馬立克病雞血清生化指標(biāo)的檢測與分析

田文霞，王 穎，劉紅霞，喻 進(jìn)，寧官保，高榮琨，高文偉，趙宇軍

（山西農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，山西太谷030801）

雞馬立克?。∕arek＇s disease，MD）是由皰疹病毒亞科馬立克病病毒（MDV）引起的最常見的雞惡性腫瘤病，以淋巴細(xì)胞組織增生，在各內(nèi)臟器官及外周神經(jīng)、肌肉、皮膚、性腺、虹膜中產(chǎn)生單核細(xì)胞浸潤和腫瘤為特征［1］。患有腫瘤型馬立克病的雞能夠發(fā)生肉眼可見的脂肪性動(dòng)脈粥樣硬化（Arteriosclerosis，AS），與人的慢性動(dòng)脈粥樣硬化相似［2－3］。AS是人類心腦血管疾病的主要病理基礎(chǔ)［4］，還可引起其他疾病，例如心肌梗塞、腦梗塞、壞疽等。隨著研究的深入，發(fā)現(xiàn)血清中γ－谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（gamma glutamyltromsferase，GGT）為冠狀微血管損傷的標(biāo)記物，是非致死性心肌梗死、致死性冠狀動(dòng)脈硬化性心臟病和腦卒中的獨(dú)立危險(xiǎn)因素［5－8］，有學(xué)者報(bào)道在頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中有GGT表達(dá)［9］，從而表明GGT可能參與了動(dòng)脈粥樣硬化的形成。

除GGT外，有研究表明脂蛋白（a）［lipoprotein（a），LP（a）］是決定冠狀動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的重要因子［10］，致動(dòng)脈硬化死亡率受高密度脂蛋白（high density lipoprotein，HDL）水平影響，較低的 HDL水平的患者死亡率高［11］。LP（a）在肝臟中合成，是與低密度脂蛋白（low density lipoprotein，LDL）結(jié)構(gòu)相似的脂蛋白。因此，研究血清中LDL、HDL的含量與AS發(fā)生是否有關(guān)具有重要意義。

目前關(guān)于GGT、PL（a）、HDL、LDL等生化指標(biāo)與AS的相關(guān)性研究與分析已報(bào)道較多，但馬立克病雞血清中GGT、HDL及LDL等含量變化與AS間關(guān)系的研究尚未見報(bào)道。為此，本試驗(yàn)對馬立克病雞血清生化指標(biāo)GGT、HDL、LDL進(jìn)行檢測與分析，以揭示GGT、HDL、LDL含量變化與 MD動(dòng)脈粥樣硬化之間的關(guān)系，可為動(dòng)物動(dòng)脈粥樣硬化的臨床預(yù)測提供依據(jù)，做到及早預(yù)防，減少發(fā)病率。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)用動(dòng)物 72只1日齡海蘭褐公雛雞，購自太谷縣某種雞場。

1.1.2 毒株 馬立克病毒強(qiáng)毒京－1株血毒，購自北京市農(nóng)林科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，批號200806，液氮中保存。

1.1.3 試劑及儀器 G系列γ－谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶檢測試劑盒，北京九強(qiáng)生物技術(shù)有限公司，批號GS9051G；高密度脂蛋白膽固醇檢測試劑盒，Olympus Life and Science Europa GmbH，Germany，批號OSR6287；G系列低密度脂蛋白膽固醇檢測試劑盒，北京九強(qiáng)生物技術(shù)有限公司，批號GS141Z；O－lympus AU640全自動(dòng)生化分析儀（MISHIMA OLYMPUS，日本）。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)雞分組、攻毒、飼養(yǎng) 72只1日齡公雛雞，分為二組，每組各36只。對照組（C）：腹腔注射0.2mL滅菌Hanks液；攻毒組（V）：將馬立克強(qiáng)毒京－1株血毒用滅菌Hanks液稀釋20倍，每只雞腹腔注射0.2mL。按照常規(guī)飼養(yǎng)管理，觀察發(fā)病情況。分別于3、6、10、15、20、26、35、45、60d，每組各取4只，心臟采血，剖檢觀察病變，析出血清，備檢。

1.2.2 血清γ－谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶含量測定 按照G系列γ－谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶檢測試劑盒（IFCC速率法）說明書測定。

