• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    IL-17等炎性因子在風(fēng)濕免疫相關(guān)性血細(xì)胞減少骨髓細(xì)胞中的分泌狀態(tài)及其臨床意義①

    2013-11-27 11:15:34孫黎飛孫志宏吳強(qiáng)強(qiáng)張曉席杜延會(huì)王桂臣
    中國(guó)免疫學(xué)雜志 2013年1期
    關(guān)鍵詞:抗人血細(xì)胞皮質(zhì)激素

    孫黎飛 孫志宏 吳強(qiáng)強(qiáng) 張曉席 杜延會(huì) 王桂臣

    (解放軍第148醫(yī)院腫瘤中心,淄博255300)

    隨著對(duì)風(fēng)濕免疫性疾病的認(rèn)識(shí)和研究不斷提高,風(fēng)濕免疫相關(guān)性血細(xì)胞減少(Rheumatism immune-related hematocytopenia,RIRH)的發(fā)病率也逐年增高。我們以往的研究發(fā)現(xiàn),部分RIRH患者伴有血清HLA-B27升高,且端粒酶活性增強(qiáng),較之血清HLAB27陰性者造血細(xì)胞損傷更加嚴(yán)重[1,2],在血清 IgG升高的患者骨髓中伴有不同造血細(xì)胞島出現(xiàn)[3]。本文進(jìn)一步觀察了該類患者血清中炎性因子的含量和骨髓中免疫細(xì)胞表達(dá)炎性因子的狀態(tài),探討其與RIRH骨髓造血細(xì)胞損傷的關(guān)聯(lián)和臨床診療的意義。

    1 資料與方法

    1.1 臨床資料 66例RIRH為2009年~2012年我院診治患者,男性20例,女性46例,年齡范圍36~72歲;全血細(xì)胞減少32例,兩系減少34例。外周血WBC(0.7~3.2)×109L-1,HB(35~102)g/L,PLT(30~238)×109L-1;其中伴有干燥綜合征者19例,類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎30例,風(fēng)濕性心臟病17例。27例WBC<2.0×109L-1,伴肺部或尿路感染者血清IgG和血沉(ESR)顯著增高。21例間斷服用糖皮質(zhì)激素,28例伴血清HLA-B27增高(影像學(xué)排除強(qiáng)直性脊柱炎)。血清對(duì)照組30人選自我院查體中心健康標(biāo)本,年齡20~50歲,男性15人,女性15人。

    1.2 主要試劑和器材 血清 IL-5、IL-10、IL-12、IL-17和IFN-γ酶免(ELISA)檢測(cè)試劑盒購(gòu)自美國(guó)RD公司,羊抗人HLA-DR單克隆抗體購(gòu)自美國(guó)Beyotime公司,羊抗人IgG抗體、驢抗羊IgG熒光二抗(Cy3)、小鼠抗人FcγⅡR、羊抗小鼠IgG熒光二抗(FITC)、小鼠抗人甘露糖受體(Mannose receper,MR,PE)、ICAM-1(PE)、IL-12(AF488)、IL-17A(FITC)和IL-17RA(PE)單克隆免疫熒光(Immunofluorescence,IF)抗體均購(gòu)自美國(guó)SANTA公司。

    1.3 檢測(cè)血清細(xì)胞因子含量 留取患者空腹靜脈血清,-80℃保存,1周內(nèi)ELISA方法檢測(cè)其治療前后血清 IL-5、IL-10、IL-12、IL-17 和 IFN-γ 含量,每孔標(biāo)本設(shè)3孔,波長(zhǎng)450nm讀取3孔OD均值,標(biāo)準(zhǔn)曲線換算樣品濃度。

    1.4 分析骨髓免疫細(xì)胞活化狀態(tài)和免疫分子表達(dá)留取患者治療前和治療4周后骨髓涂片,聯(lián)苯胺法過(guò)氧化物酶(Peroxydase,POX)染色,觀察免疫細(xì)胞POX活性;免疫化學(xué)(IC)法檢測(cè)免疫細(xì)胞HLADR抗原表達(dá),IF法檢測(cè)骨髓細(xì)胞抗人IgG抗體、FcγⅡR、MR、ICAM-1、IL-12、IL-17A 和 IL-17RA 等免疫分子表達(dá),缺鐵性貧血骨髓片為疾病對(duì)照。

    1.5 藥物治療原則

    1.5.1 免疫抑制劑和對(duì)癥支持 ①根據(jù)患者病情予以糖皮質(zhì)激素治療,誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞凋亡,抑制免疫細(xì)胞活化;至血象恢復(fù)后,逐漸遞減;血清HLA-B27和血清IgG升高者,及時(shí)聯(lián)合環(huán)孢素A(CsA)口服,抑制T輔助細(xì)胞活化。②伴有感染灶,發(fā)熱、WBC顯著下降者,根據(jù)藥敏選擇抗生素和(或)聯(lián)合抗病毒藥物治療。③原發(fā)病和對(duì)癥支持治療。

