廣東蛇葡萄的化學(xué)成分研究

吳新星，黃日明，徐志防*，邱聲祥*

1中國科學(xué)院華南植物園，廣州 510650;2 中國科學(xué)院大學(xué)，北京 100049

廣東蛇葡萄［Ampelopsis cantoniensis (Hook.et Arn.)planch.］是葡萄科(Vitaceae)蛇葡萄屬植物，別名粵蛇葡萄，在民間常被稱作山葡萄、田浦茶、背帶藤、牛牽絲、山甜茶等，主要分布在江西、湖南、廣東、廣西和海南等地［1］。廣東蛇葡萄為民間常用藥材，特別在江西、兩廣地區(qū)其莖葉常作為“藤茶”的主要品種［另一種為同屬植物顯齒蛇葡萄(A.grossedentata)］飲用，具有清熱解毒、降血脂和降血壓等功效［2］。

目前，國內(nèi)外對廣東蛇葡萄化學(xué)成分的研究鮮見報(bào)道，為進(jìn)一步開發(fā)利用該植物的化學(xué)資源，作者對廣東蛇葡萄的化學(xué)成分進(jìn)行了研究，從其藤莖乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部共分離得到13 個化合物，分別為白藜蘆醇(1)、5，7-二羥基香豆素(2)、山奈酚(3)、二氫木犀草素(4)、槲皮素(5)、二氫槲皮素(6)、沒食子酸(7)、楊梅素(8)、二氫楊梅素(9)、槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷(10)、楊梅素-3-O-α-L-鼠李糖苷(11)、山奈酚-3-O-α-L-鼠李糖苷(12)、表兒茶素-3-O-沒食子酸酯(13)。除楊梅素和二氫楊梅素外，其余化合物均為首次從該植物中分離得到。

1 儀器與材料

Eyela N-1100 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、Eyela SB-1100 水浴鍋、Eyela Aspirator A-1000S 循環(huán)水真空泵(Tokyo Rikakai，日本);DLSB-5/20 低溫冷卻循環(huán)泵(鄭州長城科工貿(mào)有限公司，中國);WFH-203 三用紫外分析儀(上海精科實(shí)驗(yàn)有限公司，中國);APCI 2000 LC-MS-MS(Applied Biosystems，美國);Bruker DRX-400、AV Ⅲ500 核磁共振儀(Bruker，瑞士)。

柱色譜硅膠(100～200 目、200～300 目，青島海洋化工廠，中國);柱層析反相硅膠RP-18(50 μm、70 μm，J.T.Baker，美國);柱層析凝膠為Sephadex LH-20(Amersham Biosciences，瑞典);其它有機(jī)溶劑和化學(xué)藥品均為國產(chǎn)分析純。

植物材料采自江西贛州大余縣，經(jīng)中國科學(xué)院華南植物園王發(fā)國研究員鑒定為葡萄科蛇葡萄屬植物廣東蛇葡萄(Ampelopsis cantoniensis)，樣本保存于中國科學(xué)院華南植物園天然產(chǎn)物化學(xué)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室。

2 提取與分離

取廣東蛇葡萄藤莖12 kg，充分粉碎，用95%的乙醇室溫浸泡3 次，每次約3 d，合并濾液減壓濃縮至浸膏約600 g。向浸膏中加入水形成懸濁液，然后用正己烷與乙酸乙酯萃取，回收溶劑后得正己烷部16 g、乙酸乙酯部380 g 以及水部210 g。

將乙酸乙酯部380 g 進(jìn)行硅膠(200～300 目)柱層析，氯仿∶甲醇(100∶0～0∶100)梯度洗脫，得到7 個組分:Fr.1～Fr.7。

Fr.3 有大量灰黃色固體析出，溶出固體重結(jié)晶得到化合物1(1250 mg)，F(xiàn)r.3 再過硅膠柱色譜，用正己烷∶丙酮(9∶1～0∶10)洗脫，得到3 個亞組分Fr.3.1～Fr.3.3。組分Fr.3.2 過反相硅膠柱色譜，用甲醇∶水(3∶7～10∶0)洗脫，得到化合物2(15 mg)和3(11 mg);組分Fr.3.3 過凝膠柱色譜(Sephadex LH-20)得到化合物4(27 mg)。

