副波長(zhǎng)選擇對(duì)免疫抑制法測(cè)定肌酸激酶同工酶活性的影響

[摘要] 目的 探討副波長(zhǎng)選擇對(duì)西門子ADVIA 2400全自動(dòng)生化分析儀免疫抑制法測(cè)定肌酸激酶同工酶（CK-MB）的影響。 方法 選擇不同副波長(zhǎng)對(duì)溶血、黃疸、脂血等干擾樣本和正常對(duì)照血清樣本進(jìn)行測(cè)定。 結(jié)果 副波長(zhǎng)寬度的選擇對(duì)外觀正常對(duì)照樣本血清影響差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。以405 nm、480 nm、450 nm、505 nm為副波長(zhǎng)的雙波長(zhǎng)法檢測(cè)血紅蛋白、膽紅素、乳糜血等干擾樣本，干擾樣本與對(duì)照間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P <0.05）。 結(jié)論 免疫抑制法檢測(cè)CK-MB應(yīng)根據(jù)樣本干擾物的種類來選擇不同的副波長(zhǎng)。

[關(guān)鍵詞] 副波長(zhǎng)；CK-MB；血紅蛋白；膽紅素；乳糜血

[中圖分類號(hào)] R446.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1673-9701（2013）18-0108-02

肌酸激酶（Creatine Kinase，CK） 是人體能量代謝過程中的重要酶類，由肌肉（M）型和腦（B）型兩種單體亞單位組成，包括CK-MB、CK-MM和CK-BB三種同工酶，其中CK-MB對(duì)于診斷急性心肌梗死有重要作用，是應(yīng)用最廣泛的心肌損傷指標(biāo)之一[1]。目前酶法測(cè)定CK-MB活性最常用的是免疫抑制法，研究發(fā)現(xiàn)輕微溶血、膽紅素、乳糜血對(duì)測(cè)定結(jié)果影響較小，但中度及重度溶血、膽紅素、乳糜血會(huì)嚴(yán)重影響測(cè)定結(jié)果.副波長(zhǎng)的選擇可以消除部分干擾。干擾物對(duì)某些生化指標(biāo)的影響已有文獻(xiàn)報(bào)道，但不同副波長(zhǎng)選擇對(duì)免疫抑制法測(cè)定CK-MB抗干擾的研究較少，本文就副波長(zhǎng)的選擇測(cè)定CK-MB的影響作一些探討。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

ADVIA 2400全自動(dòng)生化分析儀購于德國(guó)西門子公司；免疫抑制法CK-MB試劑盒購于寧波美康生物科技股份有限公司，批號(hào)為20120417；游離膽紅素及結(jié)合膽紅素購于百靈威科技有限公司，批號(hào)分別為L(zhǎng)K50L19和JH10-4286；血紅蛋白購于上海瑞齊生物科技有限公司，批號(hào)為20101203；中/長(zhǎng)鏈脂肪乳注射液（C6-C24）購于華瑞制藥有限公司，批號(hào)：80DH066。

1.2 檢測(cè)方法

收集本院生化室2012年2月份外觀正常體檢標(biāo)本50份，應(yīng)用免疫抑制法檢測(cè)CK-MB活性，所有測(cè)定嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行操作。測(cè)試條件如下：溫度：37 ℃；比色杯光徑為1.0 cm；檢測(cè)主波長(zhǎng)340 nm；樣品（校準(zhǔn)管以校準(zhǔn)品做樣品）加R1混勻，37℃孵育5 min后加入R2混勻，37℃孵育2 min，連續(xù)監(jiān)測(cè)1～3 min吸光度變化，計(jì)算每分鐘的吸光度變化，其中樣本用量10 μL，試劑1用量200 μL，試劑2用量50 μL。選擇好儀器測(cè)試程序后，將副波長(zhǎng)依次設(shè)為無、405、450、480、505、546、570、600、660、700、750 nm，其他參數(shù)不變，取正常血清50份測(cè)其CK-MB，然后分別制備溶血（游離血紅蛋白濃度>400 mg/L以上）、脂血（總膽固醇濃度>4.8 mmol/L）和黃疸（總膽紅素濃度>50 mmol/L）干擾標(biāo)本，選擇不同的副波長(zhǎng)測(cè)定CK-MB活性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。正態(tài)分布的計(jì)量資料以（x±s）表示，兩組間均數(shù)比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間樣本均值間差異采用單因素方差分析，P <0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

不同副波長(zhǎng)測(cè)定干擾樣本和正常對(duì)照樣本結(jié)果見表1。當(dāng)樣本外觀正常時(shí)（無溶血、黃疸、脂血），不同副波長(zhǎng)測(cè)定結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=5.00，P=0.6415）。溶血干擾樣本在405 nm 副波長(zhǎng)的測(cè)定結(jié)果與對(duì)照樣本差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=3.452，P=0.003）。脂血干擾樣本在480 nm 副波長(zhǎng)的測(cè)定結(jié)果與對(duì)照樣本差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=5.124，P=0.000）。膽紅素干擾樣本，在使用405、450、480、505 nm 副波長(zhǎng)時(shí)，其測(cè)定結(jié)果與對(duì)照樣本相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均<0.05）。

