復(fù)方丙酸氯倍他索涂膜劑的質(zhì)控研究

龐露，陳志科，呂冠欣（.佛山市順德區(qū)慢性病防治中心藥劑科，廣東佛山58300；.佛山市順德區(qū)藥品檢驗(yàn)所，廣東佛山 58300）

復(fù)方丙酸氯倍他索（Clobetasol propionate，CP）涂膜劑是佛山市順德慢性病防治中心制劑部根據(jù)皮膚科臨床需要而開(kāi)發(fā)的復(fù)方制劑，主要以CP和水楊酸（Salicylic acid，SA）為主藥，以聚乙烯醇（Polyvinyl alcohol，PVA17-88）為成膜材料[1]，以丙二醇及薄荷油為促滲劑制成。CP為腎上腺皮質(zhì)激素類藥物，具有較強(qiáng)的抗炎、抗瘙癢和血管收縮作用，用于治療皮膚炎癥和瘙癢癥等[2]。SA為皮膚科常用的消毒防腐藥，價(jià)廉但實(shí)用性強(qiáng)，根據(jù)其使用濃度的不同有抑制細(xì)菌和真菌生長(zhǎng)、止癢、角質(zhì)溶解等作用[2]。本制劑涂于皮膚成膜后，產(chǎn)生水合作用促進(jìn)藥物透皮吸收，增強(qiáng)了止癢和角質(zhì)溶解作用，用于結(jié)節(jié)性癢疹、角質(zhì)增厚性皮膚病、皮炎及濕疹的外用療法，使用方便安全，治療效果良好。為了加強(qiáng)該制劑的質(zhì)量控劑，本研究以高效液相色譜法（HPLC）法和紫外分光光度法（UV）法分別測(cè)定CP及SA含量，并取得了滿意的結(jié)果?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料

UltiMate 3000 HPLC儀、UltiMate 3000 DAD檢測(cè)儀（德國(guó)戴安公司）；UV-1600型紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)（北京瑞利分析儀器公司）；TB125D型電子分析天平（北京賽多利斯公司）。

SA（山東新華制藥股份有限公司，批號(hào)：10091，純度：99.6%）；復(fù)方CP涂膜劑（自制，批號(hào)：20110420、20110421、20110422、20120626）；CP對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：100302-200001，純度：99.3%）；乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純，其他輔料均為藥用標(biāo)準(zhǔn)。

2 處方與制備

2.1 處方

CP 0.5 g，SA 50 g，薄荷油10 ml，PVA17-88 70 g，80%乙醇400 ml，丙二醇100 g，尼泊金乙酯1 g，純化水適量共制成1 000 g。

2.2 制備

取PVA17-88 70 g，加入約300 ml純化水及丙二醇充分浸泡，在水浴條件下加熱使其完全溶解；另稱取CP、SA用乙醇溶解，加入薄荷油攪勻，在攪拌條件下緩緩加入上述PVA17-88溶液中；最后加入尼泊金乙酯，邊加邊攪拌，待完全溶解，再加入純化水至足量，攪勻分裝即得。

3 質(zhì)量控制

3.1 性狀

本品為類白色半透明黏稠狀液體，微有薄荷特臭。在皮膚涂布干燥后能形成有一定撕裂強(qiáng)度的薄膜。

3.2 鑒別

3.2.1 SA的鑒別。在SA含量測(cè)定項(xiàng)下，在299 nm波長(zhǎng)處有最大吸收。

3.2.2 CP的鑒別。取本品少許，加乙醇1 ml混合，置水浴上加熱2 min，加硝酸（1→2）數(shù)滴，搖勻，加硝酸銀試液數(shù)滴，即顯白色沉淀。

3.3 檢查

3.3.1 pH值。取本品10 g，置于燒杯中，加蒸餾水100 ml溶解稀釋后，攪拌5 min，測(cè)定pH值應(yīng)在6.0～8.0之間。

3.3.2 其他。應(yīng)符合2010年版《中國(guó)藥典》（二部）[3]附錄涂膜劑項(xiàng)下有關(guān)各項(xiàng)規(guī)定。

