ADAM12與IGF—Ⅱ聯(lián)合檢測(cè)與自然流產(chǎn)相關(guān)性研究

[摘要] 目的 探討ADAM12、IGF-Ⅱ聯(lián)合檢測(cè)與自然流產(chǎn)的關(guān)系。 方法 放免法、時(shí)間分辨熒光法分別檢測(cè)正常妊娠、先兆流產(chǎn)、稽留流產(chǎn)組血清IGF-Ⅱ、ADAM12-S水平；原位雜交法檢測(cè)絨毛組織ADAM12-S、IGF-ⅡmRNA水平。 結(jié)果 ①血清ADAM12-S、IGF-Ⅱ表達(dá)在正常妊娠、先兆流產(chǎn)、稽留流產(chǎn)依次下降，兩兩有顯著差別（P <0.05）。②絨毛ADAM12-S、IGF-Ⅱ的mRNA表達(dá)在正常妊娠組、先兆流產(chǎn)組、稽留流產(chǎn)組依次下降，兩兩比較有顯著性差別（P < 0.05）。③血清ADAM12-S與IGF-II表達(dá)正相關(guān)（r = 0.309），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。 結(jié)論 聯(lián)合檢測(cè)ADAM12和IGF-Ⅱ可提高預(yù)測(cè)自然流產(chǎn)的準(zhǔn)確性，兩者相互作用失衡可能是導(dǎo)致自然流產(chǎn)發(fā)生的重要原因。

[關(guān)鍵詞] 自然流產(chǎn)；ADAM12；IGF-II

[中圖分類號(hào)] R714.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1673-9701（2013）18-0037-02

近年來(lái)，自然流產(chǎn)的發(fā)生率越來(lái)越高，只有很少部分可以找出明確的原因，大部分發(fā)生機(jī)制并不是十分清楚，預(yù)測(cè)方法更加缺乏，很難采取預(yù)防性治療措施，避免不良結(jié)局的發(fā)生。近年來(lái)多項(xiàng)研究證實(shí)IGF-Ⅱ、ADAM12均與自然流產(chǎn)的發(fā)生關(guān)系密切。解整合素-金屬蛋白酶12（A disintegrin and metalloproteinase 12； meltrin-，ADAM12）是一種與組織生長(zhǎng)及器官發(fā)育相關(guān)的含鋅蛋白酶， ADAM12的濃度在整個(gè)孕期隨孕周增加升高，特別是早期敏感[1]。胰島素樣生長(zhǎng)因子2（Insulin-like growth factor Ⅱ，IGF-Ⅱ）調(diào)節(jié)妊娠早期發(fā)育的多個(gè)環(huán)節(jié)，影響早期胚胎絨毛細(xì)胞滋養(yǎng)層的侵入、分化和胎盤形成。ADAM12-S作為一種胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白的水解酶，對(duì)體內(nèi)的IGF-Ⅱ的生物活性起著調(diào)節(jié)作用。本研究旨在探討ADAM12與IGF-Ⅱ與早期自然流產(chǎn)發(fā)生的關(guān)系， 為臨床探析自然流產(chǎn)的發(fā)病機(jī)制及早期預(yù)測(cè)方案提供新的思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2011 年4月～2012 年9 月在我院婦產(chǎn)科門診行清宮術(shù)的患者，符合以下要求者納入研究人群：1）年齡在20-35歲之間；2）停經(jīng)6～10 周，B超證實(shí)為宮內(nèi)單胎妊娠；3）孕前6 個(gè)月月經(jīng)規(guī)則，近3個(gè)月未服用過(guò)甾體類激素藥物；4）無(wú)內(nèi)科疾患，外傷，精神刺激或生殖系統(tǒng)畸形等異常。分為三組：正常對(duì)照組35例，先兆流產(chǎn)組34例，稽留流產(chǎn)組39例。三組的年齡分別為20～34（27.22±2.89）歲、24～35（30.56±3.26）歲、21～34（29.56±2.87）歲，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）；孕周分別為6+6～9+2（7.86±1.02）周、7+2～9+6（8.35±1.89）、6+1～9+5（7.92±1.43）周，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。

