穿刺活檢聯(lián)合流式細(xì)胞儀檢測(cè)對(duì)惡性淋巴瘤診斷和分型臨床研究

[摘要] 目的 探討穿刺活檢聯(lián)合流式細(xì)胞儀檢測(cè)對(duì)惡性淋巴瘤診斷和分型的情況。 方法 回顧性分析 2009年3月～2012年3月在我市兩所醫(yī)院就診的惡性淋巴瘤患者62例，均進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測(cè)和穿刺活檢。 結(jié)果 應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果為：骨髓受累者55例，其中非霍奇金淋巴瘤45例，霍奇金淋巴瘤10例；應(yīng)用穿刺活檢檢測(cè)結(jié)果為：骨髓受累者28例，其中 6例在流式細(xì)胞儀檢測(cè)中未檢測(cè)出；具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P < 0.05）。 結(jié)論 應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)比應(yīng)用穿刺活檢法有更高的準(zhǔn)確度，但也有假陰性的現(xiàn)象，所以應(yīng)該將穿刺活檢聯(lián)合流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)，這樣能提高準(zhǔn)確度。

[關(guān)鍵詞] 穿刺活檢；流式細(xì)胞儀檢測(cè)；聯(lián)合檢測(cè)

[中圖分類號(hào)] R733.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1673-9701（2013）18-0106-02

淋巴細(xì)胞發(fā)生了惡性增生就會(huì)形成惡性淋巴瘤。惡性淋巴瘤常見表現(xiàn)為骨髓受累。淋巴瘤的病理類型約70種，主要可分為霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤這兩種類型。在我國(guó)，大部分患者為非霍奇金淋巴瘤[1]，約90%。隨著社會(huì)的進(jìn)步，人們生活水平的提高，惡性淋巴瘤在近20年來的發(fā)病率逐年升高[2]，怎樣準(zhǔn)確診斷惡性淋巴瘤是臨床上亟待解決的難題之一。本文回顧性分析了2009年3月～2012年3月在我市兩所醫(yī)院就診的惡性淋巴瘤患者62例，目的是研究穿刺活檢聯(lián)合流式細(xì)胞儀檢測(cè)對(duì)惡性淋巴瘤診斷和分型的情況。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2009年3月～2012年3月在我市兩所醫(yī)院就診的惡性淋巴瘤患者62例，其中男34例，女28例，年齡14～74歲，平均（47.4±2.5）歲；非霍奇金淋巴瘤55例，其中T細(xì)胞來源15例，B細(xì)胞來源26例，霍奇金淋巴瘤11例， 其余不詳。

1.2 檢測(cè)方法

1.2.1 流式細(xì)胞儀檢測(cè) 抽取骨髓液5 mL，立即加入15 mL肝素抗凝，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)。并分離出單個(gè)的核細(xì)胞，將核細(xì)胞進(jìn)行洗滌，將細(xì)胞數(shù)量控制在（1～3）×106。再取20支試管，每支試管中加入100 μL的核細(xì)胞，依次在每支試管中加入20 μL熒光標(biāo)記過的單克隆抗體、CD2、CD4、CD5、CD3、CD9、CD10、CD8、CD7、CD34、CD20、CD15等。將這些試管在4℃冰箱里放置15 min，用小鼠血清IgG作為陰性對(duì)照。在每支試管中加入2～3 mL的紅細(xì)胞裂解液[3]，離心20 min，離心后產(chǎn)物用PBS洗滌1～2次。最后用流式細(xì)胞儀進(jìn)行分析。用Cell Quest來分析，先圈定異常幼稚細(xì)胞群，計(jì)算各細(xì)胞表面抗原的陽性百分率，如果被標(biāo)記的細(xì)胞大于總數(shù)的20%，則為陽性。

1.2.2 穿刺活檢 在患者身上做骨穿，抽取3 mL骨髓液，進(jìn)行涂片和染色，在顯微鏡下觀察。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用 SPSS 17.0軟件來進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)及處理，計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)，P < 0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果為：骨髓受累者55例，其中非霍奇金淋巴瘤45例，霍奇金淋巴瘤10例；應(yīng)用穿刺活檢檢測(cè)結(jié)果為：骨髓受累者28例，其中有6例在流式細(xì)胞儀檢測(cè)中未檢測(cè)出；兩組結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（χ2=6.45，P < 0.05），見表1。流式細(xì)胞儀檢測(cè)得到的惡性淋巴瘤骨髓受累方法中，a型11例，b型0例，c型28例，d型16例。

