黃海棠化學(xué)成分的研究

顏朦朦，肖世基，，陳 放，周 燕*

1中國科學(xué)院成都生物研究所;2 四川大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，成都 610064

近年來，由于金絲桃屬植物的提取物顯示出了良好的抗抑郁和抗病毒活性而受到人們的注意［1］。因此為了尋找該屬植物中具有新穎結(jié)構(gòu)及良好抗抑郁或抗病毒活性的化合物，我們對采自四川的黃海棠(Hypericum ascyron L.)植物進(jìn)行了系統(tǒng)的分離純化和結(jié)構(gòu)鑒定。

黃海棠為藤黃科(Guttiferae)金絲桃屬多年生草本植物，高0.5～1.3 m。除新疆和青海外，全國各地均產(chǎn)［2］。黃海棠又名紅旱蓮、長柱金絲桃，具有抗菌消炎、收斂止血的作用［3］。為了系統(tǒng)的闡明該種植物的化學(xué)成分，運用了反相硅膠柱層析、葡聚糖凝膠LH-20 及薄層制備等分離方法，從該種植物中分離得到15 個化合物，并運用MS 和NMR 波譜解析技術(shù)確定了它們的結(jié)構(gòu)。

1 儀器及材料

Finnigan LCQDECA型質(zhì)譜儀;Bruker AV-600 和Bruker Ascend 400 型核磁共振儀，TMS 為內(nèi)標(biāo);北京創(chuàng)新通恒LC3000 型高效液相色譜儀，HPLC 柱為Daisogel C1810 μ 100A 30 ×250 mm;薄層色譜硅膠GF254和柱色譜硅膠(100～200，200～300 目)均為青島海洋化工廠生產(chǎn);MCI 樹脂為Mitsubishi Chemical 公司生產(chǎn);Sephadex LH-20 為Merck 公司產(chǎn)品。

黃海棠于2012年8 月采自四川，經(jīng)成都生物研究所蔣研究員鑒定為金絲桃屬植物黃海棠Hypericum ascyron L.。

2 提取與分離

黃海棠莖葉干重1 kg 粉碎后用丙酮浸泡提取3次，減壓濃縮得浸膏80 g。丙酮浸膏經(jīng)硅膠柱色譜(石油醚-丙酮梯度洗脫)分為7 個部分。第一部分Fr.1 經(jīng)硅膠柱分離(氯仿-甲醇50∶1～10∶1)得到化合物6 (40 mg)、化合物15 (20 mg)和Fr.1.1。Fr.1.1 經(jīng)凝膠柱Sephadex LH-20 (氯仿-甲醇1 ∶1洗脫)分離得到化合物9 (4 mg)。第二部分Fr.2析出黃色粉末，經(jīng)重結(jié)晶得化合物2 (80 mg)。母液經(jīng)ODS 柱色譜(甲醇-水70∶30→100∶0)分離為3 個部分(Fr.2.1-3)，F(xiàn)r.2.2 經(jīng)RP-HPLC 分離得到化合物2 (5 mg)、3 (20 mg)、10 (12 mg)和11 (8 mg)。第三部分Fr.3 經(jīng)ODS 柱色譜(甲醇-水70∶30→100∶0)分離為3 個部分(Fr.3.1-3)，F(xiàn)r.3.1經(jīng)MCI 柱色譜(甲醇-水90∶10 洗脫)脫色之后經(jīng)凝膠柱SephadexLH-20 (氯仿-甲醇1∶1 洗脫)分離得到化合物1 (3 mg)，F(xiàn)r.3.2 經(jīng)凝膠柱Sephadex-LH-20 (氯仿-甲醇1∶1 洗脫)分為3 個部分(Fr.3.2.1-3)，F(xiàn)r.3.2.2 析出化合物8 (50 mg)，F(xiàn)r.3.2.3經(jīng)凝膠柱SephadexLH-20 (氯仿-甲醇1∶1 洗脫)分離得到化合物13 (3 mg)。第四部分Fr.4 經(jīng)凝膠柱SephadexLH-20 (氯仿-甲醇1∶1 洗脫)分離得到4個部(Fr.4.1-4)，F(xiàn)r.4.4 經(jīng)RP-HPLC 分離得到化合物14 (3 mg)。第五部分Fr.5 經(jīng)MCI 柱色譜(甲醇-水90∶10 洗脫)脫色之后經(jīng)凝膠柱SephadexLH-20 (氯仿-甲醇1∶1 洗脫)分離為5 個部分(Fr.5.1-5)，F(xiàn)r.5.3 經(jīng)RP-HPLC 分離得到化合物7 (11 mg)、8 (8 mg)和12 (15 mg)。第六部分Fr.6 經(jīng)硅膠柱色譜分離得到4 個部分(Fr.6.1-4)，F(xiàn)r.6.3經(jīng)，RP-HPLC 分離得到化合物5 (5 mg)和4 (9 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1 淺黃色粉末(C40H42O12);1H NMR(DMSO-d6，600 MHz)δ:6.66 (1H，s，H-2)，6.65(1H，d，J=8.3 Hz，H-5)，6.54 (1H，d，J=8.3 Hz，H-6)，2.74 (1H，dd，J=13.6，6.0 Hz，H-7a)，2.56(1H，dd，J=13.6，6.0 Hz，H-7b)，2.19 (1H，m，H-8)，4.26 (1H，dd，J=11.2，6.5 Hz，H-9a)，4.07(1H，dd，J=11.2，5.6 Hz，H-9b)，6.46 (1H，d，J=15.6 Hz，H-11)，7.52 (1H，d，J=15.6 Hz，H-12)，7.28 (1H，br.s，H-14)，6.78 (1H，d，J=8.3 Hz，H-17)，7.09 (1H，d，J=8.3 Hz，H-18)，3.67 (3H，s，OCH3)，3.80 (3H，s，OCH3);13C NMR (DMSOd6，150 MHz)δ:131.3 (C-1)，113.3 (C-2)，147.9(C-3)，145.1 (C-4)，114.9 (C-5)，121.5 (C-6)，34.3 (C-7)，40.2(C-8)，64.3 (C-9)，167.1 (C-10)，115.7 (C-11)，145.5 (C-12)，126.0 (C-13)，111.7 (C-14)，148.4 (C-15)，149.8 (C-16)，116.0(C-17)，123.6 (C-18)，55.8 (OCH3)，56.2(OCH3);ESI-MS m/z 737［M+Na］+，713［M-H］-。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［4］中報道的9，9'-O-di-(E)-feruloyl-(-)-secoisolariciresinol 的核磁數(shù)據(jù)吻合，因此確定該化合物為9，9'-O-di-(E)-feruloyl-(-)-secoisolariciresinol。