1.2 方法

1.2.1血標(biāo)本采集 吸宮前10 min抽取肘靜脈血5 mL，置入干燥不抗凝的試管內(nèi)，以3 000 r/ min，離心15 min，獲取血清置入-70℃冰箱保存，成批采用放射免疫法測(cè)定IGF-Ⅱ含量及時(shí)間分辨熒光檢測(cè)法測(cè)定ADAM12-S含量。放免試劑盒由上海麥莎生物科技有限公司提供，試驗(yàn)步驟嚴(yán)格按說(shuō)明書步驟進(jìn)行。時(shí)間分辨熒光免疫分析采用芬蘭PerKinElmer公司提供的試劑盒及其配套時(shí)間分辨熒光免疫分析Victor1420 型檢測(cè)儀。

1.2.2 病理標(biāo)本采集 各組于人工流產(chǎn)術(shù)或清宮術(shù)后留取絨毛組織以10%甲醛固定、石蠟包埋，制片厚4 μm，采用原位雜交方法測(cè)定ADAM12與IGF-ⅡmRNA的表達(dá)，并請(qǐng)病理專業(yè)人員雙盲閱片，在光學(xué)顯微鏡下隨機(jī)抽取5個(gè)高倍視野，Motic B5 顯微攝像系統(tǒng)攝像，MIAS醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)計(jì)算每個(gè)視野的平均吸光值（A），計(jì)算ADAM12與IGF-ⅡmRNA的表達(dá)水平。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

計(jì)量資料均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用SPSS16.0 統(tǒng)計(jì)軟件包多組間F檢驗(yàn)，以α=0.05（雙尾）為檢驗(yàn)水準(zhǔn)，P <0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清中ADAM12-S及IGF- II的表達(dá)水平

①血清ADAM12-S表達(dá)水平在正常妊娠組（226.62±12.45）、先兆流產(chǎn)組（149.15±10.98）、稽留流產(chǎn)組（98.24±8.16）依次下降，兩兩相比均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）；②血清IGF-Ⅱ表達(dá)水平在正常妊娠組（140.52±11.75）、先兆流產(chǎn)組（97.88±9.34）、稽留流產(chǎn)組（45.32±6.05）依次下降，兩兩相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。見(jiàn)表1。

2.2絨毛組織中ADAM12-SmRNA及IGF- IImRNA的表達(dá)水平

①絨毛組織ADAM12-SmRNA表達(dá)水平在正常妊娠組（0.87±0.12 ）、先兆流產(chǎn)組（0.65±0.18）、稽留流產(chǎn)組（0.36±0.15）依次下降，兩兩相比均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）；②絨毛組織中 IGF-ⅡmRNA表達(dá)水平在正常妊娠組（0.96±0.21）、先兆流產(chǎn)組（0.68±0.19）、稽留流產(chǎn)組（0.45±0.17）依次下降，兩兩相比均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。見(jiàn)表2。

2.3血清中ADAM12-S及IGF- II的表達(dá)水平的相關(guān)性分析

血清中ADAM12-S與IGF- II的表達(dá)水平呈正相關(guān)，相關(guān)指數(shù)為r = 0.309，P < 0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 討論

