肝癌和肝纖維化發(fā)生EMT及相關(guān)信號通路的分子機(jī)制

湯志杰 張茂娜綜述 陳 莉?qū)徯?/p>

上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transitions，EMT)是由連接緊密、不能運(yùn)動的上皮細(xì)胞向連接疏松、具有遷移活動的間質(zhì)組織轉(zhuǎn)化的過程[1]，即上皮細(xì)胞間的游離面-基底面極性和細(xì)胞間緊密連接、黏附連接的喪失，緊接著間質(zhì)表型標(biāo)志物呈現(xiàn)表達(dá)，細(xì)胞的播散特性和能動性獲得增加，細(xì)胞向間質(zhì)表型轉(zhuǎn)化[2]。但EMT是可逆的，即間質(zhì)上皮轉(zhuǎn)化(mesenchymal-epithelial transition,MET)，MET對發(fā)生EMT的腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移至新位點(diǎn)定居并長期增殖具有重要意義[3]。EMT有三型[4-6]：Ⅰ型EMT與著床、胚胎形成和器官發(fā)育有關(guān)；Ⅱ型EMT與組織損傷和炎癥反應(yīng)有關(guān)；Ⅲ型EMT發(fā)生與癌的侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，因其基因方面傾向于克隆生長和局部腫瘤的發(fā)展，癌細(xì)胞發(fā)生EMT后增強(qiáng)了向遠(yuǎn)處侵襲和擴(kuò)散的能力，遷移到遠(yuǎn)處臟器后，癌細(xì)胞又通過MET在轉(zhuǎn)移部位形成新的病灶[4]。目前大量文獻(xiàn)[7-11]表明肝細(xì)胞惡性生長發(fā)展到肝癌，癌細(xì)胞從肝細(xì)胞肝癌脫落并獲得遷移和侵襲能力時均發(fā)生了EMT。但是目前對EMT的相關(guān)信號通路及特異性標(biāo)志物尚缺乏研究。本文綜述近年來研究肝癌及相關(guān)病變中發(fā)生EMT的意義及相關(guān)信號通路的分子機(jī)制的進(jìn)展，從分子水平理解EMT的發(fā)生與通路機(jī)制的作用，尋找肝癌發(fā)生及復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的預(yù)測標(biāo)記和干預(yù)治療靶點(diǎn)，為研究和治療肝癌發(fā)生提供新的思路。

1 與肝癌發(fā)生EMT相關(guān)信號通路的分子調(diào)節(jié)機(jī)制

新近研究發(fā)現(xiàn)改變基因和微環(huán)境的許多信號通路可以調(diào)控肝癌中EMT。目前主要的研究通路有TGF-β通路、Wnt(wingless-type)/β-catenin通路、Hodgehog通路和一些調(diào)控因子對EMT的作用[7]。

1.1 TGF-β信號通路對EMT調(diào)控

EMT的發(fā)生受許多細(xì)胞因子及微環(huán)境的調(diào)控，其中TGF-β是調(diào)控生長和分化的重要結(jié)構(gòu)的相關(guān)多肽因子家族之一，TGF-β在肝臟發(fā)育和癌癥發(fā)生的過程中具有復(fù)雜矛盾多變的作用。在肝纖維化中，由TGF-β誘導(dǎo)肝細(xì)胞發(fā)生EMT，是成纖維細(xì)胞的1個潛在來源[12]。在體內(nèi)，人肝癌細(xì)胞高表達(dá)TGF-β的mRNA和蛋白質(zhì)，在轉(zhuǎn)基因小鼠中，尿中TGF-β升高預(yù)示著肝硬化很低的生存率，TGF-β在肝中的并構(gòu)表達(dá)加速了肝癌的發(fā)生。表明肝癌細(xì)胞能夠抵抗TGF-β的抑癌作用[13]。TGF-β促進(jìn)培養(yǎng)的大鼠肝上皮細(xì)胞的自發(fā)轉(zhuǎn)化，加速了肝癌的發(fā)生。因此，腫瘤細(xì)胞可以應(yīng)答TGF-β發(fā)生EMT。

