益母草化學(xué)成分研究Ⅲ*

鄧 屾，劉麗麗，陳 玥，李曉霞，王 濤，張 祎

（天津市中藥化學(xué)與分析重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300193）

益母草化學(xué)成分研究Ⅲ*

鄧 屾，劉麗麗，陳 玥，李曉霞，王 濤，張 祎

（天津市中藥化學(xué)與分析重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300193）

[目的]繼續(xù)對(duì)益母草（Leonurus japonicus Houtt.）的化學(xué)成分進(jìn)行研究，為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用該植物資源提供依據(jù)。[方法]采用正相硅膠、反相ODS、Sephadex LH-20等柱色譜及高效液相色譜法等方法進(jìn)行分離純化，并通過(guò)理化性質(zhì)及光譜分析鑒定化合物的結(jié)構(gòu)。[結(jié)果]從益母草體積分?jǐn)?shù)為50%的乙醇提取物中分離鑒定了7個(gè)化合物，分別為（E）－4－h(huán)ydroxy-dodec-2-enedioic acid（1）、益母草堿（2）、水蘇堿（3）、次黃苷（4）、鳥(niǎo)苷（5）、左旋色氨酸（6）、苯丙氨酸（7）。[結(jié)論]1、4、5、7為從益母草種中首次分離得到的化合物。

益母草；化學(xué)成分；結(jié)構(gòu)鑒定

益母草（Leonurus japonicus Houtt.）又名坤草，為唇形科益母草屬1 a或2 a生草本植物，以其地上部分的干燥全草用藥。在中國(guó)大部分地區(qū)均有分布，常生用或熬膏用。中醫(yī)理論認(rèn)為益母草苦、辛，微寒，歸肝、心包、膀胱經(jīng)。具有活血調(diào)經(jīng)，利尿消腫，清熱解毒的功效。主要用于月經(jīng)不調(diào)，水腫尿少，瘡瘍腫毒[1]。課題組在對(duì)該植物體積分?jǐn)?shù)50%乙醇提取液化學(xué)成分的研究過(guò)程中，分離得到了7個(gè)單體化合物，利用與文獻(xiàn)類(lèi)似的方法對(duì)結(jié)構(gòu)進(jìn)行了鑒定[2-8]。其中，1、4、5、7為從益母草種中首次分離得到的化合物。

1 儀器與材料

安捷倫6520 Q-TOF LC/MS，Bruker 500 MR超導(dǎo)核磁共振波譜儀（TMS為內(nèi)標(biāo)，德國(guó)Bruker公司）。柱層析硅膠、薄層層析硅膠H（青島海洋化工廠(chǎng)），薄層色譜硅膠預(yù)板、高效色譜用硅膠GF254（天津思利達(dá)科技有限公司），ODS（日本Fuji Silisia Chemical公司），Sephadex LH-20（瑞典Ge Healthcare Bio-Sciences AB公司），D101大孔吸附樹(shù)脂（天津海光化工有限公司），Cosmosil 5 C18-MS-II分析柱及制備柱（日本Nacalai Tesque公司）。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（德國(guó)IKA公司，IKA RV 10、上海亞榮生化儀器廠(chǎng)，RE52CS）；高速離心機(jī)（美國(guó)Beckman Coulter有限公司，ALLEGRA-64R）。

實(shí)驗(yàn)所用試劑（色譜純或分析純）均天津康科德科技有限公司產(chǎn)品。

所用藥材益母草于2009年10月購(gòu)自安國(guó)市場(chǎng)，由天津中醫(yī)藥大學(xué)中藥標(biāo)本館李天祥副教授鑒定為益母草（Leonurus japonicus Houtt.）全草。植物標(biāo)本存放于天津中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥研究中心。

