香樟葉化學成分的研究

孫崇魯，湯小蕾，周靜峰，吳 浩

浙江醫(yī)藥高等?？茖W校，寧波 315100

樟樹系樟科樟屬，為亞熱帶常綠喬木植物，是我國亞熱帶綠闊葉林的主要樹種之一，屬藥用植物［1，2］。它在我國資源豐富。樟屬植物富含揮發(fā)油，普遍具有芳香健胃作用。樟具有殺蟲解毒，抗血栓、動脈硬化、腫瘤、氧化衰老等作用，主治風濕痹痛，水火燙傷，瘡瘍腫毒，疥癬皮膚瘙癢，毒蟲咬傷［3］。樟樹葉有提取色素、香料等用來制成植物農(nóng)藥，制備氧化劑和醫(yī)藥產(chǎn)品等。且樟樹葉為可再生資源，其應用前景廣闊［1］。

目前國內(nèi)對香樟葉的揮發(fā)油成分報道較多［4，5］，其主要含有桉葉素、芳樟醇、α-蒎稀、β-蒎稀、莰烯、黃樟素等揮發(fā)油，而對其它成分研究較少。本實驗對香樟葉70%的乙醇提取物進行了研究，利用各種色譜和波譜技術(shù)分離純化并鑒定了9 個化合物，分別鑒定為:鄰苯二甲酸二丁酯(1)，l-細辛脂素(2)，(8R，8' R)-3，3'，4，4'-四甲氧基-9-氧代-8-8'，9-O-9'-木脂素(3)，槲皮素-3-Ο-β-D-葡萄糖苷(4)，山奈酚-3-O-β-蕓香糖苷(5)，山柰酚-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷(6)，槲皮素-3-Ο-α-L-鼠李糖苷(7)，蘆丁(8)，異鼠李素-3-O-β-蕓香糖苷(9)。

1 主要儀器與試劑

香樟葉采自浙江醫(yī)藥高等?？茖W校校園內(nèi)，經(jīng)中南林業(yè)科技大學黃克瀛教授鑒定為香樟葉。核磁共振波譜儀:德國BrukerAM-400;液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀:安捷倫科技有限公司;AL204 電子天平:梅特勒托利多儀器有限公司;LABOROTA 4000 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀:德國海道夫公司;SHZ-III 型循環(huán)水真空泵:上海亞榮生化儀器有限公司;DHG-9070A 型電熱鼓風干燥箱:寧波江南儀器廠;實驗試劑為分析純:寧波奧博科學儀器有限公司;柱層析用硅膠(200～300目):青島海洋化工廠分廠;氘代氯仿、氘代二甲亞砜:J＆K CHEMICAL LTD;數(shù)顯恒溫水浴鍋:鄭州長城科工貿(mào)有限公司;超聲波清洗器:Sigma 儀器有限公司。

2 提取和分離

取干燥的香樟葉5 kg，粉碎，用70%乙醇回流提取3 次，合并提取液，減壓濃縮得浸膏，將浸膏混懸于適量的水中，分別用石油醚、氯仿、正丁醇進行萃取。氯仿部分經(jīng)硅膠柱色譜，以石油醚-乙酸乙酯(20∶1～1∶1)梯度洗脫依次得到3 個流分(Fr.1～Fr.3)。流分Fr.1～Fr.3 經(jīng)硅膠柱，制備薄層色譜和重結(jié)晶的方法反復分離純化得到化合物1(850 mg)，2(300 mg)，3(800 mg);正丁醇部分經(jīng)硅膠柱色譜，以氯仿-甲醇(20∶1～1∶1)梯度洗脫，得到6個流分(Fr.4～Fr.9)。流分Fr.4～Fr.9 經(jīng)硅膠色譜柱層析柱、聚酰胺色譜柱層析，制備薄層色譜分離純化得化合物4(20 mg)，5(38 mg)，6(54 mg)，7(66 mg)，8(122 mg)，9(11 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1 無色油狀物，易溶于氯仿，乙酸乙酯，溶于甲醇。薄層色譜上10% H2SO4-MeOH 試劑反應顯紫紅色，提示該化合物可能是萜類化合物。ESI-MS(m/z):279［M +H］+，579［2M +Na］+。1H NMR(CDCl3，600 MHz)δ:7.53 (2H，m，H-4，5)，7.72 (2H，m，H-3，6)，4.21(4H，t，J=6.6 Hz，H-8，8')，1.63(4H，m，H-9，9')，1.38(4H，m，H-10，10')，0.88 (6H，t，J=7.8 Hz，H-11，11');13C NMR(CDCl3，400 MHz)δ:167.8(C-7，7')，132.4(C-3，4)，131.0 (C-1，6)，128.9 (C-2，5)，65.6 (C-8，8')，30.7 (C-9，9')，19.3 (C-10，10')，13.8 (C-11，11')。以上數(shù)據(jù)與文獻［6］報道基本一致，故鑒定為鄰苯二甲酸二丁酯。

