草鞋木的化學(xué)成分研究

魏建國，楊大松，楊永平，王云月，李曉莉*

1云南農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護學(xué)院;2 中國科學(xué)院昆明植物研究所 資源植物與生物技術(shù)所級重點實驗室;3中國科學(xué)院昆明植物研究所 中國西南野生生物種質(zhì)資源庫;4 中國科學(xué)院青藏高原研究所昆明部，昆明 650201

血桐屬(Macaranga)植物是廣泛分布于熱帶地區(qū)的喬木或灌木，因其受傷后流出的汁液多呈現(xiàn)血紅色而得名，全球分布的約有300 多種［1］，是大戟科中最大的屬之一，中國境內(nèi)記載的有16 種［2］。先前的研究表明異戊烯基及其衍生物取代的黃酮［3］和二苯乙烯［4］是該屬典型的次生代謝產(chǎn)物，此外該屬植物中也發(fā)現(xiàn)了一些三萜［3］和鞣質(zhì)［5］類成分，這些次生代謝產(chǎn)物的新穎結(jié)構(gòu)及其所表現(xiàn)的廣泛藥理活性，如抗腫瘤、抗糖尿病、抗氧化、抗炎等［3］，加上它們豐富資源儲藏，使得血桐屬得到越來越多天然產(chǎn)物化學(xué)研究者的關(guān)注。草鞋木(Macaranga henryi)又名鞋底葉樹，是大戟科血桐屬的植物，其根有毒，可用來治療風(fēng)濕骨痛，跌打損傷［6］。至今未見該種植物化學(xué)成分方面的研究報道，為了更好闡明其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)促進資源的合理開發(fā)利用，我們對草鞋木枝條中的化學(xué)成分進行研究，從90%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位中分離鑒定了8 個化合物，并對它們的提取分離和結(jié)構(gòu)鑒定進行了報道。

1 儀器與材料

Finnigan MAT 90 型質(zhì)譜儀，Bruker AM-400、DRX-500 和Avance Ⅲ600 型核磁共振儀，以TMS為內(nèi)標測定;Agilent 1200 型高效液相色譜儀(DAD檢測器)，硅膠G(200～300 目)及薄層色譜硅膠板GF254均為青島海洋化工廠生產(chǎn)，Sephadex LH-20 為Amersham Biosciences 公司產(chǎn)品，RP-18 為Merck 公司產(chǎn)品，MCI 為三菱公司產(chǎn)品;TLC 檢測采用熒光或者15%硫酸乙醇溶液處理后加熱顯色。

草鞋木于2012年采自云南省西雙版納自治州，由中國科學(xué)院昆明植物研究所楊永平研究員鑒定為草鞋木(Macaranga henryi)，標本保存于中國科學(xué)院昆明植物研究所標本館。

