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    腺病毒疫苗研究進(jìn)展

    2014-04-09 07:03:48王芃周建光
    生物技術(shù)通訊 2014年2期
    關(guān)鍵詞:衣殼表位腺病毒

    王芃,周建光

    軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院 生物工程研究所,醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室,北京 100850

    腺病毒是一種無包膜的雙鏈DNA病毒,相對分子質(zhì)量為1.5×108,直徑約為95 nm,是已知最大和最復(fù)雜的無包膜DNA病毒之一。每個腺病毒均由外部的衣殼蛋白和內(nèi)部的核心蛋白組成。核心蛋白包括蛋白Ⅴ、Ⅶ和Ⅹ,它們與病毒基因組結(jié)合;末端蛋白TP與病毒DNA的5'端共價(jià)結(jié)合;圍繞著病毒核心的是病毒的衣殼,它是由7種蛋白(Ⅱ、Ⅲ、Ⅲa、Ⅳ、Ⅵ、Ⅷ和Ⅸ)通過非共價(jià)相互作用形成的二十面體對稱結(jié)構(gòu),其中240個三聚六鄰體(蛋白Ⅱ)是該20面體的主要組成蛋白。人類的腺病毒目前已鑒定出53個血清型,根據(jù)它們的血凝反應(yīng)、對嚙齒類動物的致瘤性、DNA的同源性和基因組的結(jié)構(gòu),分為A、B、C、D、E、F、G亞屬,B亞屬又分為B1和B2組[1]。各個亞屬的腺病毒的致病性是不同的,B1、C和E亞屬引起呼吸道感染,B2亞屬引起腎臟和泌尿道的感染,F(xiàn)亞屬引起胃腸炎,D亞屬的部分血清型與流行性角膜結(jié)膜炎有關(guān)。

    1 國內(nèi)外腺病毒疫苗研究進(jìn)展

    1.1 國外研究進(jìn)展

    在近50年的時間里,腺病毒是美軍現(xiàn)役軍人尤其是基層受訓(xùn)官兵重癥呼吸道疾病的主要病原體,而其中4型和7型腺病毒是主要的感染血清型。鑒于此,1971~1996年,美國國防部聯(lián)合國家衛(wèi)生署和Wyeth公司開發(fā)了口服4型和7型腺病毒疫苗,經(jīng)胃腸給藥途徑可以激發(fā)受試者血清抗體,多年接種結(jié)果證實(shí)該疫苗是安全的,沒有觀察到病毒間的交叉反應(yīng),而且該疫苗項(xiàng)目的接種實(shí)施在軍隊(duì)中顯著降低了腺病毒的致病和死亡人數(shù)。然而自從該疫苗接種項(xiàng)目結(jié)束后,腺病毒造成的死亡人數(shù)又重新回升,因此2011年腺病毒疫苗接種項(xiàng)目又重新啟動[2-3]。對4型和7型腺病毒的疫苗株和原型株的基因組測序、生物信息學(xué)分析和比對已經(jīng)完成[4-6]。基因組的進(jìn)化分析表明,E屬4型腺病毒的原型株在進(jìn)化樹上與黑猩猩腺病毒有著較近的親緣關(guān)系,而與其他已知腺病毒的親緣性較遠(yuǎn),它可能起源于一系列由黑猩猩傳染到人的人畜共患病事件;4型腺病毒疫苗株的基因組與原型株相差不大,有6個位點(diǎn)的非配對和4個位點(diǎn)的插入缺失,7型腺病毒疫苗株和原型株相比有611個位點(diǎn)非配對和130個位點(diǎn)插入缺失。

