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    促紅細胞生成素對荷瘤小鼠免疫功能的影響①

    2013-11-27 11:15:34劉月彩耿玉蘭劉澤世單保恩河北醫(yī)科大學第一醫(yī)院檢驗科石家莊050031
    中國免疫學雜志 2013年1期
    關鍵詞:荷瘤亞群脾臟

    劉月彩 耿玉蘭 劉澤世 沈 莉 單保恩 (河北醫(yī)科大學第一醫(yī)院檢驗科,石家莊050031)

    腫瘤的發(fā)生和發(fā)展是多種因素作用的結果。機體免疫功能在控制腫瘤的發(fā)生和發(fā)展方面發(fā)揮著重要的作用,機體免疫監(jiān)視功能的下降,腫瘤細胞產(chǎn)生的免疫抑制因素以及腫瘤細胞的免疫逃逸作用等是腫瘤發(fā)生和發(fā)展的原因之一[1,2],因此,提高機體的免疫功能,就有可能起到抗腫瘤的作用。促紅細胞生成素(Erythropoietin,EPO)是一種分子量約為30.4 kD的糖蛋白激素,EPO主要生理功能是作用于骨髓造血細胞,促進紅系祖細胞增殖、分化和成熟,臨床上主要用于治療腎臟疾病、癌癥及放化療等引起的貧血。EPO對提高血紅蛋白水平,減少輸血需求,提高患者生活質量發(fā)揮著重要作用。近年來發(fā)現(xiàn),EPO 對免疫系統(tǒng)有著廣泛的影響[3,4],但對免疫系統(tǒng)影響主要來自于EPO治療腎衰竭貧血患者的研究,而有關EPO對腫瘤患者免疫功能影響的研究鮮有報道。本文旨在探討EPO對荷瘤小鼠紅細胞(RBC)、白細胞(WBC)、紅細胞壓積(Hct)、血紅蛋白(Hb)含量、T淋巴細胞亞群分布和血清細胞因子含量的影響,以期對EPO用于臨床治療腫瘤相關性貧血和估計預后提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料 小鼠黑色素瘤細胞株B16由河北醫(yī)科大學第四醫(yī)院科研中心提供,5~6周齡C57BL/6小鼠,雄性,體重18~20 g,購自中科院北京實驗動物中心(合格證號:Scxk京-2005-0013);RPMI1640和胰蛋白酶購自美國Gibco公司;胎牛血清購自杭州四季青生物有限公司;EPO購自華北制藥有限公司;FITC標記的抗小鼠CD8單克隆抗體(mAb)及PE標記的CD4 mAb均購自eBioscience公司;小鼠TNF-α和IL-2 ELISA試劑盒購自ADL公司。

    1.2 方法

    1.2.1 細胞培養(yǎng) B16細胞用含10%胎牛血清、100 U/ml青霉素和100 μg/ml鏈霉素的RPMI1640培養(yǎng)基,于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),以0.25%的胰蛋白酶消化細胞傳代,取對數(shù)生長期細胞用于實驗。

    1.2.2 動物實驗 C57BL/6小鼠18只隨機分為3組:正常對照組、鹽水處理組和EPO處理組,每組6只。除正常對照組外每只小鼠右前腋皮下注射B16細胞1×106個/0.2 ml。每天觀察小鼠成瘤情況。鹽水處理組:按EPO用法和用量腹腔內注射生理鹽水。EPO處理組:于第5天觀察到小鼠成瘤后,腹腔注射EPO 60 U/kg,每周3次,連用2周,其用法和用量參考文獻[5]。正常對照組:不做任何處理。每天觀察小鼠的一般狀況。

    1.2.3 小鼠外周血中RBC、Hb、Hct和WBC的測定于停藥后次日,將各組小鼠摘眼球放血,EDTA抗凝,應用 ACTdiff2血細胞分析儀測定外周血中RBC、Hb、Hct和 WBC 含量。

    1.2.4 EPO對小鼠脾臟臟器指數(shù)的影響 取血后將各組小鼠處死,準確稱量動物體重、脾臟重量,按公式計算脾臟臟器指數(shù)。脾臟臟器指數(shù)(Spleen index,SI)=脾臟重量(mg)/體重(g)。

    1.2.5 小鼠脾臟T細胞亞群的檢測 將各組小鼠處死后,無菌摘取脾臟,制備脾細胞懸液,調整細胞濃度為1×107ml-1,取0.1 ml于試管中,分別加入熒光標記的小鼠抗CD4+和CD8+T單克隆抗體,振蕩混勻,室溫避光放置30分鐘,PBS洗滌后,用流式細胞儀分析脾淋巴細胞CD4+、CD8+T百分率,計算CD4+/CD8+T比值。

    1.2.6 小鼠血清TNF-α和IL-2含量測定 將1.2.3所取血液靜置后離心(3 000 r/min,10分鐘),取血漿,用ELISA檢測試劑盒測定血清中TNF-α、IL-2的含量,按試劑盒說明進行操作。在酶標測試儀上測定各樣本492 nm處吸光度值。根據(jù)標準曲線計算出血清中細胞因子的含量。

