不同廠家生產(chǎn)的復(fù)方丹參片指標(biāo)成分的含量比較

北京市通州區(qū)藥品檢驗(yàn)所（101100）馬啟武

復(fù)方丹參片是由丹參、三七、冰片組成的復(fù)方制劑，具有活血化瘀、理氣止痛之功效，主要用于心絞痛、胸悶等的治療。其中丹參為主要活性成分[1]。而丹參的有效成分又包含脂溶性的蒽醌類成分和水溶性的酚酸類成分。脂溶性蒽醌類成分包括丹參酮I、丹參酮ⅡA、丹參酮ⅡB、隱丹參酮等10余種成分，其中以丹參酮ⅡA含量較高，統(tǒng)稱為丹參酮；水溶性酚酸類成分包括丹參素、原兒茶酸、原兒茶醛和其他酚酸類成分[2][3][4][5]，水溶性成分也可能是丹參治療心血管疾病方面的主要有效成分之一[6]。筆者對市場上流通的不同廠家生產(chǎn)的12批次復(fù)方丹參片按照中國藥典2010年版一部的含量測定方法進(jìn)行質(zhì)量方面的比較[7]。

1 儀器與試藥

日本島津公司LC-20A高效液相色譜儀（SPD-M20A檢測器）； MettLer XS205天平（十萬分之一）；超聲儀[天津電子新技術(shù)（北京）有限公司]；丹參酮ⅡA對照品（批號：110766-200619）、丹酚酸B對照品（批號：111562-201111），中國藥品生物制品檢定所提供；乙腈、甲醇（色譜純），純化水，其他試劑均為分析純。

2 含量測定方法

2.1 丹參酮ⅡA含量測定方法

2.1.1 色譜條件 色譜柱：WondaSil C18（150mm×4.6mm，5μm）；流動相：甲醇-水（73∶27）；檢測波長：270nm；流速：1.0mL/min，柱溫：35℃，理論塔板數(shù)按丹參酮ⅡA色譜峰計不低于2000；進(jìn)樣量10μL。

2.1.2 對照品溶液制備 精密稱取丹參酮ⅡA對照品10.25mg加入到100mL的棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為丹參酮ⅡA儲備液。取儲備液4mL加入到10mL的棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得（40μg/mL）。

2.1.3 供試品溶液制備 取本品10片，除去包衣，精密稱定，研細(xì)，取約1g，精密稱定，置具塞棕色瓶中，精密加入甲醇25mL，密塞，稱定重量，超聲處理15min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液置棕色瓶中，即得。

2.2 丹酚酸B含量測定方法

2.2.1 色譜條件 色譜柱：WondaSil C18（150mm×4.6mm，5μm）；流動相：乙腈-甲醇-甲酸-水（10∶30∶1∶59）；檢測波長：286nm；流速：1.0mL/min；柱溫：35℃；理論塔板數(shù)按丹酚酸B色譜峰計不低于4000；進(jìn)樣量10μL。

2.2.2 對照品溶液制備 精密稱取丹酚酸B對照品10.19mg加入到100mL的量瓶中，加水至刻度，搖勻，作為丹酚酸B儲備液。精密量取6mL加入到10mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得（60μg/mL）。

2.2.3 供試品溶液制備 取本品10片，除去包衣，精密稱定，研細(xì)，取0.15g，精密稱定，置50mL量瓶中，加水適量，超聲處理30min，放冷，加水至刻度，搖勻，離心，取上清液，即得。