1.2.3 血清脂蛋白含量測定 在脂蛋白中既有蛋白質(zhì)又有膽固醇，還有磷脂的復(fù)合體，較難定量。由于其中的膽固醇含量較為穩(wěn)定，因此以測定脂蛋白中膽固醇總量的方法作為脂蛋白的定量依據(jù)，即測定 HDL、LDL中膽固醇含量作為HDL、LDL的含量。分別按照高密度脂蛋白膽固醇檢測試劑盒和G系列低密度脂蛋白膽固醇檢測試劑盒說明書測定。

1.2.4 數(shù)據(jù)處理 所有試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SAS 6.12統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析，以ˉx±SD表示。P＜0.05為差異顯著，P＜0.01為差異極顯著。

2 結(jié)果

2.1 病理剖檢結(jié)果

26日齡時(shí)，攻毒組雞剖檢有肉眼可觀病理變化，睪丸腫大，腎稍腫大；35日齡時(shí)，肝稍腫大，睪丸腫大，法氏囊萎縮，胸腺萎縮甚至退化，心臟動(dòng)脈出現(xiàn)粥樣硬化；45日齡時(shí)出現(xiàn)肝腫瘤。

2.2 血清生化指標(biāo)的分析

表1為攻毒組與對照組GGT含量的變化，攻毒組35d時(shí)明顯高于對照組，而其他階段低于對照組，且差異不明顯；表2HDL含量變化顯示，攻毒組與對照組相比，HDL在注射 MDV 10、15、20、35、60d時(shí)低于對照組，且在15d時(shí)差異極顯著（P＜0.01）；由表3可見，LDL在注射 MDV 10、15、26、35、45d時(shí)高于對照組，且在15d時(shí)差異極顯著（P＜0.01）。

表1 血清谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶活性變化Table 1 The changes of GGT activity in serum U／L

表2 血清高密度脂蛋白含量變化Table 2 The changes of HDL content in serum mmol／L

表3 血清低密度脂蛋白含量變化Table 3 The changes of LDL content in serum mmol／L

3 討論

在臨床醫(yī)學(xué)診斷中，高密度脂蛋白和低密度脂蛋白是作為檢測心血管疾病的重要指標(biāo)，尤其是對AS的檢測。高密度脂蛋白含量偏低、同時(shí)低密度脂蛋白含量偏高，是動(dòng)脈粥樣心血管疾病血脂異常的表現(xiàn)［12］。Hajjar D P等［13］研究發(fā)現(xiàn)，馬立克病病毒感染雞早期階段出現(xiàn)膽固醇和膽固醇酯代謝改變引起主動(dòng)脈脂肪增加。本研究對馬立克病雞血清HDL、LDL檢測也顯示出相同的結(jié)果，在發(fā)病前期15d時(shí)就達(dá)到顯著水平，而病雞剖檢發(fā)現(xiàn)35d時(shí)出現(xiàn)動(dòng)脈粥樣硬化癥狀，提示通過對HDL、LDL的檢測可及早預(yù)測AS及馬立克病的發(fā)生。

血清中谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶主要來自于肝臟，肝膽系統(tǒng)發(fā)生實(shí)質(zhì)性變化時(shí)，可使血清中谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶含量上升。臨床醫(yī)學(xué)專家認(rèn)為，根據(jù)漿膜腔積液脫落細(xì)胞學(xué)檢查診斷為惡性腫瘤的患者，血清中GGT顯著升高，結(jié)合臨床應(yīng)考慮原發(fā)性或轉(zhuǎn)移性肝膽系統(tǒng)腫瘤，如GGT升高不明顯，則可基本排除肝膽系統(tǒng)腫瘤，而應(yīng)考慮其他腹腔、胸腔臟器腫瘤且癌腫未發(fā)生肝膽系統(tǒng)轉(zhuǎn)移［14］。MDV可引起雞肝臟發(fā)生實(shí)變，發(fā)生肝臟腫瘤［1］，本試驗(yàn)攻毒組GGT含量35d時(shí)明顯升高，可能與臨床剖檢［15］肝腫大、睪丸腫大、法氏囊萎縮、胸腺萎縮甚至退化、心臟動(dòng)脈出現(xiàn)粥樣硬化有直接的關(guān)系，但在其他階段GGT含量偏低，其相關(guān)性還有待于進(jìn)一步研究證實(shí)。

因此，雞血清HDL與LDL含量變化可作為預(yù)測馬立克病及動(dòng)脈粥樣硬化的一項(xiàng)重要指標(biāo)，對HDL與LDL的檢測可及早預(yù)防馬立克病的發(fā)生與及時(shí)治療動(dòng)脈粥樣硬化。而馬立克病毒引起雞動(dòng)脈粥樣硬化也可做為研究人類該病的病理模型。

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