2 提取分離

取益母草干燥全草6.0 kg，粉碎，用9倍量體積分?jǐn)?shù)50%的乙醇溶液加熱回流提取3次，每次分別為3、1、1 h，減壓回收溶劑，得到浸膏600 g。取浸膏480 g，用氯仿-水萃取，水層經(jīng)過(guò)D101大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行梯度洗脫，水、體積分?jǐn)?shù)為70%、95%的乙醇溶液為洗脫液，得到體積分?jǐn)?shù)為70%的乙醇洗脫物75 g，該洗脫物用硅膠柱色譜進(jìn)行分離，經(jīng)氯仿-甲醇（100∶0→100∶5，V∶V）→氯仿-甲醇-水（10∶3∶1→7∶3∶1→6∶4∶1，V∶V∶V，下層）甲醇洗脫，得到5個(gè)組分（Fr.1～5）。Fraction 2（15.0 g）經(jīng)ODS柱層析[MeOHH2O（10∶90→20∶80→30∶70→40∶60→50∶50→60∶40→70∶30→100∶0，V∶V）]，共得到12個(gè)組分[Fr.2-1～12]。Fraction2-3與2-4合并（Fr.2-3+4）后，總樣取1.80 g經(jīng)制備型高效液相色譜法（PHPLC）分離制備[CH3CNH2O（15∶85，V∶V）]，得到6個(gè)組分（Fr.2-3+4-1～6）；Fraction 2-3+4-2經(jīng)PHPLC再次分離制備 [CH3CNH2O（5∶95，V∶V）]，得到苯丙氨酸（7，55.4 mg）；Fraction2-3+4-4經(jīng)制備型高效液相色譜法（PHPLC）再次分離制備 [CH3CN-H2O（6∶94，V∶V）]，得到次黃苷（4，22.1 mg）；Fraction 2-3+4-5經(jīng)PHPLC再次分離制備[CH3CN-H2O（7∶93，V∶V）]，得到左旋色氨酸（6，21.9 mg）。Fraction 2-9經(jīng) PHPLC分離制備[CH3CN-H2O（22∶78，V∶V）]，得到9個(gè)組分（Fr.2-9-1～9）。Fraction 2-9-6+7經(jīng)PHPLC分離制備[MeOHH2O（54∶46，V∶V）]，得到（E）-4-hydroxy-dodec-2-enedioic acid（1，12.7 mg）。Fraction 3（20.0 g）經(jīng)PHPLC分離制備 [MeOH-H2O（10∶90→20∶80→40∶60→60∶40→80∶20→100∶0，V∶V）]，共得到12個(gè)組分（Fr.3～12）。Fraction 3-1經(jīng) PHPLC分離制備[CH3CN-H2O（5∶95，V∶V）]，得到鳥(niǎo)苷（5，16.8 mg）。Fraction 3-3經(jīng)ODS柱層析[MeOH-H2O（10∶90→30∶70→40∶60→100∶0，V∶V）]共得到4個(gè)組分（Fr.3-3-1～4）。Fraction 3-3-1通過(guò)硅膠柱層析[CHCl3-MeOH-H2O（10∶3∶1→7∶3∶1→6∶4∶1，V∶V∶V，下層）→MeOH]，得4個(gè)組分（Fr.3-3-1-1～4）。Fraction 3-3-1-1經(jīng)PHPLC分離制備[CH3CN-H2O（10∶90，V∶V）]得到益母草堿（2，25.6 mg）。

取益母草大孔樹(shù)脂水洗部分干燥粉末（100 g），溶解、過(guò)濾后得86.6 g。經(jīng)強(qiáng)酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂（300 mL，pH=1，2 mol/L NaCl）分離后得到粗生物堿樣品7.9 g。樣品經(jīng)Sephadex LH-20處理[MeOHH2O（9∶1，V∶V）]得到純化后的生物堿2.8 g。最后將純化后的生物堿經(jīng)ODS柱層析，用純水洗脫后，得到水蘇堿（3 713.5 mg）。見(jiàn)圖1。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS給出其準(zhǔn)分子離子峰m/z 243.130 2[M-H]-，確定其分子式為C12H20O5（calcd for C12H19O5，243.123 8）。1HNMR（CD3OD，500 MHz）δ：5.86（1H，d，J=15.5 Hz，H-2），6.77（1H，dd，J=1.0、15.5 Hz，H-3），4.12（1H，m，H-4），1.44（2H，m，H-5），1.25（8H，m，H-6～9），1.48（2H，m，H-10），2.19（2H，t，J=7.0 Hz，H-11）。13CNMR（CD3OD，125 MHz）δ：167.4（C-1），119.8（C-2），151.6（C-3），69.1（C-4），36.1（C-5），24.7（C-6），28.7（C-7），28.4（C-8），28.6（C-9），24.4（C-10），33.6（C-11），174.5（C-12）。上述1H-NMR和13C-NMR譜數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)[9]中報(bào)道的（E）-4-hydroxy-dodec-2-enedioic acid的數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物1為（E）-4-hydroxy-dodec-2-enedioic acid。