TGF-β家族成員可以在許多生物系統(tǒng)中和病理情況下啟動和維持EMT,尤其是通過重要信號通路的激活和廣泛信號網(wǎng)絡(luò)中整合的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的激活[14]。在EMT中調(diào)控參與TGF-β信號通路的主要細(xì)胞因子有：Smad蛋白、Snail蛋白、組蛋白去乙?；?(histone deacetylase-1,HDAC-1)、皮質(zhì)肌動蛋白(cortactin)、骨形成蛋白7(bone morphogenesis protein-7,BMP-7)以及Hodgehog蛋白等[6]。TGF-β通路是目前公認(rèn)的作用比較明確的誘導(dǎo)EMT的信號通路[15]。TGF-β調(diào)控下游信號通路主要通過經(jīng)典途徑(依賴Smads的通路)和非經(jīng)典途徑(不依賴Smads通路)。經(jīng)典途徑是通過TGF-β與細(xì)胞膜上的TGF-β受體結(jié)合后活化Smad2/3，再與Smad4結(jié)合，形成Smad2/3/4/復(fù)合物，發(fā)生核轉(zhuǎn)位并進(jìn)入細(xì)胞核[16]，調(diào)節(jié)各種轉(zhuǎn)錄因子通過Smad途徑并由PI3K/Akt介導(dǎo)調(diào)控EMT的發(fā)生。TGF-β作為EMT重要的誘發(fā)因子，與胞外基質(zhì)蛋白層黏連蛋白laminin，LN-5有協(xié)同作用，能誘導(dǎo)肝癌發(fā)生EMT使細(xì)胞具有浸潤性，并發(fā)生轉(zhuǎn)移。對人肝癌組織進(jìn)行免疫組化分析，在腫瘤侵襲中可以觀察到大量LN-5的表達(dá)，Snail和Slug表達(dá)上調(diào)，E-cadherin下調(diào)，β-catenin降解，腫瘤轉(zhuǎn)移。

另外，TGF-β可調(diào)控不同類型細(xì)胞的生長、分化和凋亡。雖然在肝癌細(xì)胞中EMT的發(fā)生可以抵抗TGF-β誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡作用，但是，TGF-β促進(jìn)癌細(xì)胞形態(tài)和表型改變導(dǎo)致EMT發(fā)生，其抗細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制尚不完全清楚。有證據(jù)顯示在控制TGF-β誘導(dǎo)的生長抑制和(或)凋亡的基因程序和調(diào)控EMT的基因程序之間有1個串?dāng)_，即細(xì)胞一旦接受了間質(zhì)表型，便對TGF-β的抑制作用不發(fā)生應(yīng)答[17]。然而逃避凋亡生存下來的這些細(xì)胞亞群則伴隨著形態(tài)和表型的改變發(fā)生了EMT。TGF-β的自分泌環(huán)對肝細(xì)胞發(fā)生EMT后抵抗凋亡的作用是通過上調(diào)EGFR配體的表達(dá)來實(shí)現(xiàn)的[18]。這些實(shí)驗(yàn)充分說明EMT拮抗了癌細(xì)胞凋亡?？傊琓GF-β對EMT的調(diào)控機(jī)制、發(fā)生EMT的細(xì)胞可以抵抗TGF-β誘導(dǎo)的凋亡機(jī)制需要進(jìn)一步的研究。

1.2 Wnt/β-catenin信號通路對EMT調(diào)控

Wnt(wingless-type)/β-catenin信號通路是調(diào)控EMT發(fā)生的另一條重要通路。經(jīng)典的Wnt/β-catenin信號傳導(dǎo)通路包括：配體(Wnt家族分子)，跨膜受體[Frizzled家族分子Fz、低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白5/6(LDL receptor-related proteins 5 and 6，LRP5/6)]、胞漿調(diào)節(jié)蛋白(蓬亂蛋白Dishevelled，Dsh)、大腸腺瘤樣息肉(adenomatous polyosis coli,APC)、體軸發(fā)育抑制因子(Axin)、糖原合成酶激酶-3β(Gsk-3β)、β-catenin以及核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子[T細(xì)胞因子/淋巴增強(qiáng)因子(TCF/LE)F家族][19]。Wnt受體Fz的胞外區(qū)與Wnt結(jié)合，其胞內(nèi)區(qū)作用于Dsh，而Dsh與其他蛋白一起阻斷β-catenin的降解途徑，致使β-catenin在胞質(zhì)中積累。一方面，β-catenin介導(dǎo)E-Cadherin與α-catenin相結(jié)合而介導(dǎo)細(xì)胞間黏附；另一方面，當(dāng)β-catenin積聚到一定程度后發(fā)生核轉(zhuǎn)位，與TCF/LEF相互作用，激活細(xì)胞惡化的靶基因c-myc，細(xì)胞周期蛋白D1(cyclinD1)和下游靶基因如Snail、Slug的轉(zhuǎn)錄，進(jìn)而誘導(dǎo)EMT的發(fā)生[7]。人們發(fā)現(xiàn)Wnt信號通路中的下游因子在HCC中高表達(dá)，超過10項研究發(fā)現(xiàn)HCC中伴有β-catenin突變，其他一些研究則發(fā)現(xiàn)與對照組相比，伴有β-catenin突變的癌前病變有更大的癌變風(fēng)險[20]。