3 討論

自動(dòng)生化分析儀可選擇單波長(zhǎng)或雙波長(zhǎng)測(cè)定，單波長(zhǎng)測(cè)定易受溶血、脂濁等因素的干擾， 而恰當(dāng)組合的雙波長(zhǎng)測(cè)定可通過副波長(zhǎng)加以修正， 減少甚至消除干擾因素， 使結(jié)果更加可靠，如不合理使用雙波長(zhǎng)測(cè)定則不僅不能消除干擾，甚至?xí)垢蓴_幅度增強(qiáng)，干擾方向變得混亂[2，3]。

CK-MB是應(yīng)用最廣泛的心肌損傷指標(biāo)之一[1]，其準(zhǔn)確測(cè)定對(duì)于心肌損傷早期診斷及梗死范圍大小或再梗死的估計(jì)有重要意義。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，當(dāng)樣本外觀正常時(shí)（無溶血、黃疸、脂血），使用不同副波長(zhǎng)的雙波長(zhǎng)法測(cè)定結(jié)果差異不大，但當(dāng)樣本受膽紅素、血紅蛋白、脂血干擾時(shí)，結(jié)果差異就很明顯。膽紅素是體內(nèi)鐵卟啉化合物的代謝產(chǎn)物，在血清中有3種存在形式：未結(jié)合膽紅素、結(jié)合膽紅素和共價(jià)結(jié)合于清蛋白的膽紅素，由于膽紅素性質(zhì)不穩(wěn)定，容易異構(gòu)化、烯醇化及自行氧化， 并且其光譜學(xué)特性還與其存在的介質(zhì)密切相關(guān)，因此，在不同樣本、不同檢測(cè)環(huán)境中，其干擾程度及形式大相徑庭[4]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，當(dāng)選擇405、450、480、505 nm副波長(zhǎng)時(shí)，膽紅素對(duì)檢測(cè)的正干擾非常顯著；采用546、570、600、660 nm副波長(zhǎng)條件下，膽紅素干擾現(xiàn)象不明顯，此結(jié)果也符合此前報(bào)道的具有較強(qiáng)降低膽紅素干擾的雙波長(zhǎng)組合[5]。溶血也是臨床檢驗(yàn)工作中經(jīng)常遇到的樣本異常問題，通過分析我們發(fā)現(xiàn)，對(duì)于血紅蛋白干擾樣本，僅在使用405 nm副波長(zhǎng)時(shí)，其測(cè)定結(jié)果與對(duì)照樣本有顯著差異。由于溶血對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的影響包括很多方面，如紅細(xì)胞內(nèi)外成分濃度差；內(nèi)、外液成分之間反應(yīng)的干擾；有色物質(zhì)對(duì)吸收光譜的干擾；溶血樣本中血紅素中正鐵離子的干擾等。前期研究發(fā)現(xiàn)，溶血后紅細(xì)胞內(nèi)富含的腺苷酸激酶與ADP反應(yīng)生成ATP，ATP參與CK、CK-MB活性檢測(cè)反應(yīng)會(huì)導(dǎo)致其假性升高，所以溶血對(duì)CK-MB的檢測(cè)存在干擾[6]。而本文實(shí)驗(yàn)結(jié)果沒有得到類似結(jié)論，推測(cè)可能與僅添加血紅蛋白作為干擾物有關(guān)。

本文采用“配對(duì)差異”實(shí)驗(yàn)對(duì)不同副波長(zhǎng)下CK-MB抗干擾能力進(jìn)行考察，此法通過把一個(gè)潛在的干擾物質(zhì)添加到樣本中，評(píng)價(jià)其相對(duì)于未加干擾物的對(duì)照樣本的偏差來判斷該物質(zhì)是不是干擾物質(zhì)。由于是人為加入干擾物，因此存在一些局限性：如添加化合物的特性可能不同于那些在體內(nèi)自然循環(huán)狀態(tài)下的化合物；實(shí)驗(yàn)樣本基質(zhì)并不代表典型的有問題的臨床樣本；樣本中真實(shí)的干擾物可能不是原來的藥物，而是代謝產(chǎn)物；試驗(yàn)濃度水平可能選擇太低或太高以致不真實(shí)等[7-11]。但此法也是目前臨床應(yīng)用最廣泛的干擾評(píng)價(jià)試驗(yàn)，有其獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)，如可以提高效率，提供更多的信息，與一次一個(gè)檢測(cè)相比需要的分析物較少，干擾物質(zhì)之間及干擾物與分析物之間的相互作用都能夠被評(píng)價(jià)等[12]。

綜上所述，本文采用“配對(duì)差異”干擾評(píng)價(jià)試驗(yàn)，為正確的設(shè)置測(cè)試參數(shù)以避免臨床應(yīng)用中膽紅素及血紅蛋白對(duì)免疫抑制法CK-MB測(cè)定干擾提供了依據(jù)。根據(jù)本文結(jié)果，免疫抑制法CK-MB檢測(cè)應(yīng)避免340/405 nm、340/450 nm、340/480 nm、340/505 nm組合的雙波長(zhǎng)法測(cè)試程序。

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（收稿日期：2013-03-21）