    4型和7型腺病毒疫苗的安全性已在大量美軍人群中得以驗(yàn)證,研究者又對它們作為外源抗原呈遞載體進(jìn)行了嘗試。最初將它們用來表達(dá)乙肝病毒抗原,將包含乙肝抗原表位gp27和p24的表達(dá)盒子插入腺病毒的末端序列區(qū),在A549細(xì)胞系中這些乙肝抗原得到了較好的表達(dá),將表達(dá)乙肝抗原的重組7型腺病毒對狗進(jìn)行免疫后,獲得了針對乙肝抗原和7型腺病毒的較高的血清陽轉(zhuǎn)率[7],說明用這2種疫苗株表達(dá)外源抗原的思路是可行的。隨后針對在人群中具有較快傳播速率和較高致死率的流感病毒H5N1,將其凝血素基因HA替換并插入4型腺病毒疫苗的E3區(qū),得到了重組腺病毒流感疫苗Ad4-H5-Vtn,經(jīng)小鼠鼻飼免疫后可引發(fā)特異性的體液和細(xì)胞免疫,并在致死劑量的H5N1攻擊小鼠時對動物起到了保護(hù)作用[8]。隨后,研究者對該疫苗進(jìn)行了臨床Ⅰ期試驗(yàn),將Ad4-H5-Vtn進(jìn)行了間隔56 d的3次口服免疫,最后受試者接受了90 μg滅活H5N1疫苗的肌肉注射加強(qiáng)免疫,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明口服高滴度Ad4-H5-Vtn的受試人群血清全部轉(zhuǎn)為抗HA陽性,說明通過口服該疫苗可以增強(qiáng)HA抗體的產(chǎn)生,克服現(xiàn)有滅活流感病毒疫苗免疫效果不佳的缺陷[9]。

    1.2 國內(nèi)研究進(jìn)展

    在我國的流行病學(xué)調(diào)研中,腺病毒在人群尤其是少年兒童中引發(fā)的感染主要為急性呼吸道感染疾病和肺炎,我國流行的腺病毒肺炎多數(shù)由3型及7型腺病毒引起,并且臨床上7型重于3型。近年來,周榮研究團(tuán)隊(duì)對3型和7型腺病毒疫苗的構(gòu)建做了一系列嘗試。首先,他們構(gòu)建了E1區(qū)缺失的復(fù)制缺陷型3型腺病毒,又構(gòu)建了可以表達(dá)E1蛋白的HEp2細(xì)胞系HEp-2/E1,將E1缺陷的3型腺病毒轉(zhuǎn)染到HEp-2/E1中,出現(xiàn)了典型的病毒感染導(dǎo)致的細(xì)胞病變效應(yīng)(CPE),并觀察到了報(bào)告基因綠色熒光蛋白的表達(dá)[10]。然后,他們運(yùn)用細(xì)菌的同源重組機(jī)制,將全長3型腺病毒構(gòu)建在質(zhì)粒上,使其可以在大腸桿菌中穩(wěn)定存在,并可以在體外通過同源重組或傳統(tǒng)的基因克隆的方法方便地實(shí)現(xiàn)對3型腺病毒基因組的改造,通過這樣的方法將GFP基因插入腺病毒的E3區(qū),證明GFP可以表達(dá),將這種重組3型腺病毒通過肌肉注射、灌胃和鼻飼三種途徑免疫小鼠,均可以在小鼠體內(nèi)引發(fā)針對eGFP的特異抗體[11]。這2項(xiàng)研究證明了3型腺病毒作為減毒疫苗和外源抗原呈現(xiàn)載體的可能性。為了研制3型和7型雙價(jià)腺病毒疫苗,周榮等通過生物信息學(xué)方法預(yù)測了3型和7型腺病毒的位于六鄰體高變區(qū)(HVR)的各4個中和表位,并構(gòu)建了8種嵌合型腺病毒載體,為雙價(jià)疫苗的研制奠定了基礎(chǔ),并表明3型腺病毒的六鄰體高變區(qū)是病原體表位呈現(xiàn)的良好靶點(diǎn)[12]。隨后研究者將手足口病毒EV71衣殼蛋白上的15個氨基酸的表位SP70整合到3型腺病毒的六鄰體的高變區(qū)上,動物實(shí)驗(yàn)表明SP70重組腺病毒可以引發(fā)高滴度的IgG抗體,并使動物對EV71病毒具有保護(hù)作用[13]。以上研究結(jié)果表明,我國在3型和7型腺病毒疫苗的研究上已有一定深度,并在積極拓展其在抗原呈遞載體中的作用。