2 提取與分離

草鞋木的干燥枝條22 kg，粉碎后用90%乙醇室溫下浸泡提取3 次，每次3 天，合并提取液，減壓濃縮得浸膏，加水混懸后用乙酸乙酯萃取3 次，減壓濃縮得到乙酸乙酯部位149 g，用MCI 脫色處理后經(jīng)硅膠柱梯度洗脫(氯仿∶丙酮9∶1 至1∶1)進行粗分，得到5 個部分(Fr.1～Fr.5)。Fr.1 經(jīng)凝膠純化后用RP-18 柱層析(甲醇∶水6∶4 至1∶0)分為三部分，第二部分經(jīng)硅膠、凝膠柱層析反復(fù)分離純化得化合物3(15 mg)和4(5 mg)，第三部分經(jīng)硅膠柱(石油醚∶乙酸乙酯=4∶1)純化后經(jīng)87%甲醇-水HPLC半制備得化合物5 (4 mg)、6 (10 mg)和7 (2 mg);Fr.2 經(jīng)凝膠、RP-18、氯仿-乙酸乙酯硅膠柱層析和薄層制備反復(fù)分離純化的化合物1 (13 mg)和2 (7 mg);Fr.5 經(jīng)氯仿-甲醇硅膠、凝膠反復(fù)分離純化得化合物8 (9 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1 無色油狀液體，ESI-MS m/z:639［M+Na］+。1H NMR (500 MHz，CDCl3)δ:7.56 (1H，s，H-1)，5.65 (1H，d，J=4.0 Hz，H-7)，5.37 (1H，d，J=10.3 Hz，H-12)，4.01，3.95 (2H，ABq，J=12.9 Hz，H-20)，3.23 (1H，m，H-10)，3.22 (1H，m，H-8)，2.55，2.46 (2H，ABq，J=19.0 Hz，H-5)，2.29 (2H，dd，J=7.1，14.1 Hz，H-2')，2.12 (1H，m，H-11)，2.06 (3H，s，C-2")，1.73 (3H，s，H-19)，1.22 (3H，s，H-16)，1.18 (3H，s，H-17)，1.06 (1H，d，J=4.9 Hz，H-14)，0.85 (3H，d，J=6.5 Hz，H-18)，0.83 (3H，t，J=6.8 Hz，H-14');13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ:209.0 (s，C-3)，173.7 (s，C-1')，173.7 (s，C-1")，160.7 (d，C-1)，140.6 (s，C-6)，132.9 (s，C-2)，129.2 (d，C-7)，78.3 (s，C-9)，76.6 (d，C-12)，73.7 (s，C-4)，68.0 (t，C-20)，65.7(s，C-13)，56.1 (d，C-10)，42.9 (d，C-11)，39.0(d，C-8)，38.6 (t，C-5)，36.2 (d，C-14)，34.6 (t，C-2')，31.9 (t，C-12')，29.7 (t，C-4')，29.6 (t，C-5')，29.5 (t，C-6'，7'，11')，29.3 (t，C-8'，9')，29.0 (t，C-10')，25.6 (s，C-15)，25.2 (t，C-3')，23.8 (q，C-16)，22.7 (t，C-13')，21.0 (q，C-2")，16.8 (q，C-17)，14.4 (q，C-18)，14.1 (q，C-14')，10.1 (q，C-19)。將以上波譜數(shù)據(jù)文獻［7，8］中已報道的數(shù)據(jù)對比后將該化合物確定為12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate (TPA)，這是該化合物碳譜數(shù)據(jù)的首次報道。此化合物為惕各烷型二萜，作為一種很強的PKC 激動劑具有很強的促癌活性，現(xiàn)已廣泛用于腫瘤模型的造模。至今為止血桐屬中僅報道了極少的二萜［3］成分，此化合物作為典型的惕各烷型二萜是該骨架在血桐屬中的首次報道。惕各烷型二萜多具有明顯的毒性，此類化合物的發(fā)現(xiàn)表明其可能是草鞋木毒性的物質(zhì)基礎(chǔ)。

化合物2 白色粉末，ESI-MS m/z:625 ［M +Na］+。1H NMR (400 MHz，CDCl3)δ:7.66 (1H，s，H-1)，6.94 (1H，s，H-5)，5.43 (1H，d，J=10.3 Hz，H-12)，4.40，4.28 (2H，ABq，J=15.1 Hz，H-20)，3.78 (1H，d，J=5.2 Hz，H-8)，3.28 (1H，d，J=2.4 Hz，H-10)，2.33 (2H，t，J=7.4 Hz，H-2')，2.10 (3H，s，H-22)，1.84 (1H，d，J=5.3 Hz，H-14)，1.82 (3H，d，J=1.4 Hz，H-19)，1.63 (2H，m，H-3')，1.20 (3H，s，H-16)，1.18 (3H，s，H-17)，0.94 (3H，d，J=6.3 Hz，H-18)，0.87 (3H，t，J=6.5 Hz，H-12');13C NMR (100 MHz，CDCl3)δ:205.2 (s，C-3)，201.1 (s，C-7)，173.8 (s，C-1')，173.6 (s，C-21)，159.9 (d，C-1)，148.4 (s，C-6)，137.0 (d，C-5)，135.0 (s，C-2)，76.0 (d，C-12)，75.6 (s，C-9)，73.0 (s，C-4)，65.6 (s，C-13)，62.3(t，C-20)，59.2 (d，C-10)，54.6 (d，C-8)，44.3 (d，C-11)，34.5 (t，C-2')，31.8 (t，C-10')，29.6 (d，C-14)，29.5 (t，C-4')，29.0– 29.4 (t，C-5'– 9')，25.3 (t，C-3')，25.1 (s，C-15)，23.5 (q，C-17)，22.6 (t，C-11')，21.0 (q，C-22)，16.7 (q，C-16)，14.3 (q，C-18)，14.1 (q，C-12')，10.3 (q，C-19)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻［7］中報道的trigowiin A 基本一致，確定該化合物為trigowiin A。此化合物為含有5-烯-7-羰基結(jié)構(gòu)片段的稀有的惕各烷二萜，具有該結(jié)構(gòu)特點的惕各烷目前僅報道了4 個，因此該類型惕各烷二萜在血桐屬中的發(fā)現(xiàn)及其已報道的抗病毒活性對于天然產(chǎn)物化學(xué)和資源的合理開發(fā)具有一定的價值。