化合物2 白色針晶(PE)，易溶于氯仿，乙酸乙酯，溶于甲醇。ESI-MS(m/z):352［M-H］+。1H NMR (400 MHz，CDCl3)δ:2.83(1H，m，H-8’)，3.09～3.22 (2H，m，H-8，H-9'β)，3.83～3.92 (2H，m，H-9α，H-9'α)，4.10 (1H，d，J=9.6 Hz，H-9β)，4.69(1H，d，J=7.2 Hz，H-7')，4.83(1H，d，J=5.0 Hz，H-7)，5.95 (4H，s，OCH2O)，6.78～6.86 (6H，m，H-2'，H-5'，H-6'，H-2，H-5，H-6)。13C NMR (100 MHz，CDCl3)D:134.7 (C-1')，106.4 (C-2')，147.8(C-3')，146.8 (C-4')，108.2 (C-5')，119.2 (C-6')，83.2(C-7')，53.1 (C-8')，72.2 (C-9')，135.3(C-1)，106.5 (C-2)，148.0(C-3)，147.3 (C-4)，108.1 (C-5)，119.2 (C-6)，88.1(C-7)，54.1 (C-8)，70.5 (C-9)，101.1(2OCH2O)。以上光譜數(shù)據(jù)與文獻報道的1-細辛脂素數(shù)據(jù)一致［7］，故確定該化合物為1-細辛脂素(1-asarinin)。

化合物3 C22H26O6，白色晶體，ESI-MS(m/z):387［M +H］+，409［M +Na］.1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ:6.65(2H，t，J=15.6 Hz，H-2，H-5)，6.55(2H，J=17.2 Hz，H-2'，H-5')，6.42(1H，dd，J=10.0，8.0 Hz，H-6)，6.34(1H，d，J=2.0 Hz，H-6')，4.01 (1H，dd，J=16.0，2.0 Hz，H-8)，3.74(12H，s，3，3'，4，4'-OCH3)，2.83(2H，J=12.8 Hz，H-9')，2.46 (4H，m，H-8，H-8')，1.51 (1H，s，H-8').13C NMR (100 MHz，CDCl3)δ:178.9(C-9)，148.9(C-3)，148.9(C-3')，147.9 (C-4)，147.9(C-4')，130.2(C-1)，130.2(C-1')，121.7(C-6)，120.8(C-6')，112.4(C-2)，112.1 (C-2')，112.1(C-5)，112.6(C-5')，71.2 (C-9')，56.7(CH3O-C4)，56.7(CH3OC4')，56.7(CH3O-C3)，56.7(CH3O-C3')，46.9(C-8)，41.7 (C-8')，38.9(C-7')，35.6(C-7)。上述波譜數(shù)據(jù)與文獻［8］一致，確定化合物2 為(8R，8'R)-3，3'，4，4'-四甲氧基-9-氧代-8-8'，9-O-9'-木脂素。

