ELISA檢測HIV抗體室內(nèi)質(zhì)控血清的制備與應(yīng)用分析

摘要：目的 探討分析ELISA檢測HIV抗體室內(nèi)質(zhì)控血清的制備與臨床應(yīng)用。方法 應(yīng)用ELISA對我血庫收集的血液標(biāo)本32000份進行HIV抗體檢測；同時選擇正常人群血清與試劑盒內(nèi)HIV陽性血清混合稀釋，混合恰當(dāng)比例，冷藏保存使用；同時將自制的質(zhì)控血清保存1～12個月，對其均勻性、精確性及穩(wěn)定性進行評價。結(jié)果 ELISA法檢測結(jié)果顯示陽性115例，陽性率為0.36%，實際上HIV抗體為陽性共120例，漏診率為0.016%；研究結(jié)果顯示正常人群的血清與試劑盒內(nèi)HIV陽性血清以10：1的比例進行混合最為恰當(dāng)；對自制的質(zhì)控血清為期1～12個月的觀察，發(fā)現(xiàn)其均勻性、S/CO值、準(zhǔn)確性12個月的差異不顯著（P<0.05），無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論 ELISA在HIV抗體的檢測中具有較高的準(zhǔn)確度，且檢測結(jié)果 能夠在短時間內(nèi)反映，值得臨床推廣應(yīng)用；同時發(fā)現(xiàn)自制質(zhì)控血清經(jīng)濟方便，且具有穩(wěn)定性高的優(yōu)點，具有較大的應(yīng)用前景。

關(guān)鍵詞：ELISA；HIV抗體；質(zhì)控血清 HIV指人類免疫缺陷病毒，HIV病毒對人體的免疫系統(tǒng)造成破壞進而削弱機體的免疫抵抗力，造成健康人群患上獲得性免疫缺陷綜合征，感染HIV的途徑主要包括血液傳染、性交、母嬰傳播。現(xiàn)階段，臨床上對于艾滋病的治療尚無顯著進展，患者大都以死亡告終，其對人類的身體健康和生命安全產(chǎn)生極大的威脅，引起了國內(nèi)外醫(yī)學(xué)的高度重視[1]。目前，艾滋病主要以早發(fā)現(xiàn)及早控制為主，ELISA法在HIV抗體的檢測中作用顯著，然而有諸多因素會導(dǎo)致其檢測結(jié)果出現(xiàn)偏差，故進行室內(nèi)控制十分有必要，本文旨在探討分析ELISA檢測HIV抗體室內(nèi)質(zhì)控血清的制備與臨床應(yīng)用，具體信息如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 由上海紀(jì)寧實業(yè)有限公司提供的人抗人類免疫缺陷病毒抗體（HIV）酶聯(lián)免疫試劑盒；由北京萬泰生物藥業(yè)有限公司提供的HIV抗體試劑盒，批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字S20030001；由衛(wèi)生部臨檢中心提供的臨界值質(zhì)控血清，批號為NCCL 070049；由深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司提供的酶標(biāo)儀。

1.2 方法 選擇抗-HIV ELISA法對所有標(biāo)本進行檢測，一孔或兩孔判斷為陽性；將HIV抗體試劑盒的陽性血清通過診斷試劑進行檢測，同時將陽性血清通過包含10%小牛血清PBS緩沖液稀釋，每支裝0.5ml于零下20℃的環(huán)境下保存待檢，操作嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作，且嚴(yán)格遵循操作說明進行。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS13.0統(tǒng)計學(xué)軟件，計數(shù)資料采用x2檢驗，P<0.05差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

應(yīng)用ELISA法對HIV抗體檢測結(jié)果顯示陽性115例，陽性率為0.36%（115/32000），但實際上HIV抗體為陽性的共120例，漏診率為0.016%（5/32000）；研究結(jié)果顯示正常人群的血清與試劑盒內(nèi)HIV陽性血清以10：1的比例進行混合最為恰當(dāng)；對自制的質(zhì)控血清為期1～12個月的觀察，發(fā)現(xiàn)其均勻性、S/CO值、準(zhǔn)確性12個月的差異不顯著（P>0.05），無統(tǒng)計學(xué)意義，見表1。