    1.5.2 復(fù)方丹參干預(yù)改善骨髓血管炎性病變 32例血小板計(jì)數(shù)>50×109L-1,無(wú)出血傾向者在上述治療方案同時(shí)聯(lián)合復(fù)方丹參(四川和升制藥)30 ml/qd靜滴,促進(jìn)患者體內(nèi)和骨髓造血微環(huán)境炎性因子的清除,隨機(jī)抽取未加復(fù)方丹參治療組30例RIRH作為治療對(duì)照組,兩組年齡范圍、性別比例和病情基本相似。每周復(fù)查兩組患者血清IL-5和IL-17含量及外周血象,4周后隨訪兩組骨髓象變化。

    1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,組間比較采用t檢驗(yàn),率的比較采用χ2檢驗(yàn),P<0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 RIRH患者血清中多種炎性因子升高 患者入院時(shí)血清 IL-5、IL-10、IL-12、IL-17 和 IFN-γ 分別為(126.04±7.66)ng/L、(316.23±25.163)ng/L、(328.43±27.01)ng/L、(48.17±4.22)ng/L和(40.28±3.69)ng/L,較之對(duì)照組顯著升高,P值均<0.05。經(jīng)藥物治療4周至血象恢復(fù)時(shí),上述細(xì)胞因子分別下降至(58.21±5.14)ng/L、(188.13±12.51)ng/L、(96.01±6.76)ng/L、(26.01±4.23)ng/L和(9.13±2.55)ng/L,接近對(duì)照組(詳見(jiàn)表1),P>0.05。66例患者中IL-5和IL-17升高率為100%(66/66),IL-12 升高率為 97.0%(64/66),而IL-10和 IFN-γ升高率分別為66.67%(44/66)和69.69%(46/66),較前者差異顯著,P<0.05。

    2.2 RIRH患者骨髓免疫細(xì)胞活化特點(diǎn)

    2.2.1 組織嗜堿細(xì)胞(肥大細(xì)胞,Mast cell,MC)增多與IL-10升高密切相關(guān) 患者骨髓中MC數(shù)量增多,分類約為(3.2±0.08)%,顯著高于疾病對(duì)照組(0.6±0.05)%,P<0.05;活化的MC通過(guò)粘附、捕獲和釋放嗜堿性顆粒攻擊病變血細(xì)胞(圖1 A~D),且與血清IL-10升高水平密切相關(guān)r=0.885。

    2.2.2 嗜酸性粒細(xì)胞(Eosinophile granulocyte,EOS)增生活躍 患者骨髓中EOS分類約為(7.4±3.1)%,高于對(duì)照組(2.4±1.6)%,P<0.05?;罨腅OS特異性顆粒POX活性增強(qiáng),粘附、捕獲和吞噬著病變的中性粒細(xì)胞(圖1E)、血小板(圖1F箭頭)和紅細(xì)胞(圖1G箭頭),被攻擊的病變中性粒細(xì)胞POX活性顯著減弱(圖1H箭頭)。

    2.2.3 巨噬細(xì)胞(Mφ)形態(tài)奇異 部分患者由于間斷應(yīng)用糖皮質(zhì)激素,其骨髓中POX陽(yáng)性形態(tài)怪異的Mφ(圖2A~C)多見(jiàn),伴有感染者骨髓中可見(jiàn)到巨大活化狀態(tài)的Mφ募集各種炎性細(xì)胞現(xiàn)象(圖2D)。

    2.2.4 伴有感染者免疫細(xì)胞高表達(dá)HLA-DR 活化狀態(tài)的 DC(圖2E)、Mφ(圖2F)和 MC(圖 2G)HLA-DR呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)。伴感染者骨髓造血細(xì)胞島中高表達(dá)HLA-DR的巨大Mφ捕獲病變血細(xì)胞現(xiàn)象多見(jiàn)(圖2H)。間斷應(yīng)用糖皮質(zhì)激素治療者,骨髓中約1/2的DC、Mφ不表達(dá)HLA-DR。

    2.2.5 RIRH患者骨髓中免疫細(xì)胞捕獲表達(dá)抗人IgG病變血細(xì)胞現(xiàn)象多見(jiàn) 部分病變的血細(xì)胞膜抗人IgG IF呈帶狀陽(yáng)性,EOS(圖2A)和MC(圖2B)特異性顆粒結(jié)合大量抗人IgG IF,活化的DC(圖2C)和Mφ粘附捕獲病變血細(xì)胞現(xiàn)象多見(jiàn);血清IgG顯著升高者骨髓中,造血細(xì)胞島中Mφ與病變血細(xì)胞連接處大量抗人IgG IF沉積(圖2D),對(duì)照組骨髓造血細(xì)胞膜抗人IgG IF陰性。

    2.2.6 RIRH患者骨髓中活化的免疫細(xì)胞高表達(dá)FcγⅡR 缺鐵性貧血和間斷應(yīng)用糖皮質(zhì)激素患者骨髓中Mφ低表達(dá)FcγⅡR(圖3F),伴有感染血清IgG升高的RIRH患者骨髓中,活化的Mφ表達(dá)FcγⅡR的數(shù)量顯著增多(圖3G),與病變的造血細(xì)胞結(jié)合形成巨大的Mφ型造血細(xì)胞島多見(jiàn)(圖3H),提示感染加重造血損傷?;罨腄C不表達(dá)FcγⅡR,而EOS則強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)(圖3E)。