化合物4 黃色粉末，mp.231～232 ℃，鹽酸-鎂粉反應陽性，Molish 反應呈陽性，ESI-MS(m/z):465［M+H］+。1H NMR DMSO-d6，400 Hz)δ:7.58(1H，d，J=2.5 Hz，H-2')，7.48(1H，dd，J=8.5，2.5 Hz，H-6')，6.81(1H，d，J=8.5 Hz，H-5')，6.40(1H，d，J=2.5 Hz，H-8)，6.20(1H，d，J=2.5 Hz，H-6)，5.37(1H，d，J=7.0 Hz，H-1G)，糖部分其它質(zhì)子δ:3.08～4.32;13C NMR(DMSO-d6)δ:177.6(C-4)，164.1(C-7)，161.4(C-5)，156.4(C-9)，98.9(C-6)，93.7(C-8)，156.3(C-2)，148.5(C-4')，144.9(C-3')，133.4(C-3)，121.6(C-1')，121.3(C-6')，116.3(C-5')，115.3(C-2')，104.0(C-10)，100.9(C1-G)，77.6(C5-G)，76.5(C3-G)，74.2(C2-G)，70.0(C4-G)，61.1(C6-G)。以上數(shù)據(jù)與文獻［9］報道的槲皮素-3-Ο-β-D-葡萄糖苷的數(shù)據(jù)一致，故確定化合物4為槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物5 黃色粉末，mp.187～189 ℃，鹽酸-鎂粉反應陽性，Molish 反應陽性;ESI-MS(m/z):595.1［M+H］+。1H NMR(DMSO-d6，400 Hz)δ:7.97(2H，d，J=8.6 Hz，H-2'，6')，6.81(2H，d，J=8.7 Hz，H-3'，5')，6.12(1H，s，H-6)，6.31(1H，s，H-8)，5.20 (1H，d，J=7.0 Hz，H-1G)，4.50 (1H，d，J=1.0 Hz，H-1R)，3.15～3.80(m，均為糖上氫原子的信號)，0.99(3H，d，J=6.0 Hz，CH3-R)。13C NMR(DMSO-d6，400Hz)δ:156.7(C-2)，133.6(C-3)，177.6(C-4)，161.2(C-5)，98.9(C-6)，164.1(C-7)，93.5(C-8)，156.3(C-9)，103.8(C-10)，121.3(C-1')，130.4(C-2'，6')，115.7(C-3'，5')，159.8(C-4')，101.2(C1-G)，74.1(C2-G)，76.5(C3-G)，70.4(C4-G)，75.8(C5-G)，67.1(C6-G)，100.8(C1-R)，70.2(C2-R)，70.9(C3-R)，71.6(C4-R)，68.4(C5-R)，17.5(C6-R)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道的山奈酚-3-O-β-D-［α-L-吡喃鼠李糖(1→6)］-吡喃葡萄糖苷(即山奈酚-3-O-β-蕓香糖苷)數(shù)據(jù)基本一致［10］。我們可以確定化合物5 為山奈酚-3-O-β-蕓香糖苷。

化合物6 黃色粉末，鹽酸-鎂粉反應陽性，Molish 反應陽性，分子式C23H22O11。ESI-MS(m/z):432.9［M+H］+，287［M-Rha +H］+;1H NMR (DMSO-d6，400 Hz)δ:7.97(2H，d，J=8.6 Hz，H-2'，6')，6.81(2H，d，J=8.7 Hz，H-3'，5')，6.12(1H，s，H-6)，6.31(1H，s，H-8)，5.49 (1H，d，J=1.2 Hz，H-1R)，0.99(3H，d，J=6.0 Hz，CH3-R)。13C NMR(DMSO-d6，400 Hz)δ:156.4(C-2)，134.3(C-3)，177.7(C-4)，161.4(C-5)，98.9(C-6)，164.1(C-7)，93.9(C-8)，156.6(C-9)，104.2(C-10)，120.6(C-1')，130.7(C-2'，6')，115.4(C-3'，5')，159.9(C-4')，101.8(C1-R)，70.2(C2-R)，70.4(C3-R)，71.3(C4-R)，69.7(C5-R)，17.4(C6-R)。以上數(shù)據(jù)與文獻［11］對照基本一致，故鑒定化合物6 為山柰酚-3-Oα-L-吡喃鼠李糖苷(kaempferol-3-O-α-L-rhamopyranoside)。

