鹽酸特比萘芬乳膏體外透皮擴散試驗方法的建立報告

【摘要】以鹽酸特比萘芬乳膏劑為例，探索并建立乳膏劑型體外透皮性能的研究方法，從而提高新品種研發(fā)力量。采用立式接受池裝置（RYJ-6B型藥物透皮擴散試驗儀），以0.9%生理鹽水模擬身體內(nèi)環(huán)境，可以豬皮代替人體皮膚，180轉(zhuǎn)/min模擬人體液運動狀態(tài)。

【關鍵詞】透皮；擴散；試驗方法

文章編號：1004-7484（2013）-11-6849-011

具體操作

1.1透皮擴散試驗方法的建立

1.1.1透皮擴散試驗條件采用RYJ-6B型藥物透皮擴散試驗儀擴散池（6.5mL）及豬腹部離體皮膚。離體皮膚固定于樣品池與接受池之間，角質(zhì)層面向樣品池，均勻涂抹乳膏，皮膚背面與接受液緊密接觸（不得有氣泡）。有效擴散面積約2.8cm2，接受系統(tǒng)置于（37±0.5）℃的恒溫水浴中，電磁攪拌，轉(zhuǎn)速為180r/min。分別于1、3、6、12、24h取接受液2mL，并補充相同體積的接受液，24h后終止試驗。

1.1.2豬離體皮膚的處理取豬放血處死，經(jīng)觀察皮膚無紅腫、充血、破損現(xiàn)象。用電動剃須刀除去腹部毛，取下已去毛的腹部豬皮，小心除去皮下脂肪，洗凈，切割成小塊皮膚，立即進行透皮試驗，其余離體皮膚浸泡于生理鹽水中，置于-4℃冰箱中備用。

1.2接受液0.9%生理鹽水。

1.3含量測定方法的建立色譜條件：乙腈-四氫呋喃-pH7.8的緩沖液（取10%四甲基氫氧化銨14.5ml，置1000ml的量瓶中，加水950ml，用0.7mol/L磷酸溶液調(diào)節(jié)pH至7.8±0.05，加水稀釋至刻度）（65：10：25）為流動相，檢測波長280nm，理論塔板數(shù)按鹽酸特比萘芬峰計算應不低于2000，鹽酸特比萘芬與雜質(zhì)峰的分離度應符合要求；進樣量10μL。

1.4標準品溶液的制備精密稱取鹽酸特比萘芬標準品10.41mg，置于200mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，作為標準品貯備液。精密量取上述溶液1mL置于10mL容量瓶中，加生理鹽水稀釋至刻度，作為標準品溶液（5.21μg/mL），約相當于乳膏透過1%的濃度）。

取做完擴散試驗的整塊皮膚，刮去表面殘留藥膏，用生理鹽水沖洗，稍晾干，剪去多余皮膚，將與軟膏接觸的面積約為2.8cm2的皮膚剪碎研磨至乳糜狀，移至具塞錐形瓶中，加入20mL無水乙醇，超聲提取40min，5000r/min離心，傾取上清液，濾過，揮干，用甲醇溶解，移至5mL容量瓶并稀釋至刻度，即得供試品溶液。2體外擴散試驗方法驗證

2.1檢測方法的確定

2.1.1高效液相色譜儀島津LC-2010。

2.1.2色譜柱COSMOSIL 8C18-PAQ 250×4.6mm 5μm。

2.1.3檢測器紫外檢測器（雙波長224nm、280nm）。

2.1.4色譜條件同藥學資料含量測定方法。

2.1.5接受液的制備取參比制劑約0.8g，依照上述透皮擴散試驗方法，分別于1、3、6、12、24小時取2ml的接受液，濾過，作為供試溶液，并補充同體積的接受液。

2.1.6供試溶液的制備透皮擴撒試驗終止后，取下皮膚，刮去表面藥膏，用生理鹽水洗凈，依照上述溶液的制備方法操作提取皮膚中的鹽酸特比萘芬，并定容置5ml的量瓶中，濾過，作為皮膚貯留量供試溶液。

2.2專屬性

2.2.1高效液相色譜儀島津LC-2010。

2.2.2色譜柱COSMOSIL 8C18-PAQ 250×4.6mm 5μm。

2.2.3檢測器紫外檢測器。

2.2.4標準品溶液的制備精密稱取鹽酸特比萘芬標準品10.30mg于200mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，作為標準品貯備液。精密量取上述溶液1ml置于10ml容量瓶中，加生理鹽水稀釋至刻度，作為標準品溶液（5.15μg/ml約相當于乳膏透過1%的濃度）。

2.2.4.1供試品溶液a在接受液中均未檢出鹽酸特比萘芬，因此，取上述標準品貯備液1ml置于10ml容量瓶中，加空白透過皮膚所得的生理鹽水空白滲透液稀釋至刻度，濾過，作為供試品溶液a。

2.2.4.2供試品溶液b取做完擴散試驗的整塊皮膚，刮去表面殘留藥膏，用生理鹽水沖洗，稍晾干，剪去多余皮膚，將與軟膏接觸的面積約為2.8cm-2的皮膚剪碎磨至乳糜狀，移至具塞錐形瓶中，加入20ml無水乙醇，超聲提取40min，5000r/min離心，傾取上清液，濾過，揮干，用甲醇溶解，移至5ml容量瓶并稀釋至刻度，即得供試品溶液b。

2.3溶液穩(wěn)定性將皮膚透過量的供試品溶液與皮膚貯留量的供試品溶液，再精密量取10μl注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，并記錄兩種溶液分別放置0小時、4小時、8小時、10小