化合物2：白色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS給出其準(zhǔn)分子離子峰m/z 310.140 1[M-H]-，確定其分子式為C14H21N3O5（calcd for C14H20N3O5，310.140 8）。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：2.27（2H，t，J=7.0 Hz，H-3），1.75（2H，m，H-4），1.85（1H，m，H-5），4.33（2H，t，J=6.5 Hz，H-6），7.32（2H，s，H-2′，6′），3.90（6H，s，3′，5′-OCH3）。13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：158.7（C-1），42.2（C-3），26.6（C-4），27.1（C-5），65.8（C-6），119.8（C-1′），108.2（C-2′，6′），149.3（C-3′，5′），144.6（C-4′），168.5（C-7′），56.9（3′，5′-OCH3）。上述1H-NMR和13C-NMR譜數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)[10]中報(bào)道的益母草堿的數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物2為益母草堿（leonurine）。

圖1 益母草中分離得到的化合物

化合物3：白色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS給出其準(zhǔn)分子離子峰m/z 178.062 7[M+Cl]-，確定其分子式為C7H13NO2（calcd for C7H13NO2Cl，178.064）。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：4.55（1H，dd，J=9.0、10.5 Hz，H-2），[2.44（1H，m），2.61（1H，m），H2-3）]，2.23（2H，m，H2-4），[3.67（1H，br.dd，ca.J=10、12 Hz），3.81（1H，ddd，J=3.5、8.5、11.5 Hz），H2-5]，3.20（3H，s，1-NCH3），3.40（3H，s，1-NCH3）。13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：74.6（C-2），25.9（C-3），19.9（C-4），69.0（C-5），168.4（C-6），52.9（1-NCH3），46.9（1-NCH3）。上述1H-NMR和13C-NMR譜數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)[11]中報(bào)道的水蘇堿的數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物3為水蘇堿（stachydrine）。

化合物4：白色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS給出其準(zhǔn)分子離子峰m/z 267.074 3[M-H]-，確定其分子式為C10H12N4O5（calcd for C10H11N4O5，310.140 8）。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：8.14（1H，s，H-2），8.35（1H，s，H-8），5.89（1H，d，J=6.0 Hz，H-1′），4.15（1H，t，J=6.0 Hz，H-2'），4.62（1H，t，J=6.0 Hz，H-3′），3.98（1H，m，H-4′），[3.56（1H，dd，J=3.0、12.0 Hz），3.67（1H，dd，J=3.0、12.0 Hz），H2-5′]。13C-NMR（DMSO-d6，125 MHz）δ：152.3（C-2），149.0（C-4），156.0（C-6），139.8（C-8），87.8（C-1′），70.6（C-2′），73.4（C-3′），85.8（C-4′），61.6（C-5′）。上述1H-NMR和13C-NMR譜數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)[12]中報(bào)道的次黃苷的數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物4為次黃苷（hypoxanthine-9-β-D-ribofuranoside）。

化合物5：白色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS給出其準(zhǔn)分子離子峰m/z 282.083 8[M-H]-，確定其分子式為C10H13N5O5（calcdforC10H12N5O5，282.0844）。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：7.93（1H，br.s，H-8），5.70（1H，d，J=5.5 Hz，H-1′），4.07（1H，t，J=5.5 Hz，H-2′），4.40（1H，t，J=5.5 Hz，H-3′），3.87（1H，m，H-4′），[3.52（1H，dd，J=3.0、12.0 Hz），3.61（1H，dd，J= 3.0、12.0 Hz），H2-5′]。13C-NMR（DMSO-d6，125 MHz）δ：153.6（C-2），151.2（C-4），116.6（C-5），156.7（C-6），135.5（C-8），86.2（C-1′），70.2（C-2′），73.5（C-3′），85.1（C-4′），61.3（C-5′）。上述1H-NMR和13CNMR譜數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)[13]中報(bào)道的鳥(niǎo)苷的數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物5為鳥(niǎo)苷（guanosine）。