    2.2.7 RIRH患者骨髓中活化的免疫細(xì)胞高表達(dá)MR 缺鐵性貧血和間斷應(yīng)用糖皮質(zhì)激素患者骨髓中DC和Mφ呈顆粒狀弱表達(dá)MR(圖3J),伴有感染的RIRH患者骨髓中DC(圖3I)、EOS(未顯示)和Mφ(圖3K)表達(dá) MR的數(shù)量顯著增多,在 IgG和ESR升高的全血細(xì)胞減少RIRH患者骨髓中,由高表達(dá)MR的Mφ與病變血細(xì)胞組成的造血細(xì)胞島多見(jiàn)(圖3L),提示造血損傷加重。

    表1 細(xì)胞因子檢測(cè)結(jié)果(ng/L)Tab.1 Serumal level of cytokines(ng/L)

    圖1 RIRH患者骨髓中活化的組織嗜堿細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞(×1 000)Fig.1 Activated tissue basophil and eosinophil in bonemarrow of RIRH patients( ×1 000)

    圖2 RIRH患者骨髓中奇異的Mφ和免疫細(xì)胞HLA-DR表達(dá)情況(×1 000)Fig.2 Weird expression of HLA-DR on Mφ and other immunocyte in marrow of RIRH patients( ×1 000)

    圖3 RIRH患者骨髓中免疫細(xì)胞表達(dá)IgG、FcγⅡR和MR(×1 000)Fig.3 IgG,F(xiàn)cγⅡR and MR were observed to be expressed by immunocyte in marrow of RIRH patients( ×1 000)

    2.2.8 感染促進(jìn)粘附分子ICAM-1表達(dá) 伴有感染的RIRH患者骨髓中活化的DC(圖4A)、EOS(圖4B)和Mφ(圖4C)高表達(dá)粘附分子ICAM-1,缺鐵性貧血與間斷應(yīng)用糖皮質(zhì)激素的RIRH患者,上述免疫細(xì)胞呈顆粒狀弱表達(dá)ICAM-1(圖4D),提示感染可上調(diào)粘附分子表達(dá),促進(jìn)免疫細(xì)胞參與對(duì)造血細(xì)胞的炎性反應(yīng)過(guò)程。

    2.2.9 RIRH患者骨髓免疫細(xì)胞高表達(dá)IL-12和IL-17A及其受體 骨髓中DC(圖4E)、EOS(圖4F)和Mφ(圖4G)胞漿中呈分泌狀表達(dá)IL-12,缺鐵性貧血患者骨髓中DC和EOS不/弱表達(dá),Mφ呈灶性弱表達(dá)(圖4H)。缺鐵性貧血和血清IgG升高骨髓呈體液免疫活化優(yōu)勢(shì)狀態(tài)的RIRH患者骨髓中,DC不表達(dá)IL-17A,而在血清HLA-B27升高的RIRH患者骨髓中,活化的DC(圖4I)、EOS(圖4J)和Mφ(圖4K)均高表達(dá)IL-17A,缺鐵性貧血患者骨髓中僅少量造血細(xì)胞表達(dá)IL-17RA,伴有感染的RIRH患者骨髓細(xì)胞中廣泛表達(dá)IL-17RA(圖4L),提示感染使IL-17A與IL-17RA結(jié)合的細(xì)胞數(shù)量增多,能放大由其介導(dǎo)的炎性反應(yīng)。

    2.3 藥物治療效果

    2.3.1 經(jīng)糖皮質(zhì)激素聯(lián)合抗感染等藥物治療1周后,患者血清IgG和ESR逐漸下降,血象逐漸恢復(fù)直至正常。伴有HLA-B27升高全血細(xì)胞減少的RIRH患者血象恢復(fù)遲緩,經(jīng)聯(lián)合CsA治療4周后,患者血象開(kāi)始恢復(fù);復(fù)查骨髓可見(jiàn)EOS的POX活性減弱,Mφ核凋亡現(xiàn)象多見(jiàn),2/3的 DC和 Mφ HLA-DR轉(zhuǎn)陰。

    圖4 免疫細(xì)胞表達(dá)ICAM-1、IL-12、IL-17A和IL-17RA(×1 000)Fig.4 ICAM-1,IL-12,IL-17A and IL-17RA were expressed by immunocyte in marrow of RIRH patients(×1 000)

    圖5 聯(lián)合復(fù)方丹參治療對(duì)患者血清炎性因子清除的動(dòng)態(tài)觀察Fig.5 The analysis of compound Salvia miltiorrhiza to remove serumal inflammatory factors

    2.3.2 復(fù)方丹參聯(lián)合免疫抑制劑治療能促進(jìn)患者血清炎性因子清除 32例RIRH聯(lián)合復(fù)方丹參治療2周以后,血清IL-5和IL-17含量較之未聯(lián)合復(fù)方丹參組顯著降低(圖5),血象恢復(fù)時(shí)間較之未聯(lián)合復(fù)方丹參組提前1周,骨髓中表達(dá)IL-17A和IL-17RA的免疫細(xì)胞及造血細(xì)胞比例,較之對(duì)照組顯著減少。兩組間差異顯著,P<0.05。

