基于NIR法雷公藤多甙片快檢方法的研究

[摘要] 目的 應用近紅外漫反射技術(shù)建立雷公藤多甙片一致性檢驗模型快檢方法。 方法 收集雷公藤多甙片的近紅外漫反射光譜，運用OPUS 軟件建立一致性檢驗模型，并用雷公藤多甙片偽品進行驗證。 結(jié)果 正品雷公藤多甙片與偽品有較大差別，利用該一致性檢驗模型能快速、準確地判斷雷公藤多甙片的真?zhèn)巍?結(jié)論 該方法建立的模型操作簡單、快速有效，能作為雷公藤多甙片真?zhèn)舞b別的快速篩選方法。

[關(guān)鍵詞] 近紅外光譜； 雷公藤多甙片； 一致性檢驗

[中圖分類號] R286.0 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2013）31-0061-02

近紅外光譜（near infra red spectrum，NIR），指的是780～2526 nm范圍內(nèi)的電磁波，它介于紫外可見光譜區(qū)域和中紅外光譜區(qū)域之間。近紅外光譜的特點是吸收系數(shù)較低、無損、快速、無污染，因此可以直接對樣品進行測定，不需樣品處理或僅需簡單的處理，在計算機軟件的支持下，可實現(xiàn)對近紅外光譜建立模型、快速分析樣品光譜的功能。近紅外光譜的模型分為定性鑒別模型和定量分析模型，其中定性鑒別模型中以快速比對模型最為簡單，在合理的樣品和建模參數(shù)條件下，模型的準確率也較高。一致性檢驗模型屬于近紅外光譜快速比對模型之一。一致性檢驗是一種快捷的、簡便的圖譜比較方法，能快速區(qū)分未知光譜與某一組參考光譜是否具有一致性[1]。

雷公藤多甙片具有祛風解毒、解濕消腫、舒經(jīng)通絡(luò)的功效及抗炎及抑制細胞和體液免疫等作用，其廣泛用于風濕熱瘀，毒邪阻滯所致的類風濕性關(guān)節(jié)炎、腎病綜合征、白塞氏三聯(lián)癥、麻風反應、自身免疫性肝炎等。本文收集雷公藤多甙片正品近紅外光譜圖建立一致性模型，并利用其它廠家生產(chǎn)的雷公藤多甙片來驗證模型的準確性，結(jié)果表明：雷公藤多甙片一致性模型能快速、準確地鑒別出該廠生產(chǎn)該品種，故本方法可以作為本廠該規(guī)格雷公藤多甙片的快速鑒別方法載入到藥品快檢車上運用，能準確地考察該廠生產(chǎn)的雷公藤多甙片的質(zhì)量，有效地打擊了制售冒牌產(chǎn)品的行為。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

布魯克公司生產(chǎn)Matrix-F 型近紅外光譜儀，配有光纖探頭測樣附件，銦鎵砷（InGaAs）檢測器，OPUS 5.0 光譜分析軟件（英文版及OPUS 6.5 中文版）。Waters2695_2489型高效液相色譜儀，梅特勒XP205型電子天平（d=0.01 mg/0.1 mg），經(jīng)標定的A級100 mL、50 mL單標容量瓶。

1.2 試藥

雷公藤多甙片，安徽新隴海藥業(yè)有限公司生產(chǎn)（規(guī)格：10 mg；10批批號分別為100601、100602、100701、100901、101001、101201、101202、110202、110302、110301），黃石飛云制藥有限公司生產(chǎn)（規(guī)格：10 mg；批號：20091201），上海復旦復華藥業(yè)有限公司生產(chǎn)（規(guī)格：10 mg；批號：110501）。標示為安徽新隴海藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的雷公藤多甙片1批（標示批號：100822）。

