Livin、Beclin1在上皮性卵巢癌中的表達(dá)與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的相關(guān)性

[摘要] 目的 探討Livin、Beclin1在上皮性卵巢癌中的表達(dá)與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的相關(guān)性。 方法 選擇2000～2010年間各類卵巢組織蠟塊65例。以免疫組化法檢測Livin以及Beclin1表達(dá)，分析組織學(xué)分級及臨床分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)性。 結(jié)果 惡性腫瘤Livin及Beclin1表達(dá)顯著強(qiáng)于交界腫瘤，Livin與FIGO分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，Beclin1與組織分化有關(guān)（P<0.05）。 結(jié)論 Livin在卵巢癌發(fā)生和演化及浸潤轉(zhuǎn)移中起重要作用，Beclin1在卵巢癌的發(fā)生發(fā)展中可能起相關(guān)作用。

[關(guān)鍵詞] 上皮性卵巢癌；Livin；Beclin1；免疫組化

[中圖分類號] R737.31 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] B [文章編號] 1673-9701（2013）31-0020-03

卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)三大惡性腫瘤之一，死亡率居婦科惡性腫瘤之首。腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移是腫瘤細(xì)胞與宿主間質(zhì)及宿主細(xì)胞間復(fù)雜、多步驟相互作用的過程， 涉及多種基因及其產(chǎn)物。Livin基因能夠抑制細(xì)胞凋亡，與多種腫瘤的惡性程度和預(yù)后密切相關(guān)。Beclin1基因是參與自噬調(diào)控的重要基因，可以通過提高細(xì)胞自噬活性抑制腫瘤的生長，在人類的許多腫瘤中均存在Beclin1表達(dá)的下調(diào)或缺失。本研究采用免疫組化方法檢測卵巢癌組織中Livin及Beclin1基因蛋白的表達(dá)情況，探討他們和卵巢癌侵襲及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為之間關(guān)系并闡釋可能的機(jī)制，為有針對性地靶向治療提供理論依據(jù)?，F(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選自2000～2010年于我院及吉林大學(xué)附屬醫(yī)院行手術(shù)切除且通過病理證實(shí)[3]后有上皮性腫瘤組織以及正常的卵巢組織所制標(biāo)本蠟塊共計65例。年齡26～72歲，平均年齡 46.3歲，中位年齡49歲。所有病例均為原發(fā)性卵巢上皮性腫瘤，術(shù)前未做過任何化療和放療，術(shù)后經(jīng)病檢確診。其中良性卵巢腫瘤15例（卵巢漿液性囊腺瘤7例，黏液性囊腺瘤8例，以下簡稱為良性腫瘤），交界性卵巢腫瘤15例（以下簡稱為交界腫瘤），卵巢癌35例（卵巢漿液性囊腺癌16例，黏液性囊腺癌14例，子宮內(nèi)膜樣癌5例）。卵巢癌臨床分期按國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIGO，1985）分期： Ⅰ期7例，Ⅱ期11 例， Ⅲ期13 例， Ⅳ期4 例；按WHO 分化標(biāo)準(zhǔn)：高分化8例，中分化15例，低分化12例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移13例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移22例。15例正常卵巢組織來自卵巢活檢病例和因子宮肌瘤、功能性子宮出血或子宮脫垂行全子宮切除同時行卵巢切除病例，病理證實(shí)卵巢組織無異常。

1.2 研究方法

全部病患于術(shù)前均無放療和化療以及免疫治療。標(biāo)本由10%的福爾馬林溶液進(jìn)行固定，在48 h內(nèi)以石蠟包埋，行4 μm連續(xù)性切片，而后實(shí)施染色。

1.3 以免疫組化法對Livin以及Beclin1進(jìn)行蛋白表達(dá)的檢測

兩者蛋白檢測均選擇免疫組化鏈霉卵白素-生物素-辣根過氧化物酶復(fù)合物法（SP法）[4]于病理科進(jìn)行。有關(guān)流程參考SP9000試劑盒以及DAB顯色試劑盒有關(guān)說明書進(jìn)行。用PBS緩沖液替換一抗作為陰性對照，以已知各種抗體陽性型對照片為陽性對照。結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)為：Livin和Beclin1陽性信號可呈現(xiàn)棕黃色的細(xì)胞顆粒狀，并主要定位于細(xì)胞漿中。每例標(biāo)本應(yīng)隨機(jī)選擇10個高倍鏡型視野，共計數(shù)1000個細(xì)胞。依照著色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞的百分率結(jié)果實(shí)施半定量分析。先為陽性細(xì)胞有關(guān)著色強(qiáng)度計為0分（即無色）；1分（即淡黃色）；2分（即棕黃色）；3分（即深棕色）。之后為陽性細(xì)胞百分率實(shí)施評分，1分（即百分率≤10%）；2分（即11%≤百分率≤50%）；3分（即51%≤百分率≤75%）；4分（即百分率>75%）。以染色細(xì)胞數(shù)的分?jǐn)?shù)乘以染色強(qiáng)度得分?jǐn)?shù)計為每份切片的記分?jǐn)?shù)。所得結(jié)果中0及1分視為陰性結(jié)果；弱陽性（+）是2～3分；中度陽性（++）是4～5分；強(qiáng)陽性（+++）是>5分。確保每張切片經(jīng)2位資深病理工作人員閱片。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS13.0統(tǒng)計學(xué)軟件分析。數(shù)據(jù)比較以χ2檢驗。多組間等級資料以Kruskal-wallis檢驗；兩組間以Mann-Whitney U檢驗和Spearman法進(jìn)行等級相關(guān)分析[5]。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Livin和Beclin1在卵巢組織中表達(dá)情況