1.3 Hodgehog信號通路對EMT調(diào)控

正常成人組織中Hodgehog(Hh)信號通路的活性較低，但在惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、EMT的轉(zhuǎn)化過程中被異常激活，且在低分化癌細(xì)胞中Hh信號通路活化更明顯[7]。Hh信號通路主要由分泌型糖蛋白配體Hedgehog、跨膜蛋白受體Ptched(Ptch)，跨膜蛋白Smoothened(Smo)、核轉(zhuǎn)錄因子Gli蛋白及下游靶基因組成。Hh通過自分泌及旁分泌的形式刺激腫瘤細(xì)胞生存，促成新生血管形成、促進(jìn)腫瘤細(xì)胞發(fā)生EMT，以及引導(dǎo)腫瘤向遠(yuǎn)處器官轉(zhuǎn)移[21]。Hh、Smo、Gli作為激動因子發(fā)揮正調(diào)節(jié)作用，Ptch作為抑制因子發(fā)揮負(fù)調(diào)節(jié)作用。當(dāng)缺乏啟動因子Hh蛋白時，受體Ptch與信號轉(zhuǎn)換器Smo結(jié)合并抑制Smo的活性，Gli作為轉(zhuǎn)錄效應(yīng)器被剪切修飾，以非全長的形式起轉(zhuǎn)錄抑制功能。當(dāng)Hh蛋白與Ptch結(jié)合時，Smo上的抑制效應(yīng)被解除，激活下游的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子Gli蛋白，以全長形式轉(zhuǎn)入核內(nèi)引起靶基因SIP1(ZEB2)的轉(zhuǎn)錄，調(diào)控與EMT發(fā)生有關(guān)的下游分子Twist2和Snail2的表達(dá)[21-22]，導(dǎo)致細(xì)胞存活、增殖、發(fā)生EMT。Hh信號通路可通過激活TGF-β/Smads促進(jìn)癌的浸潤和轉(zhuǎn)移，并上調(diào)基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases，MMPs)，尤其是MMP-2和MMP-9[23]；在低分化肝癌細(xì)胞中Gli1顯著激活，Hh信號通路的激活可能與EMT的發(fā)生和化療耐藥有關(guān)。作為Hh通路的特異性阻斷劑，如已被用于消除了小鼠髓母細(xì)胞瘤的HhAntag(Cur-691)[24]的小分子，環(huán)靶明(Cyclopamine)[7]等，用其阻斷Hh信號，或用SiRNA沉默肝癌細(xì)胞中的Gli1，將抑制癌細(xì)胞增殖、促進(jìn)凋亡(可能與Bcl-2的表達(dá)相關(guān))，并抑制血管形成，癌細(xì)胞的EMT現(xiàn)象和遷移能力受限[25]，并消除HCC亞群的化療耐藥。這些研究需要體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的進(jìn)一步證明。Hh信號通路可能為腫瘤的藥物治療提供另一個有效的靶點(diǎn)，值得更深入的研究。