    2 以腺病毒為載體的疫苗

    2.1 腺病毒作為抗原呈遞載體的優(yōu)勢

    腺病毒本身既可作為疫苗,也可作為外源基因遞送載體。腺病毒作為基因遞送載體的優(yōu)勢包括:①宿主范圍廣,對人致病性低,不整合到染色體中,無插入致突變性;②對增殖和非增殖細(xì)胞都可以感染;③腺病毒重組載體的構(gòu)建和在懸浮細(xì)胞中的大規(guī)模培養(yǎng)已有較成熟的技術(shù)路線,而且成本低廉,病毒滴度高[14-15];④與人類基因組同源;⑤在不同的劑型配方下,腺病毒載體疫苗可在4℃液體緩沖液中保存[16],或以凍干粉形式存在1年以上[17],而新近研究出的熱穩(wěn)定技術(shù)可以使腺病毒載體在高達(dá)45℃的室溫下保存6個月而其侵染活性少有下降[18];⑥腺病毒自身具有免疫佐劑的功能,可以激發(fā)機(jī)體天然免疫反應(yīng)[19],因此更加易于操作并能夠降低生產(chǎn)成本;⑦腺病毒載體疫苗可以有多種給藥途徑[20-23],它可以侵染不同類型的細(xì)胞和組織,可以侵染分化和未分化細(xì)胞,甚至包括抗原提呈細(xì)胞[24]。

    5型腺病毒是常見的用于疫苗構(gòu)建和基因治療的載體,基于5型腺病毒重組載體的研究經(jīng)歷了大致3代的完善。第一代腺病毒載體是將E1或E1和E3片段同時缺失,該類型腺病毒可容納高達(dá)8 kb的外源基因,是目前各種腺病毒載體中應(yīng)用最廣的;第二代腺病毒載體是在第一代缺失E1或E3基因的基礎(chǔ)上進(jìn)一步將E2和E4基因缺失掉,從而降低載體的毒性,增加其外源基因的裝載容量,提高其在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)水平,但E2或E4區(qū)編碼的蛋白對細(xì)胞有害,從而難以建立反式提供E2或E4區(qū)編碼蛋白的穩(wěn)定細(xì)胞株,導(dǎo)致重組病毒的制備比較困難,因此限制了其應(yīng)用;第三代腺病毒載體是輔助病毒依賴性的腺病毒載體(HDAd),它除了保留有病毒必需的順式作用元件外,其余幾乎所有的病毒編碼序列都缺失掉了。盡管第二代和第三代的腺病毒載體避免了抗載體免疫反應(yīng),并且具有更優(yōu)的免疫效果,但它們在大規(guī)模生產(chǎn)和臨床應(yīng)用上還存在很多困難。