    3 討論

    風(fēng)濕免疫系統(tǒng)疾病是各種致病因素誘發(fā)機(jī)體免疫系統(tǒng)對(duì)自身成分發(fā)生免疫應(yīng)答而導(dǎo)致的自身免疫性疾病狀態(tài)。患者體內(nèi)存在針對(duì)自身成分產(chǎn)生的自身抗體和/或自身反應(yīng)性T淋巴細(xì)胞,能介導(dǎo)對(duì)自身細(xì)胞或組織成分獲得性免疫應(yīng)答。由于疾病慢性遷延和反復(fù)發(fā)作,以及自身抗體的分子模擬和抗原表位擴(kuò)展,最終累及造血系統(tǒng),致使患者體內(nèi)部分血細(xì)胞膜抗原結(jié)構(gòu)改變,引發(fā)了針對(duì)病變血細(xì)胞(靶細(xì)胞)的風(fēng)濕免疫相關(guān)性血細(xì)胞減少(RIRH)超敏反應(yīng)病理過(guò)程和疾病狀態(tài),感染免疫活化能加重對(duì)造血細(xì)胞的免疫損傷作用[4]。

    我們的研究發(fā)現(xiàn),該類患者除伴有自身免疫性疾病外,臨床主要表現(xiàn)為外周血兩系或三系(全血細(xì)胞)減少,骨髓增生活躍,組織嗜堿細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等多種免疫細(xì)胞活化。部分患者由于間斷服用糖皮質(zhì)激素,骨髓中漿細(xì)胞和巨噬細(xì)胞形態(tài)異常,功能受抑。而伴WBC減少的患者骨髓中,活化的嗜酸性粒細(xì)胞攻擊POX活性減弱或消失的病變中性粒細(xì)胞現(xiàn)象增多,是RIRH患者重要的骨髓特征,同時(shí)也提示嗜酸性粒細(xì)胞在RIRH造血細(xì)胞損傷病理過(guò)程中,起到至關(guān)重要的作用。

    我們的研究結(jié)果顯示,RIRH患者由于長(zhǎng)期處于免疫紊亂狀態(tài),其血清中 IL-5、IL-10、IL-12、IL-17和IFN-γ等多種與自身免疫相關(guān)聯(lián)的炎性因子升高,其中促進(jìn)嗜酸性粒細(xì)胞增殖的IL-5和作為炎性介質(zhì)的IL-17的升高率為100%,而活化細(xì)胞免疫的炎性因子IL-12升高率為97.0%,表明這些介導(dǎo)自身免疫性炎性因子與RIRH造血細(xì)胞炎性損傷的病理過(guò)程密切關(guān)聯(lián)[5,6]。

    我們的研究結(jié)果還顯示,由于患者體內(nèi)存在針對(duì)自身病變?cè)煅?xì)胞膜的IgG抗體,其骨髓中部分病變血細(xì)胞膜抗人IgG IF陽(yáng)性表達(dá),誘導(dǎo)自身抗體產(chǎn)生,由于原發(fā)病導(dǎo)致患者體內(nèi)免疫紊亂狀態(tài),多種免疫細(xì)胞活化,以不同方式攻擊病變血細(xì)胞,是RIRH骨髓造血細(xì)胞病理性損傷重要的特征。部分患者由于WBC減少和間斷應(yīng)用糖皮質(zhì)激素,極易并發(fā)感染加重病情?;颊吖撬柚芯奘杉?xì)胞可上調(diào)表達(dá)FcγⅡR和 MR,介導(dǎo) ADCC效應(yīng);上調(diào) ICAM-1表達(dá),促進(jìn)免疫細(xì)胞對(duì)病變血細(xì)胞的粘附、捕獲和吞噬,是患者造血細(xì)胞破壞的重要方式[7-9]。

    我們的研究發(fā)現(xiàn),RIRH患者骨髓中,活化的免疫細(xì)胞高表達(dá)IL-12和IL-17A,提示其可能具有分泌這些炎性介質(zhì)的功能;能通過(guò)介導(dǎo)骨髓造血微環(huán)境的血管炎性病變,影響造血細(xì)胞的生長(zhǎng)發(fā)育,損傷和破壞病變?cè)煅?xì)胞,亦為該類患者骨髓造血細(xì)胞破壞的另一重要因素。

    藥物治療結(jié)果及IL-5和IL-17追蹤分析指標(biāo)表明,在抗感染、應(yīng)用糖皮質(zhì)激素和CsA等藥物,抑制免疫細(xì)胞對(duì)造血細(xì)胞破壞作用同時(shí),對(duì)血小板>50×109L-1無(wú)出血傾向患者,謹(jǐn)慎聯(lián)合復(fù)方丹參等活血化瘀藥物治療,有利于炎性因子的代謝和清除,改善骨髓造血微環(huán)境,促進(jìn)疾病恢復(fù)。

    1 孫黎飛,韓 冰,吳強(qiáng)強(qiáng) et al.人類白細(xì)胞抗原B27在免疫相關(guān)性血細(xì)胞減少患者診療中的意義[J].中華內(nèi)科雜志,2012;51(7):557-559.