1.4 HNF-4α/HNF-1α對EMT的調(diào)控

肝癌發(fā)生時，在肝分化過程中由肝富集轉(zhuǎn)錄因子：肝核因子4α(hepatocytes nuclear factor，HNF-4α)/HNF-1α伴侶的特定結(jié)合，控制著關(guān)鍵步驟。HNF-4α在肝細(xì)胞肝癌中的表達(dá)較鄰近的無瘤組織中的表達(dá)低。過度表達(dá)HNF-4α能抑制肝細(xì)胞肝癌的生長，并誘導(dǎo)上皮標(biāo)志物的表達(dá)，發(fā)生細(xì)胞表型轉(zhuǎn)變，這與Spagnoli等在掌狀細(xì)胞(palmate cell)中觀察的特點(diǎn)一致。在這些細(xì)胞中激發(fā)肝細(xì)胞可獲得穩(wěn)定掌狀表型的形態(tài)特點(diǎn)。HNF-4α和HNF-1α同時下調(diào)了對Snail轉(zhuǎn)錄的激活能力。Pelletier等研究也表明，HNF-1α不僅對肝細(xì)胞分化意義重大，還在肝細(xì)胞中維持上皮細(xì)胞表型起重要作用。HNF-1α抑制劑可觸發(fā)人肝癌細(xì)胞株的EMT[9]。在沉默HNF-1α的肝癌細(xì)胞中，肝細(xì)胞和上皮細(xì)胞標(biāo)志物E-cadherin、β-catenin、ZO-1、Claudins、CK18/19等的表達(dá)降低，而間充質(zhì)的標(biāo)志物Snail、Twist、vimentin、Ⅰ型膠原蛋白、TGF-β、ZEB1/2、Smad、NF-κB、ERK及P38等的表達(dá)上調(diào)[9，26]。Snail作為肝分化主導(dǎo)基因HNF-4α的轉(zhuǎn)錄抑制劑，沉默干細(xì)胞中HNF-4α后，上皮細(xì)胞重新分化。沉默肝細(xì)胞中HNF-4α后，干細(xì)胞源性特征重新獲得[27]。因此推斷Snail、HNF-4α是控制肝干細(xì)胞分化和維持的調(diào)控因子。另外，在抑制HNF-1α或伴有HNF-1α突變的肝細(xì)胞腺瘤中過度表達(dá)TGF-β，提示HNF-1α抑制可觸發(fā)人肝癌細(xì)胞株EMT的TGF-β/smad通路的激活[9]。Valdes F等[28]分離了從TGF-β誘導(dǎo)的胎鼠肝細(xì)胞凋亡中逃生下來并且發(fā)生EMT的亞群：TGF-β處理胎鼠肝細(xì)胞(TGF-β treated fetal hepatocytes，TβT-FH)和血清處理的胎鼠肝細(xì)胞(serum treated fetal hepatocytes，ST-FH)均高表達(dá)vimentin和Snail，低表達(dá)CK-18和E-cadherin。并且這兩種細(xì)胞缺乏分化標(biāo)記，如肝富集轉(zhuǎn)錄因子HNF-4α或HNF-1α，但有趣的是祖細(xì)胞高表達(dá)OV-6(OV-6蛋白在肝祖細(xì)胞、卵原細(xì)胞以及不同的肝癌細(xì)胞株中表達(dá)，但在分化成熟肝細(xì)胞中未發(fā)現(xiàn))，表現(xiàn)出肝祖細(xì)胞和一些肝癌細(xì)胞的特性。不同的實(shí)驗(yàn)方法已經(jīng)表明，在細(xì)胞發(fā)展和癌變過程中，主要發(fā)生的事件是上皮特點(diǎn)的逐漸丟失和紡錘形細(xì)胞形態(tài)(EMT)的逐漸獲得，為癌癥的發(fā)生提供了便利。