3 方法學(xué)考查

3.1 線性范圍考察 取丹參酮ⅡA對照品儲備液，精密量取2、4、6、8mL，分別加入到10mL的棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，制成20.5、41.0、61.5、82.0、102.5μg/mL系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液，按上述色譜條件分別進(jìn)樣測定，記錄峰面積，以質(zhì)量濃度（Y）為縱坐標(biāo)、相應(yīng)的峰面積（X）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸得Y＝aX+b，a＝8.6054×10-7，b＝0.0556，R＝0.99999。結(jié)果表明丹參酮ⅡA在20.5～102.5μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。取丹酚酸B對照品儲備液，精密量取2、4、6、8mL，分別加入到10mL的量瓶中，加水至刻度，搖勻，制成20.4、40.8、61.2、81.6、101.9μg/mL系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液，按上述色譜條件分別進(jìn)樣測定，記錄峰面積，以質(zhì)量濃（Y）為縱坐標(biāo)、相應(yīng)的峰面積（X）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為Y＝aX+b，a＝4.179×10-6，b＝0.0218，R＝0.99999。結(jié)果表明丹酚酸B在20.4～101.9μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

附表1 丹參酮ⅡA和丹酚酸B加樣回收試驗(yàn)

附表2 不同廠家樣品含量測定結(jié)果

附表3 同一廠家不同批號樣品含量測定結(jié)果

3.2 精密度和溶液的穩(wěn)定性試驗(yàn) 分別取對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，每次10μL，以色譜峰面積計算，測定丹參酮ⅡA的RSD為0.06%，丹酚酸B的RSD為0.24%，表明精密度良好；分別取對照品溶液，于0、2、4、8、12、24h進(jìn)樣，每次10μL，共進(jìn)樣6次，測定峰面積，測定丹參酮ⅡA、丹酚酸B的RSD分別為0.07%、0.52%，表明溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

3.3 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品內(nèi)容物5份，按供試品溶液的制備方法制備，測定峰面積，測定丹參酮ⅡA和丹酚酸B的RSD分別為1.09%和0.92%，重復(fù)性良好。

3.4 加樣回收試驗(yàn) 丹參酮ⅡA：分別稱取6份同一樣品約（批號：100615）0.9g，分別精密加入對照品溶液（精密稱取丹參酮ⅡA8.09mg，精密加甲醇200mL，搖勻）25mL，按供試品溶液制備方法操作。丹酚酸B：分別稱取6份同一樣品約（批號：100615）0.15g，分別精密加入對照品溶液（精密量取丹酚酸B儲備液25mL，置500mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得）50mL，按供試品溶液制備方法操作。按上述色譜條件分別精密吸取10μL注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，計算回收率，結(jié)果良好，見附表1。

4 測定結(jié)果

取不同生產(chǎn)廠家的樣品12個批次，按上述的色譜條件測定，計算丹參酮ⅡA和丹酚酸B的含量及含量變異系數(shù)（RSD）。實(shí)驗(yàn)表明，不同廠家12批次樣品中丹參酮ⅡA、丹酚酸B含量總體變異系數(shù)分別為27.45%和10.52%。相同廠家不同批次樣品中丹參酮ⅡA、丹酚酸B含量變異系數(shù)分別為20.19%和10.55%，見附表2和3。

5 討論

《中國藥典》（2010年版）一部規(guī)定每片含丹參酮ⅡA和丹酚酸B分別不得少于0.20mg和5.0mg，上述結(jié)果顯示含量符合藥典要求。但也說明不同廠家的產(chǎn)品含量之間差異很大，且同一廠家不同批次間含量差異也很大。這主要是由于受氣候、生長環(huán)境、土壤條件、管理措施及炮制工藝等因素的影響，導(dǎo)致飲片質(zhì)量差異較大；而制劑生產(chǎn)工藝模式的落后是中成藥質(zhì)量差異主要的原因。研究發(fā)現(xiàn)，丹參酮ⅡA和丹酚酸B含量的高低與抗心肌缺血作用即藥效的強(qiáng)弱成正比，故臨床療效存在較大差異是必然的。而要達(dá)到中成藥質(zhì)量穩(wěn)定，臨床療效確切，筆者認(rèn)為改變現(xiàn)有的中成藥制劑工藝模式可能是最簡單的一種方式。若將已知的某一種或幾種成分含量的中藥飲片或提取物作為配方標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)過一定的制劑工藝制成產(chǎn)品，會使臨床療效進(jìn)一步提升。