Fr.4 硅膠柱層析，用二氯甲烷∶甲醇(15∶1～7∶3)梯度洗脫，得到Fr.4.1～Fr.4.4 四個亞組分。組分Fr.4.1 繼續(xù)用硅膠柱色譜純化得到化合物5(13 mg);組分Fr.4.2 過Sephadex LH-20 得到化合物6(10 mg);組分Fr.4.3 過硅膠柱色譜，用二氯甲烷∶甲醇(18∶1)洗脫得到化合物7(2200 mg);組分Fr.4.4 用硅膠柱色譜純化后過Sephadex LH-20 得到化合物8(12 mg)和9(13 mg)。

組分Fr.5 過硅膠柱色譜用二氯甲烷∶甲醇(9∶1～1∶1)梯度洗脫，得到亞組分Fr.5.1、Fr.5.2 和Fr.5.3。組分Fr.5.2 過硅膠柱色譜，用氯仿∶甲醇(8∶1～6∶1)梯度洗脫，得到亞組分Fr.5.2.1 和Fr.5.2.2;組分Fr.5.2.1 過Sephadex LH-20 得到化合物10(51 mg)和12(10 mg);組分Fr.5.2.2 重結(jié)晶得到化合物11(334 mg)。

組分Fr.5.3 過硅膠柱色譜重結(jié)晶得到化合物13(8 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1 白色粉末;ESI-MS m/z:227(［MH］-);1H NMR(C3D6O，400 MHz)δ:7.44(2H，d，J=8.0 Hz，H-2'，H-6')，7.05(1H，d，J=16.0 Hz，H-8)，6.92(1H，d，J=16.0 Hz，H-7)，6.87(2H，d，J=8.0 Hz，H-3'，H-5')，6.61(2H，d，J=2.0 Hz，H-2，H-6)，6.34(1H，t，J=2.0 Hz，H-4);13C NMR(C3D6O，100 MHz)δ:159.6(C-3，C-5)，158.2(C-4')，140.8(C-1)，129.9(C-1')，129.0(C-8)，128.7(C-2'，C-6')，126.8(C-7)，116.3(C-3'，C-5')，105.6(C-2，C-6)，102.6(C-4)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［3］報(bào)道一致，故鑒定化合物1 為白藜蘆醇。

化合物2 白色粉末;ESI-MS m/z:177(［MH］-);1H NMR(C3D6O，400 MHz)δ:8.02(1H，d，J=9.6 Hz，H-4)，6.36(1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，6.28(1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，6.05(1H，d，J=9.6 Hz，H-3);13C NMR(C3D6O，100 MHz)δ:163.0(C-2)，161.7(C-7)，157.7(C-8a)，156.8(C-5)，140.0(C-4)，109.9(C-3)，102.9(C-6)，99.0(C-4a)，95.1(C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［4］報(bào)道一致，故鑒定化合物2 為5，7-二羥基香豆素。

化合物3 黃色粉末;ESI-MS m/z:285(［MH］-);1H NMR(C3D6O，400 MHz)δ:8.18(2H，d，J=8.0 Hz，H-2'，H-6')，7.02(2H，d，J=8.0 Hz，H-3'，H-5')，6.55(1H，s，H-8)，6.28(1H，s，H-6);13C NMR(C3D6O，100 MHz)δ:176.7(C-4)，165.0(C-7)，162.2(C-5)，160.2(C-9)，157.7(C-4')，147.0(C-2)，132.9(C-3)，130.4(C-2'，C-6')，123.3(C-1')，116.2(C-3'，C-5')，104.1(C-10)，99.1(C-6)，94.4(C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［5］報(bào)道一致，故鑒定化合物3 為山奈酚。

化合物4 黃色粉末;ESI-MS m/z:287(［MH］-);1H NMR(C3D6O，400 MHz)δ:7.00(1H，d，J=2.0 Hz，H-2')，6.85(1H，d，J=8.0 Hz，H-5')，6.82(1H，dd，J=2.0，8.0 Hz，H-6')，5.93(2H，s，H-6，H-8)，5.33(1H，dd，J=4.0，12.0 Hz，H-2)，3.12(1H，dd，J=12.0，16.0 Hz，H-3)，2.90(1H，dd，J=4.0，16.0 Hz，H-3);13C NMR(C3D6O，100 MHz)δ:197.2(C-4)，167.8(C-7)，164.9(C-5)，164.1(C-9)，146.4(C-4')，146.0(C-3')，131.0(C-1')，118.9 (C-6')，115.9 (C-5')，114.5 (C-2')，102.8(C-10)，96.7(C-6)，95.8(C-8)，79.8(C-2)，43.2(C-3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［4］報(bào)道一致，故鑒定化合物4 為二氫木犀草素。