1.5 microRNA對EMT的調(diào)控

肝癌發(fā)生浸潤轉(zhuǎn)移時，肝癌發(fā)生EMT，使細(xì)胞間連接喪失，形成細(xì)胞遷移的有利結(jié)構(gòu)，癌細(xì)胞遷移能力逐漸增強(qiáng)。因此認(rèn)為EMT是癌細(xì)胞離開有序組織結(jié)構(gòu)的初始階段，是細(xì)胞釋放以致肝內(nèi)傳播或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的先決條件[12]。在TGF-β誘導(dǎo)AML12小鼠肝細(xì)胞發(fā)生EMT時，Snail1表達(dá)升高，而miR-30家族成員表現(xiàn)出顯著的下調(diào)。進(jìn)一步分析表明，miR-30可通過直接靶向預(yù)測的Snail1mRNA 3’UTR的miR-30的保守序列的結(jié)合位點(diǎn)負(fù)調(diào)控Snail1的表達(dá)。更重要的是，用miR-30b轉(zhuǎn)染AML12細(xì)胞后可顯著抑制TGF-β誘導(dǎo)的EMT[29]。通過評估細(xì)胞形態(tài)改變和Snail1的表達(dá)譜以及E-cadherin和其他成纖維細(xì)胞標(biāo)志物，證明TGF-β誘導(dǎo)EMT發(fā)生的肝細(xì)胞在轉(zhuǎn)染miR-30b后顯著抑制了肝細(xì)胞遷移，這些研究結(jié)果為理解miR-30調(diào)控EMT的作用提供了新的思路。在EMT發(fā)生時，Snail家族成員(Snail1和Snail2，即Snail和Slug表達(dá)升高)和ZEB家族成員(尤其是ZEB2)過表達(dá)[9]。p53上調(diào)miR-200和miR-192家族成員。miR-200家族成員抑制ZEB1/2的表達(dá)，miR-192家族成員抑制ZEB2的表達(dá)。因此抑制EMT的過程可由p53通過抑制轉(zhuǎn)錄因子ZEB1和ZEB2的表達(dá)來實(shí)現(xiàn)[30]。Lee等研究發(fā)現(xiàn)miR-122有較強(qiáng)的腫瘤抑制作用，在肝癌中其表達(dá)下降，上調(diào)miR-122的表達(dá)可逆轉(zhuǎn)肝癌細(xì)胞的間質(zhì)特性，從而降低癌細(xì)胞的浸潤和轉(zhuǎn)移[31]。因此推測，miR-122可作為肝癌EMT過程重要的調(diào)節(jié)器。細(xì)胞黏附的丟失和遷移能力的獲得，還有浸潤性這些特征在腫瘤進(jìn)展的EMT中均發(fā)生，并在轉(zhuǎn)錄因子中，Snail1作為與抑制E-cad轉(zhuǎn)錄密切相關(guān)的基因，在小鼠皮膚腫瘤和人乳腺癌浸潤前表達(dá)活性增強(qiáng)。Francisco Valde′ s認(rèn)為在癌細(xì)胞中，EMT反映出介導(dǎo)細(xì)胞間識別和黏附并相互耦合以維持細(xì)胞形態(tài)和極性的機(jī)制喪失，因此，深刻理解在發(fā)生細(xì)胞分化過程中激發(fā)EMT的分子機(jī)制，可為浸潤過程中的調(diào)控事件提供一個新的思路。