化合物3 白色粉末，1H NMR (400 MHz，CDCl3)δ:5.23 (1H，br s，H-12)，4.56 (1H，br s，H-6)，3.16 (1H，t，J=8.7 Hz，H-3)，1.32 (3H，s，H-25)，1.29 (3H，s，H-26)，1.17 (3H，s，H-24)，1.09(3H，s，H-27)，1.07 (3H，s，H-23)，0.86 (6H，s，H-29，30)，0.83 (3H，s，H-28);13C NMR (100 MHz，CDCl3)δ:144.3 (s，C-13)，122.0 (d，C-12)，79.1(d，C-3)，68.6 (d，C-6)，55.5 (d，C-5)，47.9 (d，C-9)，47.2 (d，C-18)，46.8 (t，C-19)，42.1 (s，C-14)，40.7 (t，C-1)，40.7 (t，C-7)，39.5 (s，C-4)，39.0(s，C-8)，37.1 (t，C-22)，36.3 (s，C-10)，34.7 (t，C-21)，33.3 (q，C-29)，32.4 (s，C-17)，31.1 (s，C-20)，28.3 (q，C-28)，27.9 (q，C-23)，27.3 (t，C-2)，26.9 (t，C-16)，26.1 (t，C-15)，26.0 (q，C-27)，23.6 (q，C-30)，23.4 (t，C-11)，18.3 (q，C-26)，17.0 (q，C-25)，16.9 (q，C-24)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻［9］中報道的daturadiol 基本一致，確定該化合物為daturadiol。

化合物4 白色粉末，1H NMR (400 MHz，CDCl3)δ:5.27 (1H，br s，H-12)，3.69 (1H，m，H-2β)，3.62 (3H，s，-OCH3)，3.01 (1H，d，J=9.5 Hz，H-3α)，2.86 (1H，m，H-18)，1.12，1.03，0.97，0.92，0.90，0.82，0.71 (3H × 7，s，H-23–27，29，30);13C NMR (100 MHz，CDCl3)δ:178.3 (s，C-28)，143.8 (s，C-13)，122.1 (d，C-12)，83.9 (d，C-3)，68.9 (d，C-2)，55.2 (d，C-5)，51.5 (q，-OCH3)，47.5 (d，C-9)，46.6 (s，C-17)，46.0 (t，C-1)，45.8 (t，C-19)，41.8 (s，C-14)，41.2 (d，C-18)，39.8 (s，C-8)，39.6 (s，C-4)，38.4 (s，C-10)，33.8(t，C-21)，33.1 (q，C-29)，32.5 (t，C-7)，32.3 (t，C-22)，30.7 (s，C-20)，28.5 (q，C-23)，27.6 (t，C-15)，25.9 (q，C-27)，23.6 (q，C-30)，23.4 (t，C-16)，23.0 (t，C-11)，18.3 (t，C-6)，16.8 (q，C-26)，16.7 (q，C-24)，16.6 (q，C-25)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻［10］中報道的methyl maslinate 基本一致，確定該化合物為methyl maslinate。

化合物5 白色粉末，1H NMR (400 MHz，CDCl3)δ:6.17 (1H，s，H-6)，4.33 (1H，m，H-3)，1.18 (3H，s，H-19)，0.92 (3H，d，J=6.5 Hz，H-21)，0.86 (3H，t，J=7.5 Hz，H-29)，0.83 (3H，d，J=7.1 Hz，H-27)，0.81 (3H，d，J=6.9 Hz，H-26)，0.71 (3H，s，H-18);13C NMR (100 MHz，CDCl3)δ:199.5 (s，C-7)，171.5 (s，C-5)，119.6 (d，C-6)，68.7 (d，C-3)，55.9 (d，C-14)，55.5 (d，C-17)，53.7 (d，C-9)，45.7 (d，C-24)，42.1 (s，C-13)，41.5 (t，C-4)，39.4 (t，C-12)，39.1 (s，C-10)，36.2(t，C-1)，36.1 (d，C-20)，34.1 (d，C-8)，33.8 (t，C-2)，33.8 (t，C-22)，29.1 (d，C-25)，28.1 (t，C-16)，26.0 (t，C-23)，24.1 (t，C-15)，23.0 (t，C-28)，21.0(t，C-11)，19.8 (q，C-26)，19.0 (q，C-27)，18.6(q，C-21)，18.2 (q，C-19)，11.9 (q，C-29)，11.8(q，C-18)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻［11］中報道的(24R)-3β-hydroxy-24-ethylcholest-5-en-7-one 基本一致，確定該化合物為(24R)-3β-hydroxy-24-ethylcholest-5-en-7-one。