化合物7 黃色粉末，mp.182～184 ℃，鹽酸-鎂粉反應呈陽性，Molish 反應陽性，分子式C21H20O11。ESI-MS(m/z):449［M+H］+，303(水解掉糖后生成的槲皮素苷元)等.1H NMR(DMSO-d6)δ:7.58(1H，d，J=2.5 Hz，H-2')，7.48(1H，dd，J=8.5，2.5 Hz，H-6')，6.81(1H，d，J=8.5 Hz，H-5')，6.40(1H，d，J=2.5 Hz，H-8)，6.20(1H，d，J=2.5 Hz，H-6)，5.27(1H，d，J=1.3 Hz，H-1R)，糖部分其它質(zhì)子δ:3.08-4.32.13C NMR (DMSO-d6)δ:156.7(C-2)，133.5(C-3)，177.7(C-4)，161.2(C-5)，98.7(C-6)，164.1(C-7)，93.7(C-8)，157.1(C-9)，104.1(C-10)，121.2 (C-1')，115.9 (C-2')，144.9 (C-3')，148.5(C-4')，116.3 (C-5')，121.7 (C-6')，101.8(C1-R)，70.3(C2-R)，70.8(C3-R)，71.3(C4-R)，69.7(C5-R)，17.5(C6-R)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻報道［12］一致，故鑒定為槲皮素-3-Ο-α-L-鼠李糖苷(quercetin3-Ο-α-L-rhamnoside)，即 槲 皮 苷(Quercitrin)。

化合物8 黃色粉末，mp.185～188 ℃。鹽酸-鎂粉反應陽性，Molish 反應陽性，分子式C27H30O16。ESI-MS(m/z):611.1［M +H］+，由其1H NMR 和13C NMR 可知為黃酮苷類化合物。1H NMR(DMSO-d6)δ:6.11(1H，d，J=1.5 Hz，C6-H)，6.29(1H，d，J=1.5 Hz，C8-H)，7.57(1H，d，J=2.0 Hz，C2'-H)，6.79(1H，d，J=8.0 Hz，H-5')，7.53(1H，dd，J=8.0，2.0 Hz，H-6')，5.33(1H，d，J=8.0 Hz，H1-G)，4.38(1H，d，J=1.0 Hz，H-1R)，0.99 (3H，d，J=6.0 Hz，CH3-R).13C NMR (DMSO-d6)δ:156.8(C-2)，133.6(C-3)，177.7(C-4)，161.3(C-5)，98.7(C-6)，164.1(C-7)，93.7(C-8)，156.7(C-9)，104.0(C-10)，122.2 (C-1')，115.9 (C-2')，144.8 (C-3')，148.5(C-4')，116.3 (C-5')，121.9 (C-6')，101.2(C1-G)，74.1(C2-G)，76.5(C3-G)，70.4(C4-G)，75.9(C5-G)，67.1(C6-G)，101.8(C1-R)，70.2(C2-R)，70.9(C3-R)，71.3(C4-R)，68.7(C5-R)，17.4(C6-R)。與蘆丁共薄層，Rf值及顯色均一致，NMR數(shù)據(jù)與文獻報道［13］的數(shù)據(jù)吻合，故確定化合物8 為蘆丁。

化合物9 淡黃色粉末，mp.168～169 ℃，鹽酸-鎂粉反應陽性，Molish 反應陽性，分子式C28H32O16。ESI-MS(m/z):625.1［M+H］+;1H NMR(DMSOd6)δ:7.64(1H，d，J=2.1 Hz，H-2')，7.53(1H，dd，J=8.7，2.1 Hz，H-6')，6.83(1H，d，J=8.7 Hz，H-5')，6.31(1H，d，J=2.1Hz，H-8)，6.19 (1H，d，J=2.1 Hz，H-6)，5.43(1H，d，J=6.9 Hz，glu-1-H)，4.41(1H，d，J=1.2 Hz，H-1R)，3.83 (3H，s，OCH3)，0.96(3H，d，J=6.0 Hz，CH3-R);13C NMR(DMSO-d6)δ:156.6(C-2)，133.3(C-3)，177.5(C-4)，161.3(C-5)，98.7(C-6)，164.1(C-7)，93.7(C-8)，156.6(C-9)，104.0(C-10)，121.1(C-1')，113.4(C-2')，149.8(C-3')，146.5(C-4')，115.3(C-5')，121.9(C-6')，55.9(CH3O-3')，100.8(C1-G)，74.2(C2-G)，76.5(C3-G)，70.2(C4-G)，75.9(C5-G)，67.1(C6-G)，100.9(C1-R)，70.2(C2-R)，70.8(C3-R)，71.5(C4-R)，68.5(C5-R)，17.5(C6-R)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致［14］，該化合物鑒定為異鼠李素-3-O-β-蕓香糖苷。

