mei,JING Chun-hui,DU Tian-le
（Tianjin University of Traditional Chinese Medicine,Tianjin 300193,China）

[Objective]To establish an acne model of rabbit ear and then observe the therapeutic effect of compound traditional Chinese medicine acne gel.[Methods]Pix carbonis dilution(2%concentration of pix carbonis solution with 95%concentration of alcohol)was applied to inside surface of rabbit ears for successive 14 days to prepare the experimental acne model on rabbit ear.The models were confirmed by both naked eye and pathology examination.They were then divided into group A,B,and C randomly,applying 5%acne gel, 10%acne gel and tretinoin to the lesions respectively.After treatment for two weeks,the acne was classified according to a standard and the therapeutic effects was compared between these three groups.[Results]In contrast,these three treatments showed remarkable therapeutic effects compared with before.But the differences among three groups were not significant.[Conclusion]Compound Chinese medicine acne gel has a specific therapeutic effect on experimental rabbit ear acne models.

compound Chinese medicine acne gel;rabbit ear;acne therapeutics

R285.5

：A

：1672-1519（2014）05-0296-05

2013-12-11）

（本文編輯：馬 英，張震之）

10.11656/j.issn.1672-1519.2014.05.16

國家自然科學基金面上項目（81373789）；天津市中醫(yī)藥管理局中醫(yī)中西醫(yī)結(jié)合項目（11024）。

夏慶梅（1965-），女，副教授，長期從事皮膚及皮膚美容的教學和臨床工作。