    1.3 統(tǒng)計學分析 所有數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計學軟件進行統(tǒng)計分析,實驗結果以±s表示,兩個獨立樣本均數(shù)比較用t檢驗,各組均數(shù)間比較用單因素方差分析。P<0.05表示有統(tǒng)計學差異。

    2 結果

    2.1 EPO對小鼠外周血中 RBC、Hb、Hct和 WBC的影響 與正常小鼠相比,鹽水處理組小鼠RBC、Hb和Hct水平顯著降低(P<0.05);與鹽水處理組相比,EPO可有效提高荷瘤小鼠RBC、Hb和Hct水平(P<0.05),與正常小鼠相比無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。三組小鼠外周血中WBC數(shù)量無明顯差異(P >0.05,表1)。

    2.2 EPO對小鼠脾臟臟器指數(shù)的影響 EPO處理組和鹽水處理組荷瘤小鼠的脾臟重量較正常對照組增加,脾臟臟器指數(shù)明顯高于正常小鼠(P<0.05)。EPO處理組小鼠的脾臟臟器指數(shù)明顯高于鹽水處理組(P <0.05,表1)。

    2.3 EPO對小鼠脾T細胞亞群的影響 鹽水處理組及EPO處理組荷瘤小鼠脾臟CD4+T細胞百分率及CD4+/CD8+T比值明顯低于正常小鼠(P<0.05),EPO處理組與鹽水處理組相比,CD4+T小鼠脾細胞百分率無差別(P>0.05),CD8+T細胞百分率下降(P<0.05),CD4+/CD8+T比值升高(P<0.05,圖1和表2)。

    2.4 EPO對小鼠血清中細胞因子含量的影響 鹽水處理組及EPO處理組荷瘤小鼠血清中TNF-α、IL-2含量明顯低于正常小鼠(P<0.05),鹽水處理組及EPO處理組荷瘤小鼠血清中TNF-α含量無差別(P>0.05),EPO處理組小鼠血清中IL-2水平與鹽水處理組相比明顯增高,有統(tǒng)計學差異(P<0.05,圖2)。

    表1 EPO對荷瘤小鼠外周血中RBC、Hb、Hct和WBC及脾臟臟器指數(shù)的影響Tab.1 Effects of EPO on levels of RBC,Hb,Hct and WBC in peripheral blood and spleen index in tumor-bearing mice

    圖1 EPO對小鼠脾T細胞亞群的影響Fig.1 Effects of EPO on T cell subsets of mice spleen analyzed by FCM

    表2 EPO對小鼠脾T細胞亞群的影響Tab.2 Effects of EPO on T cell subsets of mice spleen

    圖2 EPO對小鼠血清中TNF-α和IL-2含量的影響Fig.2 Effects of EPO on TNF-α and IL-2 level in serum from mice

    3 討論

    促紅細胞生成素是治療腎性貧血的首選藥物,近年來用于腫瘤相關性貧血的治療也取得較好的效果[6]。近來研究發(fā)現(xiàn),EPO及EPOR廣泛分布在非紅細胞類型的細胞上[7]。不但對血液系統(tǒng),而且對免疫系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)等均有影響[3,4,8-10]。本實驗采用 C57BL/6 小鼠黑色素瘤細胞B16皮下移植瘤模型,從脾臟重量的變化、T細胞亞群分布、細胞因子分泌等方面研究EPO對小鼠免疫功能的影響。

    本研究結果顯示,鹽水處理組荷瘤小鼠外周血RBC、Hb和Hct水平比正常對照組顯著降低;與鹽水處理組相比,EPO可有效提高小鼠外周血RBC、Hb和Hct水平,與正常對照組相比無差別。但EPO并未顯著影響小鼠外周血中WBC的數(shù)量,三組小鼠外周血中WBC的數(shù)量沒有明顯差別。荷瘤小鼠脾臟重量較正常對照組增加,脾臟臟器指數(shù)明顯高于正常小鼠。EPO處理組小鼠的脾臟臟器指數(shù)較鹽水處理組增高,可能與其提高血液中RBC、Hb和Hct有關。

    T細胞是構成免疫防御系統(tǒng)的重要因素,也是機體抗腫瘤特異性免疫應答的主體,包括CD4+輔助性T細胞和CD8+抑制性T細胞兩個主要亞群,CD4+T細胞具有調節(jié)免疫反應活性、分泌細胞因子的作用,處于整個腫瘤免疫的核心位置,而CD8+T細胞則有免疫抑制和細胞毒性作用,二者相互變化、協(xié)調以維持機體的免疫平衡。本研究結果顯示,EPO對荷瘤小鼠脾臟CD4+T細胞百分率無影響,EPO處理組荷瘤小鼠脾臟CD8+T細胞百分率與鹽水處理組相比下降,致使CD4+/CD8+T比值水平升高。提示EPO可通過下調CD8+T細胞百分率而影響荷瘤小鼠的免疫功能。