    2.2 腺病毒載體存在的主要問題和解決方案

    腺病毒用于疫苗構(gòu)建時面臨的最大問題就是預(yù)存免疫(pre-existing immunity)的存在,即由于5型腺病毒在環(huán)境中很常見,人群中容易產(chǎn)生抗腺病毒的免疫反應(yīng),而這將會極大地降低腺病毒載體疫苗在人體中的效價(jià)。人們想出了很多策略來克服預(yù)存免疫的問題,這些策略包括兩大類:一類是化學(xué)法,即用聚乙二醇(PEG)等化學(xué)試劑包裹腺病毒,屏蔽其抗原表位,從而逃逸宿主的免疫作用,但此類方法難以獲得高滴度的病毒,在實(shí)際應(yīng)用時有較大難度;另一類就是采用基因工程的方法對腺病毒進(jìn)行修飾,這些方法主要包括構(gòu)建嵌合體修飾的5型腺病毒衣殼、構(gòu)建嵌合型的腺病毒、將基于5型腺病毒的疫苗完全替換為其他稀有的(來自人類或非人類的)腺病毒血清型。為了應(yīng)對人體已有的免疫原性,出現(xiàn)了一批5型腺病毒載體的替代品,包括基于稀有血清型人腺病毒(如Ad11、Ad26、Ad35、Ad48、Ad49、Ad50等)和非人類腺病毒載體如大猩猩Ads、牛Ad3、狗Ad2、豬Ad3等。但有數(shù)據(jù)表明,不管是來源于稀有人血清型的腺病毒載體還是大猩猩的腺病毒載體,其所帶的外源基因引發(fā)的特異性抗體反應(yīng)強(qiáng)度均顯著低于由5型腺病毒載體[25-27]攜帶所激發(fā)的免疫反應(yīng)。并且,由于已感染5型腺病毒而存在的特異的CD4+和CD8+T細(xì)胞對于大猩猩重組腺病毒疫苗效價(jià)的發(fā)揮仍有不利的影響[28-29]。

    2.3 將外源抗原呈現(xiàn)在腺病毒衣殼的研究進(jìn)展

    六鄰體是腺病毒衣殼中含量最高的蛋白,也被認(rèn)為是中和抗體的主要靶點(diǎn)。在克服預(yù)存免疫的策略中,很多都是針對六鄰體進(jìn)行設(shè)計(jì)的。最初的設(shè)計(jì)通過將5型腺病毒的六鄰體基因替換為3型腺病毒的六鄰體,該嵌合型腺病毒可以在293細(xì)胞中進(jìn)行包裝復(fù)制,并且用其感染小鼠后可以避免5型腺病毒預(yù)存免疫的影響,但這種嵌合型5型腺病毒的缺點(diǎn)在于與野生型相比它的復(fù)制速率降低,而且病毒滴度下降了一個數(shù)量級[30]。在六鄰體蛋白三聚體結(jié)構(gòu)的塔尖區(qū)域中有7個HVR,包含型特異性表位。針對此,設(shè)計(jì)了一種新型的5型腺病毒嵌合型載體,其中位于5型腺病毒六鄰體的7個HVR被相應(yīng)的來自罕見血清型腺病毒Ad48的HVR所代替,這種HVR嵌合型的5型腺病毒載體可進(jìn)行高滴度的包裝并在體外穩(wěn)定傳代;在裸鼠和恒河猴的實(shí)驗(yàn)中,用這種新型嵌合型載體表達(dá)猴免疫缺陷病毒(SIV)的Gag抗原與母本腺病毒載體相比具有相似的免疫原性,而且在高水平的抗5型腺病毒免疫預(yù)存存在時,沒有觀察到嵌合型載體的外源抗原免疫原性下降,然而母本腺病毒載體的抗原免疫原性則被抑制了。該研究證明構(gòu)建六鄰體HVR區(qū)的嵌合體腺病毒載體是克服預(yù)存免疫的有效方法[31]。

    五鄰體是腺病毒衣殼的重要組成部分,它們組成了衣殼的頂角并與六鄰體和纖毛蛋白相互作用。五鄰體的2個高變的環(huán)區(qū)暴露于衣殼表面,在不同的腺病毒血清型中,一個稱為高變區(qū)1(HRV1 loop),另外一個因具有與腺病毒次級受體整合素結(jié)合的RGD motif而被稱為RGD loop,不同血清型腺病毒的HVR1和RGD loop的長度都有明顯的變化。實(shí)驗(yàn)證明五鄰體上的這些環(huán)區(qū)的表位是除六鄰體外又一個有重要意義的靶點(diǎn),對這些區(qū)域進(jìn)行修飾,可以改變腺病毒的組織嗜性[32]。