2 EMT在肝纖維化中的作用

最近研究發(fā)現(xiàn)在原發(fā)性膽汁肝硬化和非酒精性脂肪性肝硬化模型中，肝細(xì)胞和膽管上皮細(xì)胞可通過EMT過程轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞，參與肝纖維化的發(fā)展[8]。越來越多的研究證明肝細(xì)胞發(fā)生EMT是體內(nèi)肝纖維化的重要機(jī)制，這也逐漸成為目前研究的熱點(diǎn)。EMT在肝纖維化中最明顯的特征是在受損組織中上皮細(xì)胞獲得運(yùn)動表型[4]。假設(shè)這是肝細(xì)胞在惡劣生長微環(huán)境中的1個整合逃生程序，這個惡劣生長微環(huán)境由氧化還原改變所激發(fā)，也由改變了的細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)復(fù)合物的作用所引起，而且還與慢性傷口愈合反應(yīng)時高濃度生長因子和細(xì)胞因子作用有關(guān)[4]。這個逃生程序的特點(diǎn)是通過細(xì)胞代謝和運(yùn)動的改變，以達(dá)到促進(jìn)細(xì)胞生存選擇逃離氧化損傷的目的。逃生程序一般有2個可能的結(jié)果：運(yùn)動的肝上皮細(xì)胞到達(dá)1個相對好的微環(huán)境，并發(fā)生向原始表型的重新分化；或者該細(xì)胞持續(xù)處在惡劣生長微環(huán)境中，其逃生表型消耗殆盡使細(xì)胞發(fā)生凋亡。與非逃生細(xì)胞相比，以上2種逃生細(xì)胞都有1個明顯的病理生理優(yōu)勢，非逃生細(xì)胞在惡劣生長微環(huán)境中發(fā)生壞死，并進(jìn)一步釋放活性氧和其他促纖維化和促炎性分子[31]。因此提出了體內(nèi)肝細(xì)胞在肝纖維化時通過EMT產(chǎn)生ECM而獲得間充質(zhì)表型的概念。越來越多的證據(jù)表明，在慢性炎癥和肝纖維化過程中，發(fā)生EMT可以產(chǎn)生肌成纖維細(xì)胞，表明肝細(xì)胞系在纖維化進(jìn)程中起作用[12]。Massimo綜述表明，主要依賴于細(xì)胞標(biāo)志物表達(dá)的EMT的發(fā)生被認(rèn)為不包括肌纖維母細(xì)胞，但是，在肝纖維化中發(fā)生Ⅱ型EMT，肌纖維母細(xì)胞在體內(nèi)最恰當(dāng)?shù)墓δ苁遣±恝裥湍z原蛋白的合成和沉積。Massimo認(rèn)為在肝纖維化的不同動物模型中，一些肝細(xì)胞和膽管細(xì)胞獲得與細(xì)胞運(yùn)動和生存相關(guān)的間充質(zhì)標(biāo)志物，但是與有活性的纖維狀細(xì)胞外基質(zhì)ECM的沉積無關(guān)，因此，這些肝細(xì)胞和膽管細(xì)胞并不能被認(rèn)為是發(fā)生纖維化的細(xì)胞[4]。Francisco Valde′s實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，非成人肝2/3部分被切除48 h后，再生細(xì)胞并不是終末分化細(xì)胞，可向成纖維細(xì)胞樣表型的轉(zhuǎn)分化。Zeisberg等在四氯化碳(CCl4)誘導(dǎo)小鼠肝纖維化的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中通過基因譜系分析發(fā)現(xiàn)45%FSP-1陽性的成纖維細(xì)胞來源于肝細(xì)胞EMT，提示EMT和MET的平衡關(guān)系影響慢性肝病的轉(zhuǎn)歸，如果EMT占優(yōu)勢，肝臟修復(fù)以纖維化為主；如果MET占優(yōu)勢，則正常上皮增生、纖維化逆轉(zhuǎn)，因此通過抑制EMT減輕或逆轉(zhuǎn)肝纖維化[32-33]，可能是抗纖維化研究新的靶點(diǎn)。然而，Taura等研究表明在TGF-β或CCl4誘導(dǎo)下，小鼠肝細(xì)胞盡管形態(tài)學(xué)上發(fā)生了成纖維細(xì)胞樣的改變，但在表達(dá)Ⅰ型膠原蛋白的成纖維細(xì)胞中并未找到來源于肝細(xì)胞EMT的間充質(zhì)細(xì)胞。結(jié)果認(rèn)為生成Ⅰ型膠原蛋白的細(xì)胞不是來源于肝細(xì)胞，體內(nèi)的肝細(xì)胞既沒有獲得間質(zhì)標(biāo)志物的表達(dá)，也沒有表現(xiàn)出形態(tài)學(xué)的改變，這強(qiáng)烈挑戰(zhàn)了體內(nèi)肝細(xì)胞在肝纖維化時通過EMT產(chǎn)生ECM而獲得間充質(zhì)表現(xiàn)的概念[34]。Beaussier等研究表明肝門間質(zhì)細(xì)胞在缺血性或膽汁淤積性肝損傷引起的肝纖維化中作用明顯[35]。有研究還指出成纖維細(xì)胞是肝內(nèi)產(chǎn)生ECM的另一重要來源，這些表達(dá)膠原蛋白的細(xì)胞起源于骨髓并遷移到肝臟中相應(yīng)損傷反應(yīng)部位[36]。這些研究結(jié)果不盡相同，提示肝纖維化中ECM的過度產(chǎn)生的多種機(jī)制，以及在肝纖維中EMT所起到的作用需要更進(jìn)一步的研究。