3.4 含量測(cè)定

3.4.1 SA的含量測(cè)定。（1）供試品溶液的制備：精密稱取自制的復(fù)方CP涂膜劑0.4 g（約相當(dāng)于SA 20 mg）置于100 ml量瓶中，用50%乙醇溶解并稀釋至刻度，再以移液管量取稀釋液5 ml于50 ml量瓶中，以50%乙醇定容并作為供試品溶液。（2）對(duì)照品溶液的制備：精密稱取于105℃干燥至恒重的SA 20 mg，按上述步驟（1）操作，制得對(duì)照品溶液；另精密稱量除SA外按處方量配制的陰性樣品0.4 g，按“（1）”項(xiàng)下操作，制得陰性對(duì)照溶液。（3）測(cè)定波長(zhǎng)選擇：將上述供試品溶液、對(duì)照品溶液和陰性對(duì)照溶液以50%乙醇為空白，在250～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描。結(jié)果，SA及樣品溶液在299 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，而陰性樣品在此處幾乎無(wú)吸收，與文獻(xiàn)報(bào)道一致[4]。故可在299 nm波長(zhǎng)處直接測(cè)定SA的含量。（4）標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：精密稱取于105℃干燥至恒重的SA對(duì)照品100 mg，按“（1）”項(xiàng)下操作制得對(duì)照品的稀釋溶液，用移液管精密量取2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0 ml分別至25 ml量瓶中，用50%乙醇稀釋至刻度，配成濃度為8～28 μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液；以50%乙醇作為空白，在299 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。結(jié)果，SA濃度在8～28 μg/ml范圍內(nèi)與吸收度呈良好的線性關(guān)系。以吸光度（A）為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度（c）為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為：A＝0.024 8c+0.006 6（r＝0.999 8）。（5）回收率試驗(yàn)：精密稱取復(fù)方CP涂膜劑的SA陰性樣品0.4 g，置于100 ml量瓶中。分別加入處方量80%、100%、120%的水楊酸對(duì)照品，即0.016、0.020、0.024 g。用50%乙醇溶解稀釋至刻度，精密量取稀釋液5 ml至50 ml量瓶中，用50%乙醇稀釋至刻度；以50%乙醇作為空白參比，在299 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，按回歸方程計(jì)算回收率。（6）穩(wěn)定性試驗(yàn)：取上述供試品溶液，以50%乙醇作為空白參比，在299 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，于0、2、4、6、24 h分別測(cè)定SA的吸光度。按上述“（4）”項(xiàng)下回歸方程計(jì)算其含量。結(jié)果表明，SA在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定，RSD＝0.19%（n＝5）。（7）重復(fù)性試驗(yàn)：精密稱取與“（5）”項(xiàng)下制備同一批號(hào)的陰性樣品0.4 g（相當(dāng)于SA 0.02 g）共6份，依法操作，以50%乙醇為空白參比，測(cè)定吸光度，按上述回歸方程計(jì)算，測(cè)得平均含SA量為52 mg/g，RSD＝0.91%（n＝6）。（8）精密度試驗(yàn)：取上述對(duì)照品溶液，以50%乙醇作為空白參比，在299 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，按“（4）”項(xiàng)下回歸方程計(jì)算得其含量RSD＝0.17%（n＝6）。UV光譜見(jiàn)圖1，SA回收率試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。

圖1 UV光譜圖A.SA對(duì)照品；B.供試品；C.陰性樣品Fig1 UV spectrumA.SAcontrol；B.samples；C.negative samples

表1 SA回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）Tab1 Results of recovery tests of SA（n＝9）