2 方法與結(jié)果

2.1 實驗室確證

依據(jù)國家食品藥品監(jiān)督管理局標準WS3-B-3350-98-2011測定，以甲醇-乙腈-水（64∶16∶20）為流動相，設(shè)置HPLC參數(shù)（柱溫為25℃，檢測波長為210 nm），記錄色譜圖（圖1）。結(jié)果安徽新隴海藥業(yè)、黃石飛云制藥有限公司及上海復旦復花藥業(yè)生產(chǎn)的12批雷公藤多甙片均符合規(guī)定，偽品不符合規(guī)定。

2.2 近紅外光譜采集

取合格的雷公藤多甙片及偽品每批各隨即抽取6片，用光纖探頭抵住藥片直接測定。按照指導原則設(shè)定近紅外光譜儀參數(shù)，采用全國統(tǒng)一測定近紅外光譜方法文件，光譜掃描范圍為全波段12000～4000 cm-1，掃描次數(shù)32次，分辨率8 cm-1，共得到78張原始光譜，并計算出各批光譜的平均光譜。近紅外光譜見封三圖1。

2.3 一致性模型建立

取采集好的安徽新隴海藥業(yè)生產(chǎn)的雷公藤多甙片近紅外光譜圖為參考光譜，設(shè)置波段為4200～7500 cm-1，平滑點17，CI限度為5.0。對光譜圖逐次采取一階導數(shù)、二階導數(shù)、一階導數(shù)+矢量歸一化和二階導數(shù)化+矢量歸一化法對圖譜進行處理，經(jīng)比較發(fā)現(xiàn)用二階導數(shù)+矢量歸一化處理方法建立的模型錯判誤判最少，所以采用此種處理方法。

2.4 模型應用

為了考察模型的實際應用效果，分別采用上海復旦復華藥業(yè)有限公司和黃石飛云制藥有限公司生產(chǎn)的雷公藤多甙片及偽品對模型進行驗證考察（封三圖2）。結(jié)果模型能準確區(qū)分出不同廠家生產(chǎn)的雷公藤多甙片，實現(xiàn)了該廠生產(chǎn)的該藥品“身份證“作用，并可以將偽品和正品區(qū)分出來，達到了快速準確鑒別真假雷公藤多甙片的目的。

3 討論

近紅外光譜區(qū)范圍是4000～12000 cm-1，該區(qū)域主要是N-H、O-H、S-H、C-H等含氫基團振動光譜的合頻及倍頻吸收。因此，測量藥品一次近紅外光譜，就可以初步獲得該藥品各類化學成分定性或定量的數(shù)據(jù)，具有同時分析多種化學成分的能力[3-7]。

在建模過程中，近紅外光譜譜段選擇尤為重要，如果選擇全譜段勢必會增加干擾，錯誤選擇有可能將特征峰遺漏。在實驗過程中，筆者認真比對三個廠家生產(chǎn)的雷公藤多甙片及偽品的近紅外光譜圖（封三圖3），發(fā)現(xiàn)黃石飛云制藥有限公司生產(chǎn)的雷公藤多甙片光譜圖在7194.0023 cm-1獨有一峰而其它兩廠沒有，而安徽隴海藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的該藥光譜圖在6967.3180 cm-1處有一峰可以與其它兩廠及偽品明顯區(qū)分。

近紅外光譜一致性檢驗方法可以無損傷、快速、準確地判斷藥品的真?zhèn)?，是一種最常用快速比對模型，建立該方法至少需要參考樣品3～5批次，參考光譜的數(shù)量應在20張以上時，才有較好的代表性，所以，正品的收集及實驗室確證工作也很重要，這是建模工作的基本前提和根本保障。

由于雷公藤多甙片為中成藥，成分復雜，藥材的產(chǎn)地及質(zhì)量，藥材的加工方法等方面對近紅外光譜都有很大影響，所以模型雖然建立，但后續(xù)模型補充工作也尤為重要，只有不斷更新，才可以保證方法的適用性，減少假陽性的產(chǎn)生。

[參考文獻]

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（收稿日期：2013-05-27）