化合物2 黃色粉末(C15H10O6);1H NMR(DMSO-d6，600 MHz)δ:12.61 (1H，s，5-OH)，10.75 (1H，s，7-OH)，10.07 (1H，s，4'-OH)，9.35(1H，s，3-OH)，8.04 (2H，d，J=8.8 Hz，H-2，6')，6.93 (2H，d，J=8.8 Hz，H-3'，5')，6.44 (1H，d，J=1.9 Hz，H-8)，6.19 (1H，d，J=1.9 Hz，H-6);ESI-MS m/z 285［M-H］-。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［5］中報道的山奈酚(kaempferol)的核磁數(shù)據(jù)基本一致，因此確定該化合物為山奈酚(kaempferol)。

化合物3 黃色粉末(C15H10O7);1H NMR(DMSO-d6，600 MHz)δ:12.48 (1H，s，5-OH)，10.76 (1H，s，7-OH)，9.56 (1H，s，3'-OH)，9.32(1H，s，3-OH)，9.28 (1H，s，4'-OH)，7.67 (1H，d，J=1.5 Hz，H-2')，7.54 (1H，dd，J=8.5，1.5 Hz，H-6')，6.88 (1H，J=8.5 Hz，H-5')，6.40 (1H，s，H-8)，6.18 (1H，s，H-6);ESI-MS m/z 301［M-H］-。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［5］中報道的槲皮素(quercetin)的核磁數(shù)據(jù)基本一致，因此確定該化合物為槲皮素(quercetin)。

化合物4 黃色粉末(C21H20O12);1H NMR(DMSO-d6，600 MHz)δ:12.63 (1H，s，5-OH)，7.66(1H，dd，J=7.8，1.8 Hz，H-6')，7.53 (1H，d，J=1.8 Hz，H-2')，6.85 (1H，d，J=7.8 Hz，H-5')，6.40 (1H，d，J=1.2 Hz，H-8)，6.20 (1H，d，J=1.2 Hz，H-6)，5.37 (1H，d，J=7.2 Hz，H-1”)，3.61～3.06 (6H，m);ESI-MS m/z 487［M +Na］+，463［M-H］-，300 ［M-164］-。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［6］中報道的金絲桃苷(hyperoside)的核磁數(shù)據(jù)基本一致，因此確定該化合物為金絲桃苷(hyperoside)。