在四組中，正常卵巢組織、良性腫瘤、交界腫瘤、卵巢癌組織中Livin表達(dá)的陽性率分別為6.7%、33.3%、40.0%、68.6%；Beclin1表達(dá)的陽性率分別為93.3%、86.7%、80.0%、37.1%，Livin在卵巢癌組織的表達(dá)與正常卵巢組織及良性腫瘤、交界腫瘤比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=16.10，5.35， 3.57，均P<0.05）；在良性腫瘤與交界腫瘤的表達(dá)對比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=0.14，P>0.05）。Beclin1在正常卵巢組織與良性腫瘤的表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=0.37，P>0.05）。Beclin1的表達(dá)在交界腫瘤及卵巢癌組織中均開始下降，在上皮性卵巢癌中的表達(dá)明顯低于其他良性卵巢組織（χ2=13.35， 10.32，均P<0.01）。提示自噬活性的下降在卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展中可能起著重要的作用。見表1。

2.2 Livin Beclin1在卵巢癌組織中的表達(dá)與組織分化及臨床分期關(guān)系對比

Beclin1 在卵巢癌組織中的表達(dá)與組織分化有關(guān)（r=0.375，P<0.05），與腫瘤分期無關(guān)（P>0.05）。Livin則與組織分化和臨床分期均有關(guān)（r=0.358，0.369，均P<0.05）。見表2。

2.3 Livin和Beclin1蛋白于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)性

在13例腫瘤轉(zhuǎn)移病患中，Livin陽性為10例，轉(zhuǎn)移率為28.57%（10/35）；Beclin1陽性為3例，轉(zhuǎn)移率為8.57%（3/35）。而22例未轉(zhuǎn)移病患中，Livin陽性率為51.43%，Beclin1陽性率為11.43%。表明Livin與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（r=0.365，P<0.05），而Beclin1與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)（r=0.019，P>0.05）。見表3。

表3 Livin和Beclin1蛋白于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)性[n（%）]

注：Livin與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P<0.05）

3 討論

卵巢癌是目前最為常見的婦科癌癥之一，5年生存率僅25%左右，特別是卵巢上皮性癌，因臨床發(fā)病比較隱匿，缺乏特異性早期發(fā)病指征，所以是卵巢惡性腫瘤中死亡率最高的一類腫瘤。

臨床研究表明，Beclin1主要可對自噬體形成和成熟進(jìn)行調(diào)控，并能誘導(dǎo)自噬，從而促使腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生凋亡，并對其增殖功能進(jìn)行抑制[6]。Beclin1作為一種腫瘤抑制性基因，往往因其缺失從而導(dǎo)致細(xì)胞相應(yīng)自噬能力降低，最終引發(fā)腫瘤。其已被臨床確定為是一種新型候選性抑癌基因，怎樣促使其更多地表達(dá)在今后可能會成為醫(yī)治腫瘤的一種有效手段。此外，Livin也被研究證實(shí)和多類惡性腫瘤在發(fā)展和轉(zhuǎn)移以及預(yù)后等方面有著一定關(guān)聯(lián)[7]?？捎行Х从硱盒阅[瘤侵襲力和預(yù)后情況。Livin蛋白通常主要在細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)，亦會表達(dá)于細(xì)胞核，而在成人正常組織中則往往低表達(dá)，亦或是不表達(dá)，于癌癥病患組織或細(xì)胞株中可進(jìn)行高表達(dá)。

本文通過研究發(fā)現(xiàn)，在四組中，Livin表達(dá)的陽性率分別為6.7%、33.3%、40.0%、68.6%；Beclin1表達(dá)的陽性率分別為93.3%、86.7%、80.0%、37.1%，對四組病例實(shí)施比較，差異均顯著。同時，正常的卵巢組織有關(guān)Livin以及Beclin1蛋白的表達(dá)與交界腫瘤以及惡性腫瘤相比，差異均顯著。而與良性腫瘤比較，差異不顯著。表明兩者在上皮型卵巢癌發(fā)生癌變的過程之中呈現(xiàn)出動態(tài)變化?？赏茰y對兩者進(jìn)行聯(lián)合檢測可利于診斷癌前病變發(fā)展趨勢，亦可當(dāng)做此類癌癥檢測指標(biāo)。研究還發(fā)現(xiàn)，Livin和腫瘤組織學(xué)分級有一定聯(lián)系，若腫瘤分化程度越低，則Livin表達(dá)的越高，符合楊俠等[8，9]報道的結(jié)果。此外，Livin在卵巢癌組織中的表達(dá)與組織分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期有關(guān)；Beclin1 在卵巢癌組織中的表達(dá)與分化程度有關(guān)，與腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)，與胡安群等[10]報道一致。兩者在卵巢癌發(fā)生和發(fā)展過程里發(fā)揮一定作用，對兩者實(shí)施檢測分析，可針對性反映出癌變細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的情況。同時還表明Livin在卵巢癌發(fā)生和演化及浸潤轉(zhuǎn)移中起著重要的作用。相信以Livin為靶點(diǎn)的抑制物及反義Livin具有廣譜和低毒副作用，使腫瘤細(xì)胞增敏而發(fā)生凋亡，也可以通過RNA干涉技術(shù)對Livin進(jìn)行基因封閉，應(yīng)用到卵巢癌可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡，使Livin可能成為卵巢癌治療上有前途的分子靶點(diǎn)，具有重要意義。

綜上所述，Livin在卵巢癌發(fā)生和演化及浸潤轉(zhuǎn)移中起著重要的作用。而卵巢癌組織及正常卵巢組織中Beclin1蛋白表達(dá)的陽性率差異則顯示自噬活性的下降在卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展中可能起著重要的作用。

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（收稿日期：2013-08-14）