    腺病毒的12根纖毛的近端在二十面體腺病毒的十二頂點(diǎn)處插入五鄰體基座,其遠(yuǎn)端纖毛突起形成球狀結(jié)構(gòu)域,該纖突位點(diǎn)是與細(xì)胞受體的主要作用位點(diǎn)。有研究證明,經(jīng)免疫接種和自然免疫獲得的5型腺病毒的中和抗體同時靶定于六鄰體和纖毛上,對免疫接種小鼠、免疫接種人群和自然暴露人群的血清實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),針對腺病毒宿主產(chǎn)生的中和抗體中很大一部分是針對六鄰體的,但也有一部分是靶向纖毛的。鑒于此,研究者將5型腺病毒的六鄰體7個HVR區(qū)和纖突區(qū)都替換為黑猩猩腺病毒AdC68的相應(yīng)基因片段,由此構(gòu)建的新型嵌合型5型腺病毒載體經(jīng)體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證明,幾乎可以完全逃逸5型腺病毒特異的中和抗體[33]。為進(jìn)一步探索將腺病毒纖毛蛋白作為抗原展示位點(diǎn)的可行性,研究者將銅綠假單胞菌外膜蛋白OprF的14個氨基酸的第8表位Epi8展示在5型腺病毒的5個不同的纖毛位點(diǎn)(loopCD、loopDE、loopFG、loopHI、纖毛的C端)上,以及六鄰體第5 HVR的環(huán)區(qū),并與將全長OprF表達(dá)在5型腺病毒上的重組載體相比較。將這些疫苗候選株肌肉注射免疫小鼠后,發(fā)現(xiàn)構(gòu)建于loopFG和loopHI的腺病毒疫苗候選株可以激發(fā)最強(qiáng)的抗OprF的體液免疫和細(xì)胞免疫反應(yīng),并且在5型腺病毒預(yù)存免疫存在時,基于loopFG和loopHI的腺病毒疫苗株依然可引發(fā)對銅綠假單胞菌的免疫保護(hù)作用[34],這說明將抗原表位整合在腺病毒的纖毛區(qū)是一種可行的疫苗設(shè)計(jì)策略。

    以六鄰體、五鄰體和纖毛作為修飾靶點(diǎn)構(gòu)建疫苗候選株雖然得到了較好的體內(nèi)和體外的免疫效果,但囿于這些位點(diǎn)臨近區(qū)域的序列和結(jié)構(gòu)保守性,因此只能展示最大不超過100個氨基酸殘基的線性表位。近年來的研究表明,用腺病毒衣殼上的輔助小蛋白Ⅸ作為展示平臺,可以表達(dá)1000個氨基酸殘基的外源抗原。蛋白Ⅸ在腺病毒的每個殼面存在12個拷貝,可穩(wěn)定六鄰體蛋白間的相互作用,是病毒包裝的必需成分。研究者將單純皰疹病毒胸苷激酶HSV-TK聯(lián)合螢光素酶構(gòu)建在腺病毒的蛋白Ⅸ區(qū),通過正電子發(fā)射斷層顯像技術(shù)(PET),在體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中證實(shí)了螢光素酶的表達(dá)[35]。然后,又有研究者將比較大的肽段如單鏈抗體(scFV)和單域抗體(sdAB)表達(dá)于腺病毒蛋白Ⅸ的C端,從而實(shí)現(xiàn)了腺病毒的重定位,但該研究者指出,在scFV表達(dá)時,由于蛋白無法正確折疊會影響其功能的發(fā)揮[36]。在用于疫苗的研究方面,研究者將泡沫病毒(FV)的包膜蛋白gp70與5型腺病毒的蛋白Ⅸ相融合,使gp70不僅可以呈現(xiàn)在病毒載體表面,并且可在體內(nèi)實(shí)現(xiàn)它的表達(dá),實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)這種將呈現(xiàn)和體內(nèi)表達(dá)相結(jié)合的疫苗設(shè)計(jì),可以使受試小鼠中和抗體滴度和CD4+T細(xì)胞反應(yīng)增強(qiáng)[37]。