化合物6 白色粉末，ESI-MS m/z:449 ［M +Na］+。1H NMR (400 MHz，CDCl3)δ:5.69 (1H，s，H-6)，5.16 (1H，dd，J=15.1，8.6 Hz，H-22)，5.01(1H，dd，J=15.1，8.6 Hz，H-23)，3.69 (1H，m，H-3)，1.20 (3H，s，H-19)，1.02 (3H，d，J=6.6 Hz，H-21)，0.84 (3H，t，J=7.8 Hz，H-29)，0.81 (3H，d，J=7.2 Hz，H-26)，0.79 (3H，d，J=7.4 Hz，H-27)，0.69 (3H，s，H-18);13C NMR (100 MHz，CDCl3)δ:202.3 (s，C-7)，165.1 (s，C-5)，138.1(d，C-22)，129.4 (d，C-23)，126.0 (d，C-6)，70.5(d，C-3)，54.6 (d，C-17)，51.2 (d，C-24)，50.0 (d，C-9)，49.9 (d，C-14)，45.3 (d，C-8)，42.8 (s，C-13)，41.8 (t，C-4)，40.2 (d，C-20)，38.5 (s，C-10)，38.2 (t，C-12)，36.3 (t，C-1)，31.8 (d，C-25)，31.1(t，C-2)，29.0 (t，C-16)，26.4 (t，C-15)，25.3 (t，C-28)，21.4 (q，C-26)，21.2 (q，C-27)，21.0 (t，C-11)，19.0 (q，C-21)，17.3 (q，C-19)，12.2 (q，C-29)，12.1 (q，C-18)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻［12］中報道的3β-羥基豆甾-5，22-二烯-7-酮基本一致，確定該化合物為3β-羥基豆甾-5，22-二烯-7-酮基。

化合物7 白色粉末，1H NMR (400 MHz，CDCl3)δ:6.26 (1H，m，H-3)，6.19 (1H，d，J=9.7 Hz，H-4)，5.69 (1H，s，H-6)，1.20 (3H，s，H-19)，0.92 (3H，d，J=6.4 Hz，H-21)，0.84 (3H，t，J=7.8 Hz，H-29)，0.83 (3H，d，J=7.4 Hz，H-27)，0.81 (3H，d，J=6.9 Hz，H-26)，0.68 (3H，s，H-18);13C NMR (150 MHz，CDCl3)δ:203.0 (s，C-7)，161.4 (s，C-5)，137.0 (d，C-3)，127.9 (d，C-6)，124.4 (d，C-4)，54.9 (d，C-17)，50.9 (d，C-14)，49.8 (d，C-9)，46.2 (d，C-8)，46.0 (d，C-24)，43.8(s，C-13)，39.1 (t，C-12)，36.5 (s，C-10)，36.4 (d，C-20)，34.1 (t，C-22)，33.0 (t，C-1)，29.2 (d，C-25)，28.8 (t，C-16)，26.6 (t，C-15)，26.3 (t，C-23)，23.6 (t，C-2)，23.2 (t，C-28)，21.4 (t，C-11)，20.0 (q，C-27)，19.2 (q，C-26)，19.1 (q，C-21)，16.8 (q，C-19)，12.2 (q，C-18)，12.1 (q，C-29)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻［13］中報道的stigmasta-3，5-dien-7-one 基本一致，確定該化合物為stigmasta-3，5-dien-7-one。

化合物8 白色粉末，ESI-MS m/z:441 ［M +Na］+。1H NMR (400 MHz，acetone-d6)δ:7.13 (2H，s，4，4'-OH)，6.68 (4H，s，H-2，2'，6，6')，4.66 (2H，d，J=4.0 Hz，H-7，7')，4.22 (2H，dd，J=6.8，8.9 Hz，H-9a，9'a)，3.84 (2H，d，J=3.6 Hz，H-9b，9'b)，3.81 (12H，s，3，3'，5，5'-OCH3)，3.09 (2H，m，H-8，8');13C NMR (125 MHz，acetone-d6)δ:148.7(s，C-3，3'，5，5')，136.1 (s，C-4，4')，133.2 (s，C-1，1')，104.4 (d，C-2，2'，6，6')，86.8 (d，C-7，7')，72.3 (t，C-9，9')，56.6 (q，3，3'，5，5'-OCH3)，55.3(d，C-8，8')。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻［14］中報道的丁香脂素基本一致，確定該化合物為丁香脂素。

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