總之，EMT是原發(fā)瘤癌細(xì)胞離開有序組織結(jié)構(gòu)的初始階段，是細(xì)胞釋放以致肝內(nèi)傳播或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的先決條件，是癌轉(zhuǎn)移程序啟動的重要標(biāo)志。由于EMT在肝癌發(fā)生中的重要作用，進(jìn)一步研究將通過細(xì)胞模型和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的共同分析驗(yàn)證、通過封閉相關(guān)信號通路動態(tài)監(jiān)測EMT相關(guān)分子mRNA和蛋白的表達(dá)、以及啟動子區(qū)甲基化的程度、通過逆轉(zhuǎn)EMT事件中的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)基因，等。在研究過程中將有利于發(fā)現(xiàn)更多EMT分子標(biāo)志物、有利于研究EMT形成的分子調(diào)控機(jī)制和功能、有利于深入剖析EMT過程與癌進(jìn)展的關(guān)系。研究結(jié)果將進(jìn)一步揭示誘導(dǎo)EMT和促進(jìn)癌發(fā)生的信號通路、進(jìn)一步認(rèn)識腫瘤微環(huán)境對EMT的作用、進(jìn)一步明確啟動EMT的關(guān)鍵因素、進(jìn)一步了解與EMT有關(guān)的肝內(nèi)侵襲轉(zhuǎn)移及對化療耐藥的機(jī)理，從而獲得更多阻礙EMT的切入靶點(diǎn)，為阻斷肝癌的轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)、為靶向肝癌治療提供新的思路和治療方法。

[1] 馮和林,鄭麗華,單保恩.上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的分子機(jī)制研究進(jìn)展〔J〕.實(shí)用癌癥雜志，2013,28(1):105-107,110.

[2] Thiery JP，Acloque H，Huang RY，et al.Epithelial-mesenchymal transitions in development and disease〔J〕.Cell，2009,139(5):871-890.

[3] 王翠翠,鄒 泓,劉春霞，等.上皮間葉轉(zhuǎn)化及其在間葉源性腫瘤中的研究進(jìn)展〔J〕.臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2012,28(4):429-431.

[4] Pinzani M.Epithelial-mesenchymal transition in chronic liver disease:Fibrogenesis or escape from death?〔J〕.J Hepatol，2011,55(2):459-465.

[5] Kalluri R，Weinberger R A.The basics of epithelial-mesenchymal transition〔J〕.J Clin Invest，2009,119(6):1420.

[6] 陳 肯,康 權(quán).上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化與肝纖維化的研究進(jìn)展〔J〕.世界華人消化雜志，2012,20(11):941-945.

[7] 齊明華.上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化及相關(guān)信號通路在原發(fā)性肝細(xì)胞癌轉(zhuǎn)移中的研究進(jìn)展〔J〕.世界華人消化雜志，2012,20(11):953-958.

[8] 吳 冬,柯愛武，郭傳勇.上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化在肝纖維化和肝細(xì)胞癌發(fā)病中的作用研究進(jìn)展〔J〕.實(shí)用肝臟病雜志，2011,14(6):475-477.

[9] Pelletier L，Rebouissou S，Vignijevic D，et al.HNF1α inhibition triggers epithelial-mesenchymal transition in human liver cancer cell lines〔J〕.BMC Cancer，2011,11:427.

[10] Zhao XL，Sun T，Che N，et al.Promotion of hepatocellular carcinoma metastasis through matrix metalloproteinase activation by epithelial-mesenchymal transition regulator Twist1〔J〕.J Cell Mol Med，2011,15(3):691-700.

[11] 呂 軍.肝細(xì)胞肝癌的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化機(jī)制研究進(jìn)展〔J〕.華夏醫(yī)學(xué)，2012,25(1):107-110.

[12] van Ziji F，Zulehner G，Petz M，et al.Epithelial to mesenchymal transition in hepatocellular carcinoma〔J〕.Future Oncol，2009,5(8):1169-1179.

[13] Massagué J.TGF-β in cancer〔J〕.Cell，2008,134(2):215-230.

[14] Heldin CK，Landstrom M，Moustakas A，et al.Mechanism of TGF-beta signaling to growth arrest，apoptosis，and epithelial-mesenchymal transition〔J〕.Curr Opin Cell Biol，2009,21(2):166-176.

[15] Wendt MK，Allington TM，Schiemann W P.Mechanisms of the epithelial-mesenchymal transition by TGF-beta〔J〕.Future Oncol，2009,5(8):1145-1168.

[16] 鄭月娥,李里香.EMT誘導(dǎo)因子的最新研究進(jìn)展〔J〕.臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2013,29(3):321-324.

[17] Gal A，Sjoblom T，F(xiàn)edorova L，et al.Sustained TGF beta exposure suppresses Smad and non-Smad signaling in mammary epithelial cells，leading to EMT and inhibition of growth arrest and apoptosis〔J〕.Oncogene，2008,27(9):1218-1230.