3.4.2 CP的含量測(cè)定。（1）色譜條件：色譜柱為Agilent TC-C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-水（75∶25，V/V），流速：0.6 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：240 nm；進(jìn)樣量：10 μl；柱溫：35 ℃。（2）溶液的制備：精密稱定復(fù)方CP涂膜劑1 g（相當(dāng)于CP 0.5 mg），置于10 ml量瓶中，加80%乙醇溶解并稀釋至刻度，作為供試品溶液；取CP對(duì)照品適量，加80%乙醇溶解并稀釋制成每1 ml含CP 50 μg的溶液作為對(duì)照品溶液；另取除去CP外按處方工藝配制的陰性樣品1 g，置于10 ml量瓶中，加80%乙醇溶解并稀釋至刻度，作為陰性對(duì)照溶液。（3）專屬性試驗(yàn)：取上述供試品溶液、對(duì)照品溶液和陰性對(duì)照溶液，分別按“（1）”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜圖，可見(jiàn)陰性樣品對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。（4）標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：精密稱取CP對(duì)照品10.15 mg，置于50 ml量瓶中，加80%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密吸取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 ml，分別置于10 ml量瓶中，用80%乙醇稀釋成20.16、40.32、60.47、80.63、100.8 μg/ml的對(duì)照品溶液。精密進(jìn)樣10 μl，以CP質(zhì)量濃度（c，μg/ml）對(duì)峰面積（A）進(jìn)行回歸，得回歸方程A＝33 623c+14 911（r＝0.999 9）。表明CA在20.16～100.8 μg/ml范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。（5）精密度試驗(yàn)：取上述對(duì)照品溶液，精密進(jìn)樣10 μl，依法測(cè)定，以CP峰面積計(jì)算，RSD＝0.77%（n＝6）。（6）穩(wěn)定性試驗(yàn)：取上述供試品溶液，在0、2、4、6、12 h分別測(cè)定CP峰面積。結(jié)果表明，12 h內(nèi)CP基本穩(wěn)定，RSD＝0.80%（n＝5）。（7）重復(fù)性試驗(yàn)：取供試品（批號(hào)：20110421）6份依法測(cè)定其含量，測(cè)得平均含CP量為0.525 mg/g，RSD＝1.40%（n＝6）。（8）回收率測(cè)定：分別稱取陰性樣品1 g，按處方中CP量的80%、100%、120%分別精密加入CP對(duì)照品溶液，依法測(cè)定并計(jì)算回收率。高效液相色譜見(jiàn)圖2，CP加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

3.4.3 樣品測(cè)定。取涂膜劑供試品，分別按上述SA和CP的含量測(cè)定方法測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表3。

4 討論

涂膜劑為復(fù)方制劑，用中和滴定法測(cè)定SA含量，干擾較大；而SA在紫外光區(qū)有最大吸收，且在一定的范圍內(nèi)濃度與吸光度有良好的線性關(guān)系，適合醫(yī)院制劑快速分析[4]。

圖2 高效液相色譜圖A.CP對(duì)照品；B.供試品；C.陰性樣品；1.CPFig2 HPLC chromatogramsA.CP control；B.samples；C.negative samples；1.CP

表2 CP加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）Tab2 Results of recovery tests of CP（n＝9）

在CP含量測(cè)定溶劑的選擇中，分別用乙腈-水（70∶30，V/V）、無(wú)水乙醇試驗(yàn)[5]。由于處方中的輔料PVA17-88在大部分溶劑中易形成沉淀，從而影響其回收率，故本法應(yīng)用80%乙醇為溶劑，能完全溶解CP又不形成沉淀，既方便又準(zhǔn)確。采用流動(dòng)相乙腈-水不同體積比對(duì)空白基質(zhì)以及CP進(jìn)行色譜的考察與選擇，最后確定乙腈-水（75∶25，V/V）為佳，且隨著體積比的減少，CP的峰形會(huì)發(fā)生改變。取CP對(duì)照品溶液，在Ulti-Mate 3000 DAD檢測(cè)器上進(jìn)行光譜掃描，結(jié)果顯示在240 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，故選擇240 m波長(zhǎng)作為CP含量測(cè)定的檢測(cè)波長(zhǎng)。

表3 樣品含量測(cè)定結(jié)果（n＝4）Tab 3Results of content determination of samples（n＝4）

復(fù)方CP涂膜劑是醫(yī)院制劑室自己研究開(kāi)發(fā)的外用制劑，本試驗(yàn)建立了制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（處方工藝另文報(bào)道）。對(duì)CP及SA 2種主藥均進(jìn)行了含量測(cè)定，采用高效液相色譜法測(cè)定CP的含量；由于水楊酸在處方中含量較大，使用紫外分光光度法測(cè)定。經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證本法可滿足含量測(cè)定要求，適合醫(yī)院制劑的快速分析，制劑質(zhì)量可控。

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[2]陳新謙，金有豫，湯光.新編藥物學(xué)[M].16版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2007：630、835.

[3]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：二部[S].2010年版.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄18.

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