Foxp3—924rs2232365基因多態(tài)性與成人牙周炎的關(guān)系初步探討

[摘要] 目的 對(duì)牙周炎患者行Foxp3-924 （rs2232365）基因分型， 探討Foxp3-924 （rs2232365）基因與牙周炎遺傳易感的相關(guān)性。方法 應(yīng)用PCR-SSP技術(shù)為50例無(wú)親緣關(guān)系的牙周炎患者和103名無(wú)血緣關(guān)系的健康漢族人行Foxp3-924 （rs2232365）基因分型。 結(jié)果 Foxp3-924（rs2232365）位點(diǎn)AA、GA、GG三種基因型頻率在牙周炎患者中分別為24.0%（12/50）、34.0%（17/50）和42.0%（21/50）；而正常對(duì)照組分別為23.3%（24/103）、28.2%（29/103）和48.5%（50/103），F(xiàn)oxp3-924（rs2232365）位點(diǎn)A 、G等基因頻率在牙周炎患者中分別為 41.0 %和59.0%，正常對(duì)照組分別為37.38%和62.62%，F(xiàn)oxp3-924位點(diǎn)各基因型和等位基因在牙周炎患者和正常對(duì)照組中無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P > 0.05）。 結(jié)論 Foxp3-924（rs2232365）基因多態(tài)性與牙周炎無(wú)顯著相關(guān)。

[關(guān)鍵詞] 牙周炎；Foxp3-924 （rs2232365）；多態(tài)性

[中圖分類號(hào)] R781.4+2 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1673-9701（2013）18-0133-03

牙周炎是一種慢性感染性疾病，研究發(fā)現(xiàn)細(xì)胞因子參與牙周炎的致病機(jī)制，其中細(xì)胞因子的基因多態(tài)性與牙周炎關(guān)系已成為研究的熱點(diǎn)。學(xué)者發(fā)現(xiàn)人Foxp3基因發(fā)生多個(gè)突變，某些自身免疫性疾病的發(fā)病與Foxp3基因多態(tài)性相關(guān)，目前國(guó)內(nèi)外對(duì)Foxp3-924 （rs2232365）基因多態(tài)性與牙周炎關(guān)系的研究較少，本文擬探討Foxp3-924（rs2232365）基因多態(tài)性在牙周炎病人中的分布及牙周炎和Foxp3基因的相關(guān)性。

1材料與方法

1.1研究對(duì)象

收集2011年1月～2013年1月我院口腔門診中重度成人牙周炎患者50例， 診斷標(biāo)準(zhǔn)參照《中華口腔學(xué)》，其中男23例，女27例；年齡（40±11）歲，病程5～33年，所有病例均攝曲面平展X線片結(jié)合臨床檢查確診。健康對(duì)照者103人，經(jīng)檢查排除牙周炎疾病，年齡（36±14）歲，兩組患者的年齡及性別和對(duì)照者均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)的差異。

1.2 材料

1.3 制備標(biāo)本基因組DNA

1.4 Foxp3-924（rs2232365）位點(diǎn)多態(tài)性檢測(cè)

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 PCR擴(kuò)增

2.2 Foxp3-924（rs2232365）等位基因的指定

2.3 牙周炎患者Foxp3-924（rs2232365）基因型頻率與等位基因頻率的分布

見表1。如表1所示，F(xiàn)oxp3-924（rs2232365）位點(diǎn)AA、GA、GG三種基因型頻率在牙周炎患者中分別為24%、34%和42%；在正常對(duì)照中分別為23.3%、28.2%和48.5%。與正常對(duì)照組比較，牙周炎患者中的AA、GA、GG基因型頻率無(wú)明顯差異（P > 0.05）。

3討論

成人牙周炎是牙周組織慢性感染性疾病。細(xì)胞因子遺傳因素參與其免疫炎癥性發(fā)病過程，如認(rèn)為細(xì)胞因子IL-1β、TNF、IL-1R等位基因多態(tài)性與牙周病的發(fā)病相關(guān)。Fox Forkhead （box）是脊索動(dòng)物叉狀頭轉(zhuǎn)錄因子的簡(jiǎn)稱， Foxp3是轉(zhuǎn)錄因子中的新成員，定位于染色體Xp11.23。HORI S研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)oxp3基因是CD4+CD25+Treg細(xì)胞活化的標(biāo)記，參與該細(xì)胞的發(fā)育和功能維持。人類Foxp3基因存在多種突變，并導(dǎo)致X連鎖自身免疫與過敏失調(diào)綜合征。因此，檢測(cè)CD4+CD25+Treg細(xì)胞上Foxp3mRNA表達(dá)水平對(duì)了解自身免疫性疾病的發(fā)病過程有重要意義。