[18] Del Castillo G，Murillo M M，Alvarez-Barrientos A，et al.Autocrine production of TGF-beta confers resistance to apoptosis after an epithelial-mesenchymal transition process in hepatocytes：Role of EGF receptor ligands〔J〕.Exp Cell Res，2006,312(15):2860-2871.

[19] 劉 洋，張晨光，周春燕.經(jīng)典Wnt/β-catenin信號通路中的雙向調(diào)控〔J〕.北京大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版)，2010,42(2):238-242.

[20] Huang D，Du X.Crosstalk between tumor cells and microenvironment via Wnt pathway in colorectal cancer dissemination〔J〕.World J Gastroenterol，2008,14(2):1823-1827.

[21] 顧紅兵,李繼坤.Hedgehog信號通路與腫瘤的關(guān)系研究進(jìn)展〔J〕.Modern Oncology，2011,19(4):808-811.

[22] Varjosalo M，Taipale J.Hedgehog:functions and mechanisms〔J〕.G-enes Dev，2008,22(18):2454-2477.

[23] Yoo YA，Kang MH，Kim JS.et al.Sonic hedgehog signaling promotes motility and invasiveness of gastric cancer cells through TGF-β-meditated activation of the AKL-5-Smad3 pathway〔J〕.Carcinogesis，2008,29(3):486-490.

[24] Chen X，Lingala S，Khoobyari S，et al.Epithelial mesenchymal transition and hedgehog signaling activation are associated with chemoresistance and invasion of hepatoma subpopulations〔J〕.J Hepatol，2011,55(4):838-845.

[25] Sicklick JK，Li YX，Jayaraman A，et al.Dysregulation of the Hedgehog pathway in human hepatocarcinogenesis〔J〕.Carcinogenesis，2006,27(4):748-757.

[26] 張華東,黃 勇.上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化研究進(jìn)展〔J〕.中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2011，21(31):3907-3911.

[27] Garibaldi F，Cicchini C，Conigliaro A，et al.An epistatic minicircuitry between the transcription factors Snail and HNF4α controls liver stem cell and hepatocyte features exhorting opposite regulation on stemness-inhibiting microRNAs〔J〕.Cell Death Differ，2012,19(6):937-946.

[28] Valdes F,Alvarez AM,Locascio A,et al.The epithelial mesenchymal transition confers resistance to the apoptotic effects of transforming growth factor Beta in fetal rat hepatocytes〔J〕. Mol Cancer Res, 2002,1(1):68-78.

[29] Zhang J，Zhang H，Liu J，et al.miR-30 inhibits TGF-β1-induced epithelial-to-mesenchymal transition in hepatocyte by targeting Snail1〔J〕.Biochem Biophys Res Commun，2012,417(3):1100-1105.

[30] Kim T，Veronese A，Pichiorri F，et al.p53 regulates epithelial-mesenchymal transition through microRNAs targeting ZEB1 and ZEB2〔J〕.J Exp Med，2011,208(5):875-883.

[31] Lee UE，F(xiàn)riedman SL.Mechanisms of hepatic fibrogenesis〔J〕.Best Pract Res Clin Gastroenterol，2011,25(2):195-206.

[32] Zeisberg M,Yang C,Martino M,et al.Fibroblasts derive from hepatocytes in liver fibrosis via epithelial to mesenchymal transition〔J〕.J Biol Chem, 2011,282(32):23337-23347.

[33] 李 旭,齊明華.肝內(nèi)細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化:肝纖維化發(fā)生的新機(jī)制〔J〕.世界華人消化雜志，2012,20(10):811-817.

[34] Taura K，Miura K，Iwaisako K，et al.Hepatocytes Do Not Undergo Epithelial-Mesenchymal Transition in Liver Fibrosis in Mice〔J〕.Hepatology，2010,51(3):1027-1036.

[35] Beaussier M，Wendum D，Schiffer E，et al.Prominent contribution of portal mesenchymal cells to liver fibrosis in ischemic and obstructive cholestatic injuries〔J〕.Lab Invest，2007,87(3):292-303.

[36] Kisseleva T，Uchinami H，F(xiàn)eirt N，et al.Bone marrow-derived fibrocytes participate in pathogenesis of liver fibrosis〔J〕.J Hepatol，2006,45(3):429-438.