化合物5 黃色針狀晶體;ESI-MS m/z:301(［M-H］-);1H NMR(C3D6O，400 MHz)δ:7.84(1H，d，J=2.0 Hz，H-2')，7.71(1H，dd，J=2.0，8.0 Hz，H-6')，7.00(1H，d，J=8.0 Hz，H-5')，6.54(1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，6.27(1H，d，J=2.0 Hz，H-6);13C NMR(C3D6O，100 MHz)δ:176.4(C-4)，164.9(C-7)，162.0(C-5)，157.7(C-9)，148.2(C-2)，146.8(C-4')，145.7(C-3')，136.6(C-3)，123.7(C-1')，121.4(C-6')，116.1(C-5')，115.6(C-2')，104.0(C-10)，99.0(C-6)，94.4(C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［6］報(bào)道一致，故鑒定化合物5 為槲皮素。

化合物6 黃色粉末;ESI-MS m/z:303(［MH］-);1H NMR(C3D6O，400 MHZ)δ:7.07(1H，d，J=2.0，H-2')，6.90(1H，dd，J=2.0，8.0 Hz，H-6')，6.86(1H，d，J=8.0 Hz，H-5')，5.99(1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，5.94(1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，5.01(1H，d，J=12.0 Hz，H-3)，4.61(1H，d，J=12.0 Hz，H-2);13C NMR(C3D6O，100 MHz)δ:198.1(C-4)，168.0(C-7)，164.9(C-5)，164.0(C-9)，146.6(C-4')，145.8(C-3')，129.6(C-1')，120.6(C-6')，115.7(C-5')，115.6(C-2')，101.3(C-10)，97.0(C-6)，96.0(C-8)，84.4(C-2)，73.0(C-3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［7］報(bào)道一致，故鑒定化學(xué)物6 為二氫槲皮素。

化合物7 無色針狀結(jié)晶;ESI-MS m/z:169(［M-H］-);1H NMR(C3D6O，400 MHz)δ:7.17(2H，s，H-2，H-6);13C NMR(C3D6O，100 MHz)δ:169.2(-COOH)，145.7(C-3，C-5)，138.8(C-4)，121.4(C-1)，110.1(C-2，C-6)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［6］報(bào)道一致，故鑒定化合物7 為沒食子酸。

化合物8 黃色粉末;ESI-MS m/z:317(［MH］-);1H NMR(CD3OD，500 MHz)δ:7.36(2H，s，H-2'，H-6')，6.39(1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，6.20(1H，d，J=2.0 Hz，H-6);13C NMR(CD3OD，125 MHz)δ:176.4(C-4)，165.0(C-7)，162.1(C-5)，157.6(C-9)，146.9(C-2)，146.2(C-3'，C-5')，135.9(C-3)，135.5(C-4')，121.7(C-1')，107.1(C-2'，C-6')，103.1(C-10)，97.8(C-6)，92.9(C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［8］報(bào)道一致，故鑒定化合物8 為楊梅素。

化合物9 淡黃色粉末;ESI-MS m/z:319(［MH］-);1H NMR(CD3OD，500 MHz)δ:6.57(2H，s，H-2'，H-6')，5.95(1H，d，J=2.1 Hz，H-8)，5.90(1H，d，J=2.1 Hz，H-6)，4.85(1H，d，J=11.4 Hz，H-3)，4.49(1H，d，J=11.4 Hz，H-2);13C NMR(CD3OD，125 MHz)δ:196.9(C-4)，167.3(C-7)，163.8(C-5)，163.0(C-9)，145.5(C-3'，C-5')，133.5(C-4')，127.7(C-1')，106.8(C-2'，C-6')，100.4(C-10)，96.0(C-6)，94.9(C-8)，83.8(C-2)，72.3(C-3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［8］報(bào)道一致，故鑒定化合物9為二氫楊梅素。

化合物10 黃色粉末;ESI-MS m/z:447(［MH］-);1H NMR(CD3OD，500 MHz)δ:7.34(1H，d，J=2.0 Hz，H-2')，7.29(1H，dd，J=8.3，2.1 Hz，H-6')，6.92(1H，d，J=8.3 Hz，H-5')，6.30(1H，d，J=1.9 Hz，H-8)，6.15(1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，5.37(1H，d，J=1.5 Hz，H-1'')，4.29(1H，dd，J=3.3，1.5 Hz，H-2'')，3.82(dd，J=9.3，3.3 Hz，H-3'')，3.48～3.43(1H，m，H-5'')，3.43～3.38(1H，m，H-4'')，0.97(3H，d，J=8.0 Hz，H-6'');13C NMR(CD3OD，125 MHz)δ:178.1(C-4)，164.2(C-7)，161.6(C-5)，157.8(C-9)，157.0(C-2)，148.2(C-4')，144.8(C-3')，134.8(C-3)，121.7(C-1')，121.6(C-6')，115.7(C-5')，115.0(C-2')，104.5(C-10)，102.1(C-1'')，98.5(C-6)，93.5(C-8)，71.9(C-4'')，70.8(C-3'')，70.6(C-2'')，70.5(C-5'')，16.3(C-6'')。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［9］報(bào)道一致，故鑒定化合物10 為槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷。