化合物6：白色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS給出其準(zhǔn)分子離子峰m/z 203.082 3[M-H]-，確定其分子式為C11H12N2O2（calcdforC11H11N2O2，203.0826）。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：7.26（1H，br.s，H-2），7.59（1H，d，J=8.0 Hz，H-5），6.96（1H，dd，J=8.0、8.0 Hz，H-6），7.05（1H，dd，J=8.0、8.0 Hz，H-7），[3.05（1H，dd，J=8.5、15.0 Hz），3.33（1H，dd，J=3.0、15.0 Hz），H2-10]，3.57（1H，dd，J=3.0、8.5 Hz，H-11）。13C-NMR（DMSO-d6，125 MHz）δ：124.2（C-2），109.2（C-3），118.1（C-4），120.7（C-5），118.3（C-6），111.3（C-7），26.9（C-8），54.6（C-9），127.2（C-4′），136.2（C-7′）。上述1H-NMR和13C-NMR譜數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)[14]中報(bào)道的左旋色氨酸的數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物6為左旋色氨酸（L-tryptophan）。

化合物7：白色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS給出其準(zhǔn)分子離子峰m/z 164.070 5[M-H]-，確定其分子式為C9H11NO2（calcd for C9H10NO2，164.017 1）。1H-NMR（CD3OD，500MHz）δ：3.97（1H，dd，J=5.0、8.0Hz，H-2），[3.11（1H，dd，J=8.0、14.0 Hz），3.29（1H，dd，J= 5.0、14.5 Hz），H2-3）]，7.32（2H，br.d，ca.J=8 Hz，H－5，9），7.41（2H，br.d，ca.J=8 Hz，H-6，8），7.37（1H，m，H-7）。13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：174.8（C-1），57.1（C-2），37.5（C-3），136.2（C-4），130.4（C-5，9），130.1（C-6，8），128.7（C-7）。上述1H-NMR和13CNMR譜數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)[15]中報(bào)道的苯丙氨酸的數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物7為苯丙氨酸（phenylalanine）。

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Study on chemical constituents of Leonurus japonicus Houtt.Ⅲ

DENG Shen,LIU Li-li,CHEN Yue,LI Xiao-xia,WANG Tao,ZHANG Yi
（Key Laboratory of Traditional Chinese Medicinal Chemistry and Ana lytical Chemistry of Tianjin, Tianjin 300193,China）

[Objective]To investigate the chemical components of the herb Leonurus japonicus Houtt.Ⅲ.[Methods]The chemical components were obtained by chromatographies,such as silica gel,ODS,Sephadex LH-20 and HPLC.They were identified by the chemical and physical methods,especially spectral analysis.[Results]Seven compounds were obtained and identified as(E)-4-hydroxy-dodec-2-enedioic acid(1),leonurine(2),stachydrine(3), hypoxanthine-9-β-D-ribofuranoside (4),guanosine (5),L-tryptophan (6),and phenylalanine (7),respectively.[Conclusion]Compounds 1,4,5,and 7 are the obtained species firstly.

Leonurus japonicus Houtt.;chemical component;structural elucidation

R284

：A

：1673－9043（2014）06－0362-04

2014-07-11）

10.11656/j.issn.1673-9043.2014.06.12

國(guó)家自然基金項(xiàng)目（81202995）；國(guó)家科技重大專(zhuān)項(xiàng)項(xiàng)目-重大新藥創(chuàng)制（2011ZX09307-002-01）；新世紀(jì)優(yōu)秀人才支持計(jì)劃資助（NCET-12-1069，NCET-10-0958）。

鄧 屾（1988-），男，碩士，主要從事中藥化學(xué)研究。

張 祎，E-mail：zhwwxzh@263.net。