牙周炎的病因和發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜[1-3]，有學(xué)者發(fā)現(xiàn)牙周炎時(shí)患者受到細(xì)菌、病毒等微生物刺激后引發(fā)牙周組織的破壞，主要表現(xiàn)為上皮和結(jié)締組織的破壞及牙槽骨的喪失，出現(xiàn)炎癥分子和骨代謝相關(guān)蛋白的激活和異常表達(dá)，Th0向Th2細(xì)胞過度分化是參與牙周炎發(fā)病的重要因素，Treg細(xì)胞的產(chǎn)生、減少或Treg細(xì)胞功能障礙，導(dǎo)致不能發(fā)揮正常的免疫抑制功能。Karagiannidis[4]等報(bào)道接受糖皮質(zhì)激素治療可以改善患者 Foxp3 表達(dá)水平同時(shí)增加Treg細(xì)胞數(shù)量。據(jù)研究報(bào)道稱[5]， Foxp3和CD4+CD25+T細(xì)胞對(duì)Th2細(xì)胞調(diào)節(jié)異常可能是自身免疫性疾病發(fā)生的重要原因。通過免疫組化和實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)了牙周炎患者的Foxp3表達(dá)水平，證實(shí)了牙周炎患者Foxp3表達(dá)降低，表明牙周炎的患者發(fā)生調(diào)節(jié)性T細(xì)胞抑制功能的異常，進(jìn)一步導(dǎo)致Th2細(xì)胞因子表達(dá)增強(qiáng)，但究竟什么原因造成牙周炎的CD4+CD25+T細(xì)胞下調(diào)的原因有待進(jìn)一步研究證明。Foxp3的基因的多態(tài)性可引發(fā)多種自身免疫性疾病，均是由于功能性Treg細(xì)胞缺失造成，Duarte PM等[6]研究證實(shí)Foxp3 基因多態(tài)性改變能夠降低非活性型的Treg細(xì)胞的表達(dá)。已有研究發(fā)現(xiàn)，在人類Foxp3基因有13個(gè)突變被報(bào)道，其中研究得較多的是-3279位點(diǎn)，楊韶艷等[7]和Zhang L等[8]發(fā)現(xiàn)Foxp3 -3279基因多態(tài)性位點(diǎn)分別與斑禿、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、過敏性鼻炎發(fā)病等疾病相關(guān)；而Foxp3 -924基因多態(tài)性位點(diǎn)與疾病的相關(guān)研究不多，André GM等[9]發(fā)現(xiàn)Foxp3 -924基因多態(tài)性分別與習(xí)慣性流產(chǎn)和子宮內(nèi)膜異位導(dǎo)致的不孕癥發(fā)病相關(guān)。 為此，我們對(duì)牙周炎Foxp3-924（rs2232365）位點(diǎn)基因多態(tài)性進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果表明牙周炎Foxp3-924（rs2232365）各基因型頻率和基因頻率與對(duì)照組相比，各等位基因無(wú)顯著性差異，提示了牙周炎可能與Foxp3-924（rs2232365）多態(tài)性無(wú)關(guān)聯(lián)，由于研究樣本量較少，而且沒探究其他細(xì)胞因子的多態(tài)性位點(diǎn)及其他危險(xiǎn)因素的影響，今后有待于增加檢測(cè)樣本，進(jìn)行多因素分析確定牙周炎的主要危險(xiǎn)因素。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Liu D，Xu J，Liu O，et al.Mesenchymal stem cells derived from inflamed periodontal ligaments exhibit impaired immunomodulation[J]..J Clin Periodontol，2012，39（12）：1174-1182.

[2] Napimoga MH，da Silva CA，Carregaro V，et al.Exogenous administration of 15d-PGJ2-loaded nanocapsules inhibits bone resorption in a mouse periodontitismodel[J].J Immunol，2012 ，189（2）：1043-1052.

[3] Okui T，Aoki Y，Ito H，et al.The presence of IL-17+/FOXP3+ double-positive cells inperiodontitis[J].J Dent Res，2012，91（6）：574-579.

[4] Karlsson MR，Rugtveit J，Brandtzaeg P.Allergen-responsive CD4+CD25+ regulatory T cells in children who have outgrown cow’s milk allergy[J].J Exp Med，2004，199：1679-1688.

[5] Zhang L， Zhang Y， Desrosiers M，et al. Genetic association study of FOXP3 polymorphisms in allergic rhinitis in a Chinese population[J].Hum Immunol，2009，70（11）：930-934.

[6] Duarte PM，Miranda TS，Lima JA，et al. Expression of immune-inflammatory markers in sites of chronicperiodontitis in patients with type 2 diabetes[J].J Periodontol，2012，83（4）：426-434.

[7] Yang Shao-Yan， Guo xiong，Song zhiqiang， et al. FOXP3 gene polymorphism and alopecia areata association studies[J]. Journal of Immunology， 2010， 26（4）：320.

[8] Zhang L， Zhang Y， Desrosiers M，et al. Genetic association study of FOXP3 polymorphisms in allergic rhinitis in a Chinese population[J].Hum Immunol，2009，70（11）：930-934.

[9] André GM， Barbosa CP， Teles JS， et al.Analysis of FOXP3 polymorphisms in infertile women with and without endometriosis[J].Fertil Steril，2011，95（7）：2223-2227.

（收稿日期：2013-04-11）