    2 孫黎飛,韓 冰,吳強(qiáng)強(qiáng)et al.免疫相關(guān)性血細(xì)胞減少患者骨髓造血細(xì)胞端粒酶活性檢測(cè)的臨床意義[J].中華醫(yī)學(xué)雜志,2012;92(36):2530-2533.

    3 孫黎飛,韓 冰,李 鋼et al.骨髓造血細(xì)胞島在免疫相關(guān)性血細(xì)胞減少患者中的異質(zhì)性研究[J].中國(guó)免疫學(xué)雜志,2012;28(5):300-304.

    4 何 維主編.醫(yī)學(xué)免疫學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2006:318-321.

    5 Deng I,Younge B R,Olshen R A et al.Th17 and Th1 T-cell responses in gaint cell arterritis[J].Circulation,2010;121:906-915.

    6 Ekinici N S.IL-17A has an important role in the acute attacks of Behcet`s disease[J].Rheumatology,2011;50:293-298.

    7 Crespo H,Jauregui P,Glaria I et al.Mannose receptor may be involved in small ruminant lentivirus pathogenesis[J].Vet Res,2012;43(1):43.

    8 Giraldi-Guimares A,de Freitas H T,Coelho Bde P et al.Bone marrow mononuclear cells and mannose receptor expression in focal cortical ischemia[J].Brain Res,2012;1452:173-184.

    9 Liu Z,Ma Y,Moyer M P et al.Involvement of the mannose receptor and p38 mitogen-activated protein kinase signaling pathway of the microdomain of the integral membrane protein after enteropathogenic Escherichia coli infection [J].Infect Immun,2012;80(4):1343-1350.