3 討論

在淋巴結(jié)和結(jié)外淋巴組織產(chǎn)生的細(xì)胞腫瘤就叫做淋巴瘤。按照現(xiàn)行統(tǒng)一的分類[4]，惡性淋巴瘤可分為非霍奇金淋巴瘤和霍奇金淋巴瘤兩大類。惡性淋巴瘤常見的表現(xiàn)主要為淋巴受累。骨髓檢查的目的就是了解骨髓造血功能和骨髓受累的情況，確定惡性淋巴瘤的分型，從而為選擇藥物和選擇治療手段提供依據(jù)。

有研究報(bào)道，2%～74%的淋巴瘤有骨髓受累現(xiàn)象[5]，非霍奇金淋巴瘤的骨髓受累為16%～75%，霍奇金淋巴瘤的骨髓受累為2%～32%。用骨髓活檢的方法發(fā)現(xiàn)骨髓受累率為21%。而應(yīng)用針吸骨髓涂片法發(fā)現(xiàn)骨髓受累率約為15%～33%。國(guó)內(nèi)的骨髓受累檢出率遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于國(guó)外，主要原因?yàn)槲覈?guó)在這方面的技術(shù)不過關(guān)，儀器精度較低。隨著科技的發(fā)展，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)已經(jīng)問世，應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)骨髓受累無疑能提高檢出率。

惡性腫瘤的主要治療方法就是保肢治療，它要求穿刺活檢有更嚴(yán)格的方法。如果穿刺活檢不正確，容易造成腫瘤對(duì)局部血管和神經(jīng)的污染，導(dǎo)致穿刺活檢失敗。所以在進(jìn)行穿刺活檢時(shí)，要對(duì)腫瘤有充分的了解。在穿刺活檢中，需要免疫標(biāo)記，免疫標(biāo)記時(shí)，有許多抗體可供選用，但一定要根據(jù)抗體的種類，選擇合適的抗原修復(fù)方法，如消化法和微波法等。

流式細(xì)胞術(shù)能對(duì)細(xì)胞進(jìn)行自動(dòng)分選和分析。將細(xì)胞溶液放入流式細(xì)胞儀，就可以測(cè)量細(xì)胞的各種性質(zhì)，如生物物理性質(zhì)和生物化學(xué)性質(zhì)，也可以根據(jù)細(xì)胞的性質(zhì)，將細(xì)胞從特定的范圍內(nèi)分選出來。

本文通過流式細(xì)胞儀對(duì)62例惡性淋巴瘤患者進(jìn)行檢驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)骨髓受累患者55例，通過穿刺活檢對(duì)62例惡性淋巴瘤患者檢測(cè)發(fā)現(xiàn)骨髓受累患者28例，其中6例未在流式細(xì)胞儀中檢測(cè)出。通過統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，兩種方法檢測(cè)出的骨髓受累患者有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P < 0.05），說明用流式細(xì)胞儀檢測(cè)的方法優(yōu)于穿刺活檢的方法。但是有6例患者在穿刺活檢中呈陽性，但在流式細(xì)胞儀檢測(cè)中呈陰性，這表明流式細(xì)胞儀還未達(dá)到100%的檢測(cè)準(zhǔn)確度。穿刺活檢這種方法樣本量小，準(zhǔn)確度小，但方便可行，而流式細(xì)胞儀檢測(cè)操作復(fù)雜，準(zhǔn)確性高，只有兩種方法結(jié)合，才能更精確地檢測(cè)惡性淋巴瘤骨髓受累。

臨床分期與患者的治療方法有密切的關(guān)系。如果惡性淋巴瘤患者有骨髓受累，那么患者的臨床分期就為Ⅳ期，應(yīng)該引起重視。本文用流式細(xì)胞儀檢測(cè)比用穿刺活檢法檢測(cè)出更多的骨髓受累患者，這說明流式細(xì)胞儀檢測(cè)技術(shù)精確度更高，值得臨床上應(yīng)用。目前用得較多的方法就是穿刺活檢法，而流式細(xì)胞儀檢測(cè)法還未得到更普遍的應(yīng)用。

通過本文的研究，發(fā)現(xiàn)應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)比應(yīng)用穿刺活檢法有更高的準(zhǔn)確度，但也有假陰性的現(xiàn)象，所以應(yīng)該將穿刺活檢聯(lián)合流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)，這樣能提高準(zhǔn)確度。

[參考文獻(xiàn)]

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（收稿日期：2013-03-18）