    綜上所述,六鄰體的HVR區(qū)是引發(fā)腺病毒型特異性中和抗體結(jié)合的主要靶點(diǎn),在針對腺病毒的預(yù)存免疫進(jìn)行應(yīng)對策略和構(gòu)建多價(jià)腺病毒疫苗時,對該區(qū)域的基因修飾是不二選擇;五鄰體的2個高變區(qū)HVR1 loop和RGD loop,以及纖毛的HI loop和C端是進(jìn)行抗原表位展示的理想靶點(diǎn);在插入多肽抗原和分子較大的外源蛋白時可以嘗試輔助蛋白Ⅸ位點(diǎn)。有研究者將流感病毒血凝素HA表位分別整合在5型腺病毒載體衣殼的六鄰體HVR5區(qū)、五鄰體的RGD loop、纖突的HI loop和蛋白Ⅸ的C端構(gòu)建了疫苗候選株,通過用等量的病毒顆粒(會生成不同HA表位拷貝數(shù))和不同量的病毒顆粒(生成等量的HA拷貝數(shù))對3種不同品系的小鼠進(jìn)行免疫接種,結(jié)果發(fā)現(xiàn)不管是何種病毒量,也不管是何種品系的小鼠,表達(dá)在纖突上的HA表位都具有最好的體液免疫和細(xì)胞免疫效果[38]。該研究結(jié)果說明插入腺病毒衣殼蛋白的抗原表位引起的免疫反應(yīng)強(qiáng)弱不一定取決于所在衣殼蛋白區(qū)域的拷貝數(shù),體內(nèi)實(shí)驗(yàn)才能最終說明實(shí)際的免疫效果。

    3 結(jié)語

    腺病毒自身作為疫苗和作為疫苗載體都有很高的科研和臨床應(yīng)用價(jià)值。但預(yù)存免疫的存在、病毒本身毒性降低的同時實(shí)現(xiàn)外源基因插入量的擴(kuò)大,以及大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)這3個因素都是限制其實(shí)際生產(chǎn)應(yīng)用的主要問題。目前對腺病毒衣殼蛋白的修飾是腺病毒疫苗構(gòu)建的主要策略,通過了解衣殼蛋白的基因嵌入靶點(diǎn)的特性,并結(jié)合外源抗原和表位的特點(diǎn),通過合理的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),相信腺病毒將會成為十分有前途的疫苗和抗原呈遞載體。

    [1] Smith J G,Wiethoff C M,Stewart P L,et al.Adenovirus[J].Curr Top Microbiol Immunol,2010,343(16):195-224.

    [2] Lyons A,Longfield J,Kuschner R,et al.A double-blind,pla?cebo-controlled studyofthesafetyand immunogenicityof live,oral type 4 and type 7 adenovirus vaccines in adults[J].Vaccine,2008,26(2008):2890-2898.

    [3] Potter R,Cantrell G A,Mallak C T,et al.Adenovirus-associ?ated deaths in US military during postvaccination period,1999-2010[J].Emerg Infect Dis,2012,18(3):507-509.

    [4] Purkayastha A,Su J,McGraw J,et al.Genomic and bioinfor?matics analyses of HAdV-4vac and HAdV-7vac,two human adenovirus(HAdV)strains that constituted original prophylaxis against HAdV-related acute respiratory disease,a reemerging epidemic disease[J].J Clin Microbiol,2005,43(7):3083-3094.

    [5] Purkayastha A,Su J,McGraw J,et al.Genomic and bioinfor?maticsanalysisofHAdV-4,a human adenoviruscausing acute respiratory disease:implications for gene therapy and vaccine vector development[J].J Virol,2005,79(4):2559-2572.