化合物5 黃色粉末(C21H20O12);1H NMR(DMSO-d6，600 MHz)δ:12.63 (1H，s，5-OH)，7.57(2H，m，H-2'，6')，6.85 (1H，d，J=7.8 Hz，H-5')，6.40 (1H，d，J=1.2 Hz，H-8)，6.20 (1H，d，J=1.2 Hz，H-6)，5.45 (1H，d，J=7.2 Hz，H-1”)，3.61～3.06 (6H，m);ESI-MS m/z 487［M +Na］+，463［M-H］-，300 ［M-164］-。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［6］中報道的槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(quercetin-3-O-β-D-glucopyranoside)的核磁數(shù)據(jù)基本一致，因此確定該化合物為槲皮素-3-O-β-D 吡喃葡萄糖苷(quercetin-3-O-β-D-glucopyranoside)。

化合物6 黃色粉末(C21H20O11);1H NMR(DMSO-d6，600 MHz)δ:12.61 (1H，s，5-OH)，8.07(2H，d，J=8.8 Hz，H-2'，6')，6.86 (2H，d，J=8.8 Hz，H-3'，5')，6.43 (1H，d，J=1.9 Hz，H-8)，6.21 (1H，d，J=1.9 Hz，H-6)，5.40 (1H，d，J=7.7 Hz，H-1″)，5.14 (1H，d，J=4.7 Hz，OH)，4.82(1H，d，J=5.4 Hz，OH)，4.47 (1H，d，J=4.0 Hz，OH)，4.42 (1H，t，J=5.6 Hz，OH)，3.30～3.66 (6H，m).13C NMR (DMSO-d6，150 MHz)δ:156.4 (C-2)，133.2 (C-3)，177.5 (C-4)，161.2 (C-5)，98.7 (C-6)，164.1 (C-7)，93.6 (C-8)，156.4(C-9)，103.9 (C-10)，120.8 (C-1')，130.9 (C-2'，6')，115.0 (C-3'，5')，159.9 (C-4')，101.7 (C-1″)，71.2 (C-2″)，73.1 (C-3″)，67.8 (C-4″)，75.8 (C-5″)，60.2 (C-6″);ESI-MS m/z 471 ［M +Na］+，447［M-H］-。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［7］中報道的山奈酚-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷(kaempferol-3-O-β-D-galactopyranoside)的核磁數(shù)據(jù)基本一致，因此確定該化合物為山奈酚-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷(kaempferol-3-O-β-D-galactopyranoside)。

化合物7 黃色粉末(C21H20O11));1H NMR(DMSO-d6，600 MHz)δ:12.61 (1H，s，5-OH)，8.04(2H，d，J=8.8 Hz，H-2'，6')，6.88 (2H，d，J=8.8 Hz，H-3'，5')，6.43 (1H，d，J=1.9 Hz，H-8)，6.21 (1H，d，J=1.9 Hz，H-6)，5.46 (1H，d，J=7.7 Hz，H-1″)，5.31 (1H，d，J=4.7 Hz，OH)，5.02(1H，d，J=4.8 Hz，OH)，4.91 (1H，d，J=4.0 Hz，OH)，4.23 (1H，t，J=5.6 Hz，OH)，3.08～3.60 (6H，m);ESI-MS m/z 471 ［M+Na］+，447［M-H］-。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［8］中報道的山奈酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(kaempferol-3-O-β-D-glucopyranoside)的核磁數(shù)據(jù)基本一致，因此確定該化合物為山奈酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(kaempferol-3-O-β-D-glucopyranoside)。

化合物8 蒼白色粉末(C7H6O4);1H NMR(DMSO-d6，600 MHz)δ:9.71 (1H，s，OH)，9.32(1H，s，OH)，7.33 (1H，d，J=1.7 Hz，H-2)，7.28(1H，dd，J=8.2，1.7 Hz，H-6)，6.78 (1H，d，J=8.2 Hz，H-5);ESI-MS m/z 153 ［M-H］-。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［9］中報道的原兒茶酸(protocatechuic acid)的核磁數(shù)據(jù)基本一致，因此確定該化合物為原兒茶酸(protocatechuic acid)。

化合物9 黃色粉末(C13H8O4);1H NMR (DMSO-d6，600 MHz)δ:12.5 (1H，s，1-OH)，7.66 (1H，t，J=8.2 Hz，H-3)，7.50 (1H，d，J=9.0 Hz，H-5)，7.40 (1H，d，J=2.7 Hz，H-8)，7.33 (1H，dd，J=9.0，2.7 Hz，H-6)，7.00 (1H，d，J=8.2 Hz，H-4)，6.74 (1H，d，J=8.2 Hz，H-2);ESI-MS m/z 227［M-H］-。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［10］中報道的1，7-二羥基-9-氧雜蒽酮(1.7-dihydroxyxanthone)的核磁數(shù)據(jù)基本一致，因此確定該化合物為1，7-二羥基-9-氧雜蒽酮(1.7-dihydroxyxanthone)。

