高效液相色譜法測(cè)定蜂膠膠囊中吡啶甲酸鉻的含量

廣西桂林食品藥品檢驗(yàn)所（541002）黃海燕 鐘建理

蜂膠膠囊是以蜂膠、吡啶甲酸鉻等為主要原料制成的保健食品，具有輔助降血糖的保健功能。本文參照保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范（2003年版）保健食品中吡啶甲酸鉻的測(cè)定，采用HPLC法測(cè)定蜂膠膠囊中吡啶甲酸鉻的含量并行方法學(xué)考察，據(jù)考察結(jié)果制定檢驗(yàn)操作規(guī)程。

1 試藥

吡啶甲酸鉻（Ⅲ）（含量：98.0%；Lot.4SNMF-1M）：購(gòu)于上海安譜科學(xué)儀器有限公司；乙腈為色譜純，磷酸氫二鉀和磷酸二氫鉀均為分析純，水為高純水。蜂膠膠囊：A：西安某保健品有限公司，批號(hào)：20110401；B：北京某保健食品廠，批號(hào)：20110301。

2 儀器

PE-200型高效液相色譜儀；XS205DU型電子分析天平；BRANSON BUT2030-40-06超聲儀。

3 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：phenomenex?C18（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈-磷酸鹽緩沖液（磷酸氫二鉀4.35g，磷酸二氫鉀3.40g，加水1000mL溶解）（10∶90）；檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm[1]；柱溫：35℃；流速：1.0mL/min；進(jìn)樣量10μL。

4 溶液的配制

4.1 對(duì)照品溶液 精密稱取吡啶甲酸鉻對(duì)照品（含量98.0%）13mg，置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取2mL置5mL量瓶中，加甲醇0.5mL，加水至接近刻度，放冷，加水至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，即得。

4.2 供試品溶液 精密稱取本品內(nèi)容物0.8g，置20mL容量瓶中，加甲醇10mL，超聲提取5min，加水至接近刻度，放冷，加水至刻度，搖勻，靜置，上清液用0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得。

5 測(cè)試方法與結(jié)果

附圖 高效液相色譜圖

5.1 線性關(guān)系考察 精密稱取吡啶甲酸鉻對(duì)照品（含量98.0%）13.36mg，置50mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻。分別精密吸取1mL、2mL置5mL容量瓶中，加甲醇1.5mL、0.5mL，再加水至刻度，放冷，加水至刻度，搖勻，即得（52.3712μg/mL、104.7424μg/mL）；取上述（104.7424μg/mL）溶液0.2mL、0.5mL、1mL置10mL量瓶中，加甲醇-水（1∶1）至刻度，搖勻，即得（2.0948μg/mL、5.2371μg/mL、10.4742μg/mL）。按上述色譜條件進(jìn)樣10μL。以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)并進(jìn)行線性回歸得：Y＝1.307×104x-2.512×103；r＝0.9999。表明吡啶甲酸鉻在2.0948～104.7424μg/mL內(nèi)線性關(guān)系良好。

5.2 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一樣品（A廠）6份，按供試品溶液的制備方法制得供試品溶液，按色譜條件測(cè)定。結(jié)果平均含量為250.0mg/100g。RSD為1.0%（n＝6）。色譜圖見(jiàn)附圖所示。

5.3 檢出限（LOD） 按信噪比（S/N）為3計(jì)算，對(duì)照品溶液稀釋至0.1571μg/mL，進(jìn)樣10μL，本法檢出限為0.1571μg/mL。

5.4 定量限（LOQ） 按信噪比（S/N）為10計(jì)算，對(duì)照品溶液稀釋至0.5237μg/mL，進(jìn)樣10μL，本法定量限為0.5237μg/mL。

5.5 回收率試驗(yàn) 取已知含量的樣品0.4g置20mL量瓶中，分三個(gè)水平分別加入0.2619mg/mL的吡啶甲酸鉻對(duì)照品3mL、4mL、5 mL，加甲醇7mL、6mL、5mL，超聲處理20min，加水至接近刻度，放冷，加水至刻度，搖勻，靜置，上清液用0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液。以上述色譜條件測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算。測(cè)得平均回收率98.68%，RSD為0.6%（n＝9）。見(jiàn)附表1。

附表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）

附表2 2批樣品含量測(cè)定結(jié)果

5.6 樣品測(cè)定 取樣品，分別按供試品溶液的制備方法制得供試品溶液，測(cè)定。按外標(biāo)法計(jì)算，結(jié)果見(jiàn)附表2。

6 討論

6.1 吡啶甲酸鉻具有防止早期動(dòng)脈粥樣硬化及慢性血管疾病等多種藥理作用及生物活性。體內(nèi)、外實(shí)驗(yàn)及流行病學(xué)均顯示，吡啶甲酸鉻對(duì)多種腫瘤均有抑制作用[2]。

6.2 在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，蜂膠膠囊樣品按保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范（2003年版）“保健食品中吡啶甲酸鉻的測(cè)定”直接加甲醇∶水（1∶1）超聲提取，測(cè)得含量和回收率極低，說(shuō)明提取不完全，可能是樣品中所含的蜂膠遇水后對(duì)吡啶甲酸鉻的溶解有影響，而先加甲醇超聲后再加水振搖提取，回收率達(dá)到98.68%。

6.3 從實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，有一個(gè)廠家生產(chǎn)的蜂膠膠囊，其標(biāo)示每100g含吡啶甲酸鉻92.9mg，而測(cè)定結(jié)果為10.8mg，含量?jī)H約為標(biāo)示的11.6%。

6.4 實(shí)驗(yàn)考察結(jié)果表明，應(yīng)用本法對(duì)蜂膠膠囊中的吡啶甲酸鉻進(jìn)行含量測(cè)定是可行的，而且筆者還對(duì)樣品提取方法進(jìn)行簡(jiǎn)化，使其更快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確可靠。