    細胞因子(Cytokine)是一類由活化的免疫細胞和相關基質細胞分泌,能作用于分泌細胞本身或其他細胞的生物活性物質,可參與機體的多種免疫調節(jié),激發(fā)宿主對腫瘤的免疫反應,并可直接抑制惡性腫瘤的生長,在機體抗腫瘤免疫中具有重要意義[11,12]。TNF-α 是反映機體免疫功能的重要指標,產(chǎn)生于巨噬細胞和淋巴細胞,在腫瘤治療中發(fā)揮著重要作用[13]。IL-2是細胞免疫應答所必需的細胞因子,通過多種途徑發(fā)揮免疫調節(jié)作用[14,15]。IL-2主要由抗原激活的T細胞(主要是CD4+T亞群)產(chǎn)生,可促進細胞毒T細胞(CTL)增殖與分化,激活巨噬細胞和NK細胞。近幾年來,IL-2還作為一種免疫制劑,在臨床上用于治療黑色素瘤,取得了一定效果;TNF-α及IL-2二者具有協(xié)同抗腫瘤效應[16]。結果顯示,EPO沒有顯著影響荷瘤小鼠血清中TNF-α含量,但EPO處理組小鼠血清中IL-2水平與鹽水處理組相比明顯增高。表明EPO有可能通過促進免疫細胞分泌細胞因子IL-2,以改善機體免疫功能,從而提高機體對腫瘤的特異性免疫應答。

    綜上所述,黑色素瘤可引起小鼠外周血RBC、Hb、Hct水平和免疫功能的下降,應用EPO在改善荷瘤小鼠貧血狀態(tài)的同時,又可通過改變血清中細胞因子的含量和血中T淋巴細胞亞群的比例來增強荷瘤小鼠的免疫功能。

    1 Bubenik J.MHC class I down-regulation:tumour escape from immune surveillance[J].Int J Oncol,2004;25(2):487-491.

    2 郝 群,李大金.免疫系統(tǒng)衰老的研究進展[J].上海免疫學雜志,2003;23(1):60-62.

    3 李 宓,杜 藝,彭 莉et al.促紅細胞生成素對尿毒癥患者體液及細胞免疫功能的影響[J].中國免疫學雜志,2005;21(8):624-626.

    4 徐家云,蘆丹萍,張春榮et al.促紅細胞生成素對腹透患者免疫功能的影響[J].陜西醫(yī)學雜志,2004;33(3):228-229.

    5 Sigounas G,Sallah S,Sigounas V Y.Erythropoietin modulates the anticancer activity of chemotherapeutic drugs in a murine lung cancer model[J].Cancer Lett,2004;214(6):171-179.

    6 Gupta S,Singh P K,Bisht S S et al.Role of recombinant human erythropoietin in patients of advanced cervical cancer treated“by chemoradiotherapy”[J].Cancer Biol Ther,2009;8(1):13-17.

    7 馮 玫,李玉翠.EPO與EPO受體的研究進展[J].白血病·淋巴瘤,2005;14(4):254-256.

    8 康文清,朱長連,熊 虹et al.重組人促紅細胞生成素治療新生兒缺氧缺血性腦病的療效[J].實用兒科臨床雜志,2006;21(2):86-87.

    9 郭洪波,鄒 飛.紅細胞生成素(EPO)對腦源性神經(jīng)干細胞增殖與分化的調控作用[J].解放軍醫(yī)學雜志,2005;30(7):623-625.

    10 杜心靈,葉 亮,夏家紅et al.重組人紅細胞生成素對大鼠心肌梗死的治療作用[J].中華實驗外科雜志,2004;21(11):1315-1316.

    11 Salgaller M L,Lodge P A.Use of cellular and cytokine adjuvants in the immunotherapy of cancer[J].J Surg Oncol,1998;68(2):122-138.

    12 Wong R J,Patel S G,Kim S.Cytokine gene transfer enhances herpes oncolytic therapy in murine squmous cell carcinoma[J].Hum Gene Ther,2001;12(3):253-265.

    13 Younes A,Kadin M E.Emerging applications of the tumor necrosis factor family of ligands and receptors in cancer therapy[J].J Clin Oncol,2003;21(18):3526-3534.

    14 Kikuchi T,Joki T,Abe T et al.Antitumor activity of killer cells stimulated with both interleuk in-2 and interleukin-12 on mouse glioma cell[J].J Immunother,1999;22(3):245-250.

    15 Nishimura T,Ohta S,Sato N et al.Combination tumor immunotherpy with recombinant tumor necrosis factor and recombinant interleukin 2 in mice[J].Int J Cancer,1987;40(2):255-261.

    16 Schiller J H,Morgan-Ihrig C,Levitt M L.Concomitant administration of interlenkin-2 plus tumor necrosis factor-α in advanced nonsmall cell lung cancer[J].Am J Clin Oncol,1995;18(1):47-51.

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