化合物10 白色針狀晶體(C9H8O3);1H NMR(Acetone-d5，600 MHz)δ:7.59 (1H，d，J=15.9 Hz，H-β)，7.52 (2H，d，J=8.6 Hz，H-2，6)，6.88(2H，d，J=8.6 Hz，H-3，5)，6.31 (1H，d，J=15.9 Hz，H-α);ESI-MS m/z 163［M-H］-。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［9］中報道的對香豆酸(p-coumaric acid)的核磁數(shù)據(jù)基本一致，因此確定該化合物為對香豆酸(p-coumaric acid)。

化合物11 白色針狀晶體(C7H6O3);1H NMR(Acetone-d5，600 MHz)δ:7.89 (2H，d，J=8.7 Hz，H-2，6)，6.90 (2H，d，J=8.7 Hz，H-3，5);ESI-MS m/z 137［M-H］-。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［11］中報道的對羥基苯甲酸(p-hydroxybenzoic acid)的核磁數(shù)據(jù)基本一致，因此確定該化合物為對羥基苯甲酸(p-hydroxybenzoic acid)。

化合物12 黃色粉末(C25H24O12);1H NMR(DMSO-d6，600 MHz，)δ:7.95 (2H，d，J=8.5 Hz，H-2″，6″)，6.84 (2H，d，J=8.2 Hz，H-3″，5″)，6.42(1H，s，H-8)，6.19 (1H，s，H-6)，6.58 (1H，m，Hβ)，5.54 (1H，d，J=16.0 Hz，H-α)，5.39 (1H，d，J=7.6 Hz，H-1″)，4.16 (1H，d，J=11.8 Hz，H-6″)，3.99 (1H，dd，J=11.8，6.5 Hz，H-6″)，3.3～3.12 (3H，m);13C NMR (DMSO-d6，150 MHz)δ:156.7 (C-2)，133.1 (C-3)，177.5 (C-4)，161.4 (C-5)，99.1 (C-6)，164.7 (C-7)，94.0 (C-8)，156.7(C-9)，104.0 (C-10)，121.0(C-1')，131.0 (C-2')，115.3 (C-3')，160.2 (C-4')，115.3 (C-5')，131.0(C-6')，100.9 (C-1″)，74.3 (C-2″)，76.4 (C-3″)，70.3 (C-4″)，74.3 (C-5″)，62.8 (C-6″)，165.3 (CC=O)，122.0 (C-α)，145.1 (C-β)，17.7 (CH3);ESI-MS m/z 539［M +Na］+，515 ［M-H］-，285 ［M-230］-。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］中報道的山奈素-3-O-(6″-O-巴豆酰)-β-D-葡萄糖苷(kaempferol-3-O-(6″-O-crotonoyl-β-D-glucopyranoside)的核磁數(shù)據(jù)基本一致，因此確定該化合物為山奈素-3-O-(6″-O-巴豆酰)-β-D-葡萄糖苷(kaempferol-3-O-(6″-O -crotonoyl)-β-D-glucopy ranoside)。

化合物13 黃色粉末(C13H8O6);1H NMR(DMSO-d6，600 MHz)δ:7.34 (1H，s，H-2)，6.80(1H，s，H-4)，6.30 (1H，s，H-5)，6.13 (1H，s，H-8);ESI-MS m/z 259 ［M-H］-。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13］中報道的1，3，6，7-四羥基-9-氧雜蒽酮(1，3，6，7-tetrahydroxyxanthone)的核磁數(shù)據(jù)基本一致，因此確定該化合物為1，3，6，7-四羥基-9-氧雜蒽酮(1，3，6，7-tetrahydroxyxanthone)。

化合物14 白色粉末(C7H6O5);254 nm 下紫無吸收;1H NMR (CD3OD，600 MHz)δ:7.06 (2H，s，H-2，6);以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［14］中報道的沒食子酸的核磁數(shù)據(jù)基本一致，并與沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品共薄層色譜，Rf值相同，因此確定該化合物為沒食子酸。

化合物15 白色晶體(C29H50O);與β-谷甾醇標(biāo)準(zhǔn)品共薄層色譜，在多種溶劑系統(tǒng)中展開，Rf值相同，故鑒定化合物15 為β-谷甾醇(β-sitosterol)。

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