胰島素樣生長(zhǎng)因子系統(tǒng)結(jié)構(gòu)與胰島素相似，通過(guò)自分泌或旁分泌方式發(fā)揮作用，有促進(jìn)細(xì)胞繁殖、分化、生長(zhǎng)、代謝等多種生物效應(yīng)[2]，其中IGF-Ⅱ更是被認(rèn)為參與了早期妊娠多個(gè)環(huán)節(jié)的調(diào)節(jié)，是胚胎發(fā)育的重要影響因子[3，4]。妊娠6周時(shí)，IGF-Ⅱ即隨絨毛膜外合體滋養(yǎng)層滲透和浸入到母體基質(zhì)，在固定絨毛的浸入性滋養(yǎng)層細(xì)胞柱中可見(jiàn)大量IGF-ⅡmRNA 表達(dá)，表達(dá)量呈梯度上升， 在前端侵入部表達(dá)水平最高， 提示IGF-Ⅱ參與著床的過(guò)程，在滋養(yǎng)層細(xì)胞的侵入中起一定作用[5]。McKinnon進(jìn)行絨毛外滋養(yǎng)層細(xì)胞的體外培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)提示絨毛外滋養(yǎng)層細(xì)胞位移和侵襲是由IGF-Ⅱ誘發(fā)，其誘發(fā)作用的信號(hào)傳導(dǎo)是通過(guò)IGF-ⅡR及其他信號(hào)傳導(dǎo)途徑完成[6]，提示IGF-Ⅱ參與調(diào)節(jié)滋養(yǎng)細(xì)胞侵入，影響胚胎著床過(guò)程。Lopez 等[7]通過(guò)對(duì)妊娠裸鼠的研究發(fā)現(xiàn)，IGF-Ⅱ參與胎盤的生長(zhǎng)機(jī)制，IGF-II在胎盤中可調(diào)控糖原合成及糖原細(xì)胞的數(shù)量，影響胎盤的生長(zhǎng)，從而進(jìn)一步影響胎兒發(fā)育。IGF-Ⅱ低水平表達(dá)時(shí)，能通過(guò)影響胎盤功能而妨礙胚胎及滋養(yǎng)葉的生長(zhǎng)發(fā)育，同時(shí)炎性細(xì)胞因子分泌增多，使免疫微環(huán)境的破壞和發(fā)生異常的免疫排斥反應(yīng)，如IGF-Ⅱ表達(dá)水平嚴(yán)重降低時(shí)甚至可能導(dǎo)致胚胎死亡[8]。本研究中孕婦血清及絨毛組織中的IGF-Ⅱ表達(dá)水平在正常妊娠組、先兆流產(chǎn)組、稽留流產(chǎn)組依次下降，表明孕婦血清IGF-Ⅱ低水平表達(dá)與胚胎發(fā)育不良及流產(chǎn)的發(fā)生密切相關(guān)， 稽留流產(chǎn)孕婦血清中IGF-Ⅱ表達(dá)更是顯著降低。研究結(jié)果提示IGF-Ⅱ的表達(dá)水平可用來(lái)反映胚胎的發(fā)育狀況，有望成為預(yù)測(cè)早期不良妊娠結(jié)局的一個(gè)敏感因子。

ADAM12是一個(gè)擁有多功能區(qū)域的蛋白，在細(xì)胞分化、黏附、融合和相互作用過(guò)程中發(fā)揮重要的作用，在胎盤組織中表達(dá)豐富，參與了滋養(yǎng)細(xì)胞細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化、融合及遷移等多個(gè)環(huán)節(jié)[9]。人ADAM12有膜結(jié)合/可溶性形式（ADAM12-L）和分泌性/可溶性形式（ADAM12-S）兩種，ADAM12-SmRNA只在胎盤組織中表達(dá)，具有妊娠特異性[10]。顧茂勝等證明孕婦血清中ADAM12-S在孕早期隨孕周而增加，中位數(shù)呈線性關(guān)系[11]。吳昊等證明早期先兆流產(chǎn)患者血清中的ADAM12-S水平明顯低于同時(shí)期正常孕婦，并提出ADAM12-S有望成為自然流產(chǎn)早期預(yù)測(cè)指標(biāo)之一[12]。本研究結(jié)果顯示，孕婦血清及絨毛組織中的ADAM12-S表達(dá)水平在正常妊娠組、先兆流產(chǎn)組、稽留流產(chǎn)組依次下降，且兩兩相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05），與其結(jié)果相符。ADAM12-S是胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-3（insulin-like growth factor-binding protein-stree，GFBP-3）和IGFBP-5的水解酶，IGFBP-3作為為IGF在體內(nèi)的主要結(jié)合蛋白，與IGF結(jié)合使其緩慢釋放從而提高IGF的生物活性[13]。ADAM12-S將IGFBP-3分解成小的蛋白水解片段，使IGFBP與IGF的結(jié)合力降低，從而影響IGF的生物活性，這可能是ADAM12參與胚胎發(fā)育調(diào)節(jié)的途徑之一，兩者相互作用失衡可能是導(dǎo)致自然流產(chǎn)發(fā)生的重要原因。本研究發(fā)現(xiàn)孕婦血清中ADAM12-S與IGF- II的表達(dá)水平呈正相關(guān)，也佐證這一觀點(diǎn)。

早期妊娠中孕婦血清及絨毛組織中ADAM12-S與IGF- II的表達(dá)水平與胚胎發(fā)育狀況密切相關(guān)，且兩者之間關(guān)聯(lián)緊密，兩者聯(lián)合檢測(cè)能提高預(yù)測(cè)自然流產(chǎn)的敏感度，值得臨床深入探討。探究?jī)烧叩南嗷プ饔脵C(jī)制可能為探索自然流產(chǎn)的發(fā)病機(jī)制提供新思路。

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（收稿日期：2013-04-01）