    猜你喜歡
    抗人血細(xì)胞皮質(zhì)激素
    抗人球蛋白檢測(cè)卡行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的研究
    促腎上腺皮質(zhì)激素治療腎病綜合征的研究進(jìn)展
    糖皮質(zhì)激素聯(lián)合特布他林治療慢阻肺急性加重期的臨床效果觀察
    施氏魮(Barbonymus schwanenfeldii)外周血液及造血器官血細(xì)胞發(fā)生的觀察
    血細(xì)胞分析中危急值的應(yīng)用評(píng)價(jià)
    沙塘鱧的血細(xì)胞分析
    獨(dú)角蓮軟膠囊抗人肝癌Hep-2荷瘤裸鼠移植瘤作用及對(duì)p53表達(dá)的影響
    全血細(xì)胞分析儀配套操作臺(tái)使用體會(huì)
    生發(fā)Ⅰ號(hào)聯(lián)合局部注射糖皮質(zhì)激素治療斑禿患者禿眉的臨床觀察
    直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽(yáng)性患者交叉配血方法探討
    国产伦一二天堂av在线观看| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 欧美日本亚洲视频在线播放| 久久久久久久午夜电影 | 国产亚洲精品一区二区www| 日韩中文字幕欧美一区二区| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 手机成人av网站| 嫩草影视91久久| 亚洲第一青青草原| 大香蕉久久成人网| 国产成人av激情在线播放| 又紧又爽又黄一区二区| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 90打野战视频偷拍视频| 亚洲七黄色美女视频| 国产av精品麻豆| av网站免费在线观看视频| 亚洲欧美激情在线| 久久精品91蜜桃| 男人舔女人下体高潮全视频| 久久久久久久精品吃奶| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 91在线观看av| 久久国产乱子伦精品免费另类| 久久久国产精品麻豆| 久久香蕉激情| 午夜成年电影在线免费观看| 日日爽夜夜爽网站| 午夜视频精品福利| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 亚洲人成77777在线视频| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 久久精品亚洲av国产电影网| 性少妇av在线| 一本大道久久a久久精品| 久久欧美精品欧美久久欧美| 国产有黄有色有爽视频| 国产麻豆69| 亚洲精品av麻豆狂野| 动漫黄色视频在线观看| 十八禁网站免费在线| 一边摸一边抽搐一进一小说| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 手机成人av网站| 日本欧美视频一区| 亚洲av熟女| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 黑人操中国人逼视频| 国产高清视频在线播放一区| 在线天堂中文资源库| 久久九九热精品免费| 亚洲精品国产色婷婷电影| av电影中文网址| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 久久精品人人爽人人爽视色| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 91精品国产国语对白视频| 麻豆久久精品国产亚洲av | 亚洲av成人一区二区三| 新久久久久国产一级毛片| 午夜福利免费观看在线| 欧美黄色淫秽网站| 又黄又爽又免费观看的视频| 久久国产乱子伦精品免费另类| 99国产综合亚洲精品| 精品久久久久久电影网| 超碰成人久久| 国产高清激情床上av| 精品福利永久在线观看| 搡老乐熟女国产| 高清毛片免费观看视频网站 | 大型黄色视频在线免费观看| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 老司机福利观看| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 一a级毛片在线观看| 高清黄色对白视频在线免费看| 欧美一级毛片孕妇| 麻豆成人av在线观看| 亚洲一区二区三区色噜噜 | 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 在线国产一区二区在线| 亚洲专区国产一区二区| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| av视频免费观看在线观看| 国产男靠女视频免费网站| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 88av欧美| 在线看a的网站| 久99久视频精品免费| 国产亚洲欧美98| 久久国产精品人妻蜜桃| 美女国产高潮福利片在线看| 91字幕亚洲| 亚洲激情在线av| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 99香蕉大伊视频| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 精品国内亚洲2022精品成人| 国产伦一二天堂av在线观看| 亚洲精品成人av观看孕妇| 日韩免费av在线播放| 涩涩av久久男人的天堂| 他把我摸到了高潮在线观看| 女性生殖器流出的白浆| 一夜夜www| 波多野结衣一区麻豆| 亚洲免费av在线视频| 国产av一区在线观看免费| 国产精品野战在线观看 | 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| a级毛片在线看网站| 99热国产这里只有精品6| 搡老乐熟女国产| 亚洲精品在线美女| 亚洲性夜色夜夜综合| 国产区一区二久久| 一级a爱视频在线免费观看| 午夜福利一区二区在线看| 一边摸一边抽搐一进一小说| 中文字幕高清在线视频| 99re在线观看精品视频| 欧美日韩视频精品一区| 黑人操中国人逼视频| 国产亚洲精品第一综合不卡| 精品国产乱码久久久久久男人| 少妇的丰满在线观看| www日本在线高清视频| 婷婷六月久久综合丁香| 免费看十八禁软件| 一级毛片精品| 男女下面进入的视频免费午夜 | 午夜福利欧美成人| 欧美成狂野欧美在线观看| 日日爽夜夜爽网站| 午夜福利欧美成人| 两性夫妻黄色片| 免费在线观看日本一区| 久久国产乱子伦精品免费另类| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 在线观看免费日韩欧美大片| 99国产精品99久久久久| 亚洲欧美日韩无卡精品| 久久性视频一级片| 国产精品 欧美亚洲| 一区二区三区激情视频| 黄色视频,在线免费观看| 久久久久国产一级毛片高清牌| 九色亚洲精品在线播放| 国产三级黄色录像| 精品久久久久久成人av| 久久婷婷成人综合色麻豆| 久久久国产精品麻豆| 成人国语在线视频| 天堂俺去俺来也www色官网| 99在线人妻在线中文字幕| 国产麻豆69| 日韩精品中文字幕看吧| 成年人免费黄色播放视频| 精品无人区乱码1区二区| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 午夜福利,免费看| 国产成人av教育| 免费日韩欧美在线观看| 另类亚洲欧美激情| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 亚洲激情在线av| 亚洲人成电影免费在线| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 久久久久久久午夜电影 | av视频免费观看在线观看| 国产精品成人在线| 超碰成人久久| 国产一区二区激情短视频| 狂野欧美激情性xxxx| 女同久久另类99精品国产91| 亚洲性夜色夜夜综合| 欧美中文综合在线视频| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 