4 討論

本文通過對香樟葉化合物的分離鑒定發(fā)現(xiàn)，正丁醇萃取層中主要以黃酮類化合物為主要成分，氯仿萃取層中主要以木脂素類化合物為主要成分，且含量較大。以往對香樟葉的開發(fā)利用，主要利用了其揮發(fā)油類成分，開發(fā)香精香料等產(chǎn)品。而其所含有的大量的木脂素及黃酮類化合物成分的活性則開發(fā)的不夠，如抗氧化，抑菌等活性。因此以成分分離為基礎，并進一步明確香樟葉中所含黃酮及木脂素類成分的藥理作用，可以為進一步開發(fā)利用香樟葉奠定基礎。

1 Wang ZS(王中生).Study on the Lauraceae ornamental tree species resources and Landscaping Utilization.Chin Wild Plant Res(中國野生植物資源)，2001，20:31-33.

2 Tao GF(陶光復).Cinnamomum Resources in Hubei province.J Wuhan Botanical Res(武漢植物學研究)，2001，19:489-496.

3 Jiangshu New Medical college(江蘇新醫(yī)學院).Dictionary of traditional Chinese Medicine.Shanghai:Shanghai People's Publishing House，1979.28-31.

4 Sun CL(孫崇魯)，Huang KY(黃克瀛)，Chen CJ(陳叢瑾)，et al.Analysis of chemical composition of volatile oil in Cinnamomum camphora leaves and branches by GC-MS.Flavour Fragrance Cosmetic(香精香料化妝品)，2007:7-9.

5 Zhou X(周翔)，Mo JG(莫建光)，Xie YX(謝一興)，et al.Study on the chemical constituents of essential oil from lina-lool type of Cinnamomum camphorastem in Guangxi.Food Sci Tech(食品科技)，2011，36:282-285.

6 Qing S(青山)，Zeng GR(曾光堯)，Tan JB(譚健兵)，et al.Lipophilic constituents from the seeds of Vitex negundo L.Centr South Pharm(中南藥學)，2011，9:492-494.

7 Cai SQ(蔡少青)，Wang H(王禾).Studies on the non-volatile chemical constituents of A sarum heterotropoides var.mandshuricum.J Beijing Med Univ(北京醫(yī)科大學學報)，1996，28:228.

8 Ren YL(任玉琳)，Yang JS(楊峻山).The Spectroscopic Features of Dibenzylbutyrolactone Lignans.Chin J Magn Reson(波譜學雜志)，2002，19:15-24.

9 Tang YP(唐于平)，Wang Y(王穎)，Lou FC(樓鳳昌)，et al.Flavonol glycosides from the leaves of Ginkgo biloba.Acta Pharm Sin(藥學學報)，2000，35:363.

10 Olaleye Olgjide，Li SS(李珊珊)，Liu HT(劉海濤).Studies on chemical constituents and DHHP free radical scavenging activity of Carthamus tinctorius L.2014，26:60-63，32.

11 Shen YP(沈玉萍)，Zhong XX(鐘雄雄)，Yu XJ(余筱潔)，et al.Chemical constituents of Toona sinensis leaves.Chin Pharm J(中國藥學雜志)，2013，48:22-24.

12 Wang YG(王永剛)，Dan M(淡墨)，Li YH(李詠華)，et al.Studies on the chemical constituents of Pithecellobium clypearia.J Chin Med Mater(中藥材)，2005，28:774-775.

13 Yan ZW(閆兆威)，Zhou MM(周明媚)，Lu D(盧丹)，et al.Chemical constituents from the pulp of Acanthopanax senticosus(Rupr.et Maxin)Harms.Nat Prod Res Dev(天然產(chǎn)物研究與開發(fā))，2010，22:1015-1017.

14 Wang ZH(王智慧)，Ling TJ(凌鐵軍)，Zhang L(張梁)，et al.A study on the chemical constituents in the leaves of Cinnamomum camphora.Nat Prod Res Dev(天然產(chǎn)物研究與開發(fā))，2014，26:860-863.