    [6] Purkayastha A,Su J,McGraw J,et al.Genomic and bioinfor?matics analysis of HAdV-7,a human denovirus of species B1 that causes acute respiratory disease:implications for vec?tor development in human gene therapy[J].Virology,2005,332(2005):114-129.

    [7] Mason B B,Davis A R,Brat B M,et al.Adenovirus vaccine vectorsexpressing hepatitisB surface antigen:Importance of regulatory elements in the adenovirus major late intron[J].Vi?rology,1990,177(2):452-461.

    [8] Alexander J,Ward S,Mendy J,et al.Pre-clinical evaluation of a replication-competent recombinant adenovirus serotype 4 vaccine expressing influenza H5 hemagglutinin[J].PLoS One,2012,7(2):e31177-e31187.

    [9] Gurwith M,Lock M,Taylor E M,et al.Safety and immunoge?nicity of an oral,replicating adenovirus serotype 4 vector vac?cine for H5N1 infl uenza:a andomised,double-blind,place?bo-controlled,phase 1 study[J].Lancet Infect Dis,2013,13(2013):238-250.

    [10]Li H,Zhou R,Chen J X,et al.A recombinant replication-de?fective human adenovirus type 3:a vaccine candidate[J].Vac?cine,2009,27(2009):116-122.

    [11]Zhang Q W,Su X B,Seto D,et al.Construction and charac?terization of a replication-competent human adenovirus type 3-based vector as a live-vaccine candidate and a viral delivery vector[J].Vaccine,2009,27(2009):1145-1153.

    [12]Qiu H L,Li X,Tian X G,et al.Serotype-specific neutraliz?ing antibody epitopes of human adenovirus type 3(HAdV-3)and HAdV-7 reside in multiple hexon hypervariable regions[J].J Virol,2012,86(15):7964-7975.

    [13]Tian X G,Su X B,Li X,et al.Protection against enterovi?rus 71 with neutralizing epitope incorporation within adenovi?rus type 3 hexon[J].PLoS One,2012,7(7):e41381-e41395.

    [14]Tang D C,Zhang J F,Toro H,et al.Adenovirus as a carrier for the development of influenza virus-free avian influenza vaccines[J].Expert Rev Vaccines,2009,8(4):469-481.

    [15]Kovesdi I,Hedly S J.Adenoviral producer cells[J].Viruses,2010,2(8):1681-1703.

    [16]Croyle M A,Cheng X,Wilson J M.Development of stable liquid formulations for adenovirus-based vaccine[J]s.J Pharma?col Sci,2001,93(10):2458.

    [17]Croyle M A,Cheng X,Wilson J M.Development of formula?tions that enhance physical stability of viral vector for gene therapy[J].Gene Ther,2001,8:1281-1290.

    [18]Robert A,Cottingham M G,Rollier C S,et al.Long-term thermostabilization of live poxviral and adenoviral vaccine vec?tors at supraphysiological temperatures in carbohydrate glass[J].Sci Transl Med,2010,2(19):19ra12-19ra19.

    [19]Frenkel V M,Lengagne R,Gaden F,et al.Adenovirus hexon protein is a potent adjuvant for activation of a cellular im?mune response[J].J Virol,2002,76(1):127-135.

    [20]Wei C J,Boyington J C,McTamney P M,et al.Induction of broadly neutralizing H1N1 influenza antibodies by vaccination[J].Science,2010,329(27):1060-1064.

    [21]Hashem A M,Jaentschke B,Gravel C,et al.Subcutaneous immunization with recombinant adenovirus expressing influen?za A nucleoprotein protects mice against lethal viral challenge[J].Hum Vac Immunother,2012,8(4):425-430.