国产成年人精品一区二区 | 日韩成人在线观看一区二区三区| 在线观看免费日韩欧美大片| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 日本精品一区二区三区蜜桃| 99久久国产精品久久久| 国产精品99久久99久久久不卡| 国产成年人精品一区二区 | 国产高清激情床上av| 国产熟女午夜一区二区三区| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 午夜福利一区二区在线看| 操出白浆在线播放| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 久99久视频精品免费| 国产精品乱码一区二三区的特点 | 一区二区三区精品91| 黄色怎么调成土黄色| 精品人妻1区二区| 免费搜索国产男女视频| netflix在线观看网站| av欧美777| 国产欧美日韩一区二区精品| 老司机在亚洲福利影院| 亚洲av成人av| 高清在线国产一区| 国产成人系列免费观看| bbb黄色大片| a级毛片黄视频| 日本精品一区二区三区蜜桃| 人妻久久中文字幕网| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 99在线人妻在线中文字幕| 精品午夜福利视频在线观看一区| 日本免费一区二区三区高清不卡 | 狂野欧美激情性xxxx| 在线观看www视频免费| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 精品一品国产午夜福利视频| 性少妇av在线| 12—13女人毛片做爰片一| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 淫妇啪啪啪对白视频| 动漫黄色视频在线观看| 久久亚洲精品不卡| 亚洲国产欧美一区二区综合| av天堂久久9| 亚洲精品中文字幕在线视频| 一级,二级,三级黄色视频| 看片在线看免费视频| av在线播放免费不卡| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 国产精品乱码一区二三区的特点 | 高清毛片免费观看视频网站 | 国产午夜精品久久久久久| 亚洲男人的天堂狠狠| 91字幕亚洲| 中亚洲国语对白在线视频| 中文字幕高清在线视频| 一二三四社区在线视频社区8| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 一区二区三区激情视频| 亚洲五月天丁香| 中文字幕高清在线视频| 亚洲av成人av| 久久午夜综合久久蜜桃| 免费看a级黄色片| 桃红色精品国产亚洲av| 国产乱人伦免费视频| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 一边摸一边做爽爽视频免费| 欧美成人性av电影在线观看| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 精品人妻在线不人妻| 热99re8久久精品国产| 亚洲欧美日韩另类电影网站| а√天堂www在线а√下载| 脱女人内裤的视频| 欧美黄色片欧美黄色片| 中出人妻视频一区二区| 午夜影院日韩av| 久久久国产成人免费| 日韩精品中文字幕看吧| 日本免费a在线| 中文字幕av电影在线播放| 国产免费av片在线观看野外av| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 身体一侧抽搐| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 国产单亲对白刺激| 亚洲精品在线观看二区| 青草久久国产| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 亚洲欧美一区二区三区黑人| 久久午夜综合久久蜜桃| 男人舔女人下体高潮全视频| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 咕卡用的链子| 久久久水蜜桃国产精品网| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 亚洲免费av在线视频| 国产高清视频在线播放一区| 真人一进一出gif抽搐免费| 午夜激情av网站| 91av网站免费观看| 91九色精品人成在线观看| 天堂动漫精品| 亚洲情色 制服丝袜| 久久狼人影院| 中出人妻视频一区二区| 久久国产乱子伦精品免费另类| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 九色亚洲精品在线播放| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 国产精品久久久久成人av| 午夜福利免费观看在线| 男男h啪啪无遮挡| 亚洲av美国av| 9色porny在线观看| 亚洲精品一二三| 色综合欧美亚洲国产小说| 免费看a级黄色片| 日韩有码中文字幕| 一进一出抽搐gif免费好疼 | 亚洲自拍偷在线| 日韩有码中文字幕| 亚洲专区中文字幕在线| 在线观看免费午夜福利视频| 麻豆久久精品国产亚洲av | 国产精品影院久久| 51国产日韩欧美| 人妻夜夜爽99麻豆av| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 成人国产综合亚洲| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 在线观看舔阴道视频| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 免费人成在线观看视频色| 欧美黄色片欧美黄色片| 久久久久久久亚洲中文字幕 | 波多野结衣巨乳人妻| www.999成人在线观看| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 香蕉av资源在线| 内地一区二区视频在线| avwww免费| 夜夜夜夜夜久久久久| 欧美一区二区精品小视频在线| 男插女下体视频免费在线播放| 波野结衣二区三区在线| 国模一区二区三区四区视频| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 亚洲精品久久国产高清桃花| 在线天堂最新版资源| 日本 欧美在线| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 亚洲av熟女| 国产精品乱码一区二三区的特点| 岛国在线免费视频观看| 757午夜福利合集在线观看| 观看美女的网站| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 看免费av毛片| 757午夜福利合集在线观看| 免费观看人在逋| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 久久久久久大精品| 日韩欧美在线乱码| 听说在线观看完整版免费高清| 麻豆一二三区av精品| 国产高清视频在线观看网站| 国产精品久久久久久久久免 | 国产私拍福利视频在线观看| 99热6这里只有精品| 精品福利观看| 久久久久久国产a免费观看| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| av在线蜜桃| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 亚洲人成网站高清观看| 2021天堂中文幕一二区在线观| 中国美女看黄片| netflix在线观看网站| 91麻豆精品激情在线观看国产| 在线看三级毛片| 午夜两性在线视频| 性色av乱码一区二区三区2| 精品久久久久久久久久免费视频| 色在线成人网| 日韩亚洲欧美综合| 亚洲国产精品合色在线| 床上黄色一级片| 直男gayav资源| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 嫩草影院入口| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 99久久精品热视频| 老司机午夜十八禁免费视频| 免费av不卡在线播放| 