3 討論

自從1981年在美國發(fā)現(xiàn)首例由人類免疫缺陷病毒（HIV）引起的艾滋病以來，人類一直在與其進行著不懈的斗爭。各類檢測方法及檢測手段都在不斷改進和更新。目前，在HIV初篩實驗中使用的第三代酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）試劑，不僅包被的抗原高度純化，且采用重組和多肽相結(jié)合的技術(shù)。雙抗原夾心法的應(yīng)用使HIV抗體需兩次選擇，大大提高了敏感性，使漏檢率明顯下降。但該檢測方法對檢測人員的操作技術(shù)及試驗條件要求較高，易出現(xiàn)假陽性等。因此，開展實驗室質(zhì)量控制是保證實驗室分析結(jié)果準(zhǔn)確性的必要基礎(chǔ)，也是保證實驗間有可比性的關(guān)鍵。

隨著艾滋病流行形勢的日趨嚴(yán)峻，新發(fā)現(xiàn)的感染者數(shù)量不斷增加，艾滋病檢測也顯得越來越重要。目前國內(nèi)檢測HIV抗體的方法主要是酶聯(lián)免疫法（ELISA）。2004年版的《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》要求采用ELISA法時必須要包含內(nèi)部和外部對照質(zhì)控血清，其中外部對照質(zhì)控血清是為了監(jiān)控檢測的重復(fù)性和穩(wěn)定性以及試劑盒批間或孔間差異，通常為弱陽性對照，以該試劑盒臨界值（Cut-off值）的2～3倍為宜。

HIV病毒主要侵入機體的T淋巴細(xì)胞[2]，與細(xì)胞結(jié)合而存在于血液之中，HIV抗體分布于患者的血液、精液、陰道分泌物、唾液、尿液之中，然而在血液、精液、陰道分泌物中濃度最高。近些年，感染HIV病毒的患者逐年上升，影響患者的身心健康、對生命安全產(chǎn)生威脅[3]，現(xiàn)階段仍無有效的治療方法，主要停留在預(yù)防控制階段，因此及時的診斷并加以控制十分關(guān)鍵[4]。

臨床上對HIV抗體的檢測需要通過建立HIV抗體檢測質(zhì)量系統(tǒng)，有其特殊性，因此做好實驗室的質(zhì)量管理從而確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確可靠[5]。衛(wèi)生部門的規(guī)章制度明確規(guī)定臨床上對HIV抗體的檢測需包含外部與內(nèi)部質(zhì)控血清兩部分，主要是由于處于臨界值上下的弱陽性外部對照質(zhì)控血清，使得反應(yīng)強度改變較易察看；然而為了保證HIV抗體檢查結(jié)果的可靠準(zhǔn)確，在應(yīng)用ELISA法檢測過程中需要有弱陽性對照質(zhì)控血清，但是在臨床檢測中，醫(yī)院由于較難獲取HIV陽性抗體標(biāo)本而需要通過自制質(zhì)控血清。本文主要對ELISA檢測HIV抗體室內(nèi)質(zhì)控血清的制備與應(yīng)用分析[6]，研究發(fā)現(xiàn)顯示正常人群的血清與試劑盒內(nèi)HIV陽性血清以10：1的比例作為自制質(zhì)控血清的濃度最為合適，且于對自制的質(zhì)控血清進行1～12個月的評估，結(jié)果顯示其均勻性、S/CO值、準(zhǔn)確性12個月無顯著變化，表明自制質(zhì)控血清較為穩(wěn)定，能夠作為HIV抗體室內(nèi)質(zhì)控血清，但是其存在揮發(fā)的可能性，因此質(zhì)控血清使用次數(shù)需<7次，分裝合理。

綜上所述，ELISA在HIV抗體的檢測中具有較高的準(zhǔn)確度，且檢測結(jié)果能夠在短時間內(nèi)反映，值得臨床推廣應(yīng)用；同時發(fā)現(xiàn)自制質(zhì)控血清經(jīng)濟方便，且具有穩(wěn)定性高的優(yōu)點，具有較大的應(yīng)用前景。

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編輯/許言；制備與應(yīng)用