    [22]Song K,Bolton D L,Wei C J,et al.Genetic immunization in the lung induces potent local and systemic immune re?sponses[J].Proc NatlAcad SciUSA,2010,107(51):22213-22218.

    [23]Roy C J,Ault A,Sivasubramani S K,et al.Aerosolized ade?novirus-vectored vaccine asan alternative vaccine delivery method[J].Resp Res,2011,12(1):153-159.

    [24]Tutykhina I L,Logunov D Y,Shcherbinin D N,et al.Devel?opment of adenoviral vector-based mucosal vaccine against in?fluenza[J].J Mol Med 2011,89(2001):331-341.

    [25]Abbink P,Lemckert A A C,Ewald B A,et al.Comparative seroprevalence and immunogenicity of six rare serotype recom?binant adenovirus vaccine vectors from subgroups B and D[J].J Virol,2007,81(9):4654-4663.

    [26]Chen H,Xiang Z Q,Li Y,et al.Adenovirus-based vaccines:comparison of vectors from three species of adenoviridae[J].J Virol,2010,84(20):10522-10532.

    [27]Wang L,Cheng C,Ko S Y,et al.Delivery of human immuno?deficiency virus vaccine vectors to the intestine induces en?hanced mucosalcellularimmunity[J].J Virol,2009,83(14):7166-7175.

    [28]Fitzgerald J C,Gao G P,Sandoval A R et al.A simian repli?cation-defective adenoviral recombinant vaccine to HIV-1 Gag[J].J Immunol,2003,170(3):1416-1422.

    [29]Frahm N,DeCamp A C,Friedrich D P,et al.Human adeno?virus-specific T cells modulate HIV-specific T cell responses to an Ad5-vectored HIV-1 vaccine[J].J Clin Invest,2012,122(1):359-367.

    [30]Wu H,Dmitrieve I,Kashentseva E,et al.Construction and characterization of adenovirus serotype 5 packaged by sero?type 3 hexon[J].J Virol,2002,76(24):12775-12782.

    [31]Roberts D M,Nanda A,Havenga M J E,et al.Hexon-chi?maeric adenovirus serotype 5 vectors circumvent pre-existing anti-vector immunity[J].Nature,2006,441(11):239-243.

    [32]Madisch I,Hofmayer S,Moritz C,et al.Phylogenetic analysis and structural predictions of human adenovirus penton pro?teins as a basis for tissue-specific adenovirus vector design[J].J Virol,2007,81(15):8270-8281.

    [33]Bradley R R,Lynch D M,Iampietro M J,et al.Adenovirus serotype 5 neutralizing antibodies target both hexon and fiber following vaccination and natural infection[J].J Virol,2011,86(1):625-629.

    [34]Sharma A,Krause A,Xu Y,et al.Adenovirus-based vaccine with epitopes incorporated in novel fiber sites to induce pro?tective immunity againstPseudomonas aeruginosa[J].PLOS One,2013,8(2):e56996-e57004.

    [35]Matthews Q L,Sibley D A,Wu H,et al.Genetic incorpora?tion of a herpes simplex virus type 1 thymidine kinase and firefly luciferase fusion into the adenovirusprotein IX for functional display on the virion[J].Mol Imagin,2006,5(4):510-519.

    [36]Poulin K L,Lanthier R M,Smith A C,et al.Retargeting of adenovirus vectors through genetic fusion of a single-chain or single-domain antibody to capsid protein IX[J].J Virol,2010,84(19):10074-10086.

    [37]Bayer W,Tenbusch M,Lietz R,et al.Vaccination with an ad?enoviral vector that encodes and displays a retroviral antigen induces improved neutralizing antibody and CD4+T-cell re?sponses and confers enhanced protection[J].J Virol,2010,84(4):1967-1976.

    [38]Krause A,Joh J H,Hackett N R,et al.Epitopes expressed in different adenovirus capsid proteins induce different levels ofepitope-specific immunity[J].JVirol,2006,80(11):5523-5530.

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