丰满乱子伦码专区| 别揉我奶头 嗯啊视频| 神马国产精品三级电影在线观看| 99久久无色码亚洲精品果冻| 国产在线男女| 久久中文看片网| 精品日产1卡2卡| 午夜免费成人在线视频| 一区二区三区免费毛片| 亚洲午夜理论影院| 欧美黄色片欧美黄色片| 91麻豆av在线| 日韩欧美国产一区二区入口| 一本久久中文字幕| 日韩精品中文字幕看吧| 九九热线精品视视频播放| 观看免费一级毛片| 久久精品国产自在天天线| 午夜激情欧美在线| 久久香蕉精品热| 午夜亚洲福利在线播放| 国产激情偷乱视频一区二区| 精品一区二区免费观看| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 国产精品综合久久久久久久免费| 午夜福利在线观看吧| 欧美精品啪啪一区二区三区| 听说在线观看完整版免费高清| 亚洲在线观看片| av国产免费在线观看| 一级a爱片免费观看的视频| 一边摸一边抽搐一进一小说| 欧美日韩黄片免| 久久久色成人| 午夜福利高清视频| aaaaa片日本免费| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 黄色日韩在线| 亚洲精品影视一区二区三区av| 在线a可以看的网站| 午夜福利视频1000在线观看| 成人毛片a级毛片在线播放| 无人区码免费观看不卡| 深夜a级毛片| 婷婷丁香在线五月| 他把我摸到了高潮在线观看| 中文字幕久久专区| 亚洲内射少妇av| 久久久久精品国产欧美久久久| 亚洲成人中文字幕在线播放| av黄色大香蕉| 亚洲18禁久久av| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 久久国产乱子免费精品| 黄色丝袜av网址大全| 天堂动漫精品| 亚洲午夜理论影院| 日韩av在线大香蕉| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| av在线观看视频网站免费| 特大巨黑吊av在线直播| 国产精品久久久久久精品电影| 天堂网av新在线| 露出奶头的视频| 成年女人毛片免费观看观看9| 丁香欧美五月| 中文在线观看免费www的网站| 亚洲av成人av| 一本综合久久免费| 18美女黄网站色大片免费观看| 不卡一级毛片| 两人在一起打扑克的视频| 午夜福利欧美成人| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 少妇的逼好多水| 亚洲无线观看免费| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 99精品久久久久人妻精品| 国产三级在线视频| 欧美国产日韩亚洲一区| 亚洲av成人av| 国产精品99久久久久久久久| 日韩欧美精品免费久久 | 久久草成人影院| 丰满的人妻完整版| 99精品在免费线老司机午夜| 超碰av人人做人人爽久久| 婷婷精品国产亚洲av| 亚洲欧美日韩高清专用| 亚洲自拍偷在线| 高清在线国产一区| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 日韩人妻高清精品专区| 特大巨黑吊av在线直播| 国产成年人精品一区二区| 日韩欧美在线乱码| 欧美成人a在线观看| 国产精品一区二区性色av| 久久99热6这里只有精品| 草草在线视频免费看| 脱女人内裤的视频| 亚洲av第一区精品v没综合| 国产亚洲精品久久久久久毛片| bbb黄色大片| 3wmmmm亚洲av在线观看| 午夜精品一区二区三区免费看| 亚洲av电影在线进入| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 国产淫片久久久久久久久 | 一进一出抽搐动态| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 成人特级av手机在线观看| 日韩精品中文字幕看吧| 麻豆国产av国片精品| 国产av在哪里看| 免费黄网站久久成人精品 | 日韩国内少妇激情av| 桃红色精品国产亚洲av| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 国产av一区在线观看免费| 国产亚洲欧美在线一区二区| 欧美不卡视频在线免费观看| 日韩亚洲欧美综合| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 日本一本二区三区精品| 国产精品女同一区二区软件 | 香蕉av资源在线| 久久久久久久久中文| 老鸭窝网址在线观看| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 男人狂女人下面高潮的视频| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片 | 亚洲avbb在线观看| 亚洲精品粉嫩美女一区| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 在现免费观看毛片| 美女免费视频网站| 国产高清三级在线| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 亚洲成人免费电影在线观看| 在线看三级毛片| 欧美午夜高清在线| 中文资源天堂在线| 亚洲五月婷婷丁香| 亚洲欧美日韩无卡精品| 亚洲男人的天堂狠狠| 麻豆国产97在线/欧美| 国产精品乱码一区二三区的特点| 国产欧美日韩一区二区精品| eeuss影院久久| 免费人成在线观看视频色| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 国产高潮美女av| 欧美极品一区二区三区四区| 国产黄a三级三级三级人| 国内精品一区二区在线观看| 成人性生交大片免费视频hd| 国产一区二区在线观看日韩| 国产欧美日韩精品一区二区| 男女视频在线观看网站免费| 波多野结衣高清无吗| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 亚洲无线在线观看| 国产精品1区2区在线观看.| 午夜激情福利司机影院| 国产欧美日韩一区二区三| 欧美日本视频| 俺也久久电影网| 日本五十路高清| 九色国产91popny在线| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 亚洲精品在线美女| 婷婷丁香在线五月| 国产一区二区激情短视频| 成人国产综合亚洲| 三级毛片av免费| 欧美午夜高清在线| 久久久久久久久久成人| 久9热在线精品视频| 精品久久久久久久久亚洲 | 亚洲精品亚洲一区二区| 日本在线视频免费播放| av在线天堂中文字幕| 亚洲第一区二区三区不卡| 99久国产av精品| 国产一区二区激情短视频| .国产精品久久| 亚洲欧美激情综合另类| 在线免费观看的www视频| 国产伦在线观看视频一区| 好男人在线观看高清免费视频| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 午夜免费成人在线视频| 日本一本二区三区精品| 一区二区三区四区激情视频 | 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 窝窝影院91人妻| 成人av一区二区三区在线看| 久久九九热精品免费| 两个人的视频大全免费| 简卡轻食公司| 亚洲乱码一区二区免费版| 成熟少妇高潮喷水视频| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 十八禁国产超污无遮挡网站| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 亚洲,欧美,日韩| 久久午夜福利片| 三级国产精品欧美在线观看| 99热这里只有是精品在线观看 | 亚洲成av人片免费观看| 亚洲精品亚洲一区二区| 国产精品久久久久久久久免 | 久久久久国内视频| ponron亚洲| 免费看日本二区| 香蕉av资源在线| 精品国内亚洲2022精品成人| 一级毛片久久久久久久久女| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 久99久视频精品免费| 美女大奶头视频| 久久人妻av系列| 淫秽高清视频在线观看|