化合物11 黃色粉末;ESI-MS m/z:463(［MH］-);1H NMR(CD3OD，500 MHz)δ:6.97(2H，s，H-2'，H-6')，6.39(1H，d，J=2.1 Hz，H-8)，6.23(1H，d，J=2.1 Hz，H-6)，5.33(1H，d，J=1.7 Hz，H-1'')，4.24(1H，dd，J=3.3，1.7 Hz，H-2'')，3.81(1H，dd，J=9.5，3.3 Hz，H-3'')，3.54(1H，dq，J=9.5，6.3 Hz，H-5'')，3.33(1H，m，H-4'')，0.97(3H，d，J=8.0 Hz，H-6'');13C NMR(CD3OD，125 MHz)δ:178.3(C-4)，164.4(C-7)，161.8(C-5)，158.1(C-9)，157.1(C-2)，145.4(C-3'，5')，136.5(C-4')，135.0(C-3)，120.5(C-1')，108.2(C-2'，6')，104.5(C-10)，102.2(C-1'')，98.4(C-6)，93.3(C-8)，71.9(C-4'')，70.7(C-3'')，70.6(C-2'')，70.4(C-5'')，16.3(C-6'')。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［10］報(bào)道一致，故鑒定化合物11 為楊梅素-3-O-α-L-鼠李糖苷。

化合物12 黃色粉末;ESI-MS m/z:431(［MH］-);1H NMR(CD3OD，500 MHz)δ:7.77(2H，d，J=8.7 Hz，H-2'，6')，6.95(2H，d，J=8.7 Hz，H-3'，H-5')，6.37(1H，d，J=1.3 Hz，H-8)，6.20(1H，d，J=1.3Hz，H-6)，5.39(1H，d，J=1.5 Hz，H-1'')，4.25(1H，dd，J=3.1，1.6 Hz，H-2'')，3.75(1H，m，H-3'')，3.35(1H，m，H-5'')，3.33(1H，m，H-4'')，0.94(3H，d，J=6.3Hz，H-6'');13C NMR(CD3OD，125 MHz)δ:178.2(C-4)，164.4(C-7)，161.8(C-5)，160.1(C-9)，157.9(C-4')，157.1(C-2)，134.9(C-3)，130.6(C-2'，6')，121.3(C-1')，115.3(C-3'，5')，104.5(C-10)，102.1(C-1'')，98.5(C-6)，93.4(C-8)，71.8(C-4'')，70.7(C-3'')，70.6(C-2'')，70.4(C-5'')，16.3(C-6'')。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［11］報(bào)道一致，故鑒定化合物12 為山奈酚-3-O-α-L-鼠李糖苷。

化合物13 白色粉末;ESI-MS m/z:441(［MH］-);1H NMR(CD3OD，500 MHz)δ:6.97(2H，s，H-2''，H-6'')，6.95(1H，d，J=2.1 Hz，H-2')，6.83(1H，dd，J=8.3，2.1 Hz，H-6')，6.72(1H，d，J=8.3 Hz，H-5')，5.99(1H，d，J=2.3 Hz，H-6)，5.98(1H，d，J=2.3 Hz，H-8)，5.55(1H，m，H-3)，5.05(1H，s，H-2)，3.02(1H，dd，J=17.3，4.6 Hz，H-4a)，2.87(1H，dd，J=17.3，2.2 Hz，H-4b);13C NMR(CD3OD，125 MHz)δ:166.2(C=O)，156.5(C-9)，156.5(C-5)，155.9(C-7)，144.9(C-3''，5'')，144.6(C-3')，144.5(C-4')，138.4(C-4'')，130.1(C-1')，120.1(C-1'')，118.0(C-6')，114.6(C-5')，113.7(C-2')，108.8(C-2''，6'')，98.0(C-10)，95.1(C-8)，94.5(C-6)，77.3(C-2)，68.6(C-3)，25.5(C-4)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］報(bào)道一致，故鑒定化合物13 為表兒茶素-3-O-沒食子酸酯。

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