復(fù)方芪麻膠囊對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠心肌再灌注損傷的影響＊

吳玉杰 梁玉鑫 徐燕玲 胡秋霞 汪曉宇 秦建國 河北省秦皇島市第三醫(yī)院內(nèi)三科（秦皇島066000）

高血壓合并冠心病是臨床常見疾病，可引起急性冠脈供血不足，出現(xiàn)心絞痛甚至猝死［1］。臨床治療以溶栓和介入為主［2］，心肌缺血／再灌注損傷（ischemia－reperfusion，I－R）是影響療效的重要因素。細(xì)胞凋亡是再灌注中影響心功能恢復(fù)的主要機(jī)制。本研究通過對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠模型的研究，觀察復(fù)方芪麻膠囊對(duì)心肌缺血／再灌注損傷的保護(hù)作用，以探討心肌缺血／再灌注損傷防治的新思路。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 成年自發(fā)高血壓大鼠，SPF 級(jí)，體重200～220g，13～14周齡，雌雄兼用，由上海維通醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。合格證號(hào)：2012－004876。

1.2 儀器和試劑 依那普利片（批號(hào)20110201），復(fù)方芪麻膠囊由廣州中醫(yī)藥大學(xué)研制，主要成分黃芪、天麻、法半夏。乳酸脫氫酶（LDH）、ATP酶、超氧化物歧化酶（SOD）、一氧化氮（NO）含量試劑盒均來自深圳晶美公司。兔抗熱休克蛋白70購自美國sigma公司，其他試劑均為國產(chǎn)分析純。MaclabV／5s生理系統(tǒng)為德國MAC公司生產(chǎn)。

1.3 分組與處理 40只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為4組，每組10只。對(duì)照組、模型組、陽性對(duì)照組（依那普利陽性對(duì)照組）、實(shí)驗(yàn)組（復(fù)方芪麻膠囊組）。對(duì)照組動(dòng)物開胸，冠狀動(dòng)脈下穿線不結(jié)扎；模型組結(jié)扎建模；陽性對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組分別于造模前給予依那普利和復(fù)方芪麻膠囊灌胃，1d1次，連續(xù)3周。對(duì)照組和模型組給予相應(yīng)的等量生理鹽水。

1.4 心肌缺血／再灌注模型梗死面積和心功能指標(biāo)測定 大鼠背位固定，麻醉后切口氣管，插入氣管插管。以Evan染色法進(jìn)行梗死面積估計(jì)。MaclabV／5s生理系統(tǒng)記錄心電圖，獲得左室發(fā)展壓（LVDP）、左室舒張末期壓（LVEDP）、左室最大上升速率（＋DP／dtmax）和最大舒張速率（－DP／dtmax）。

1.5 生化指標(biāo)測定 取心肌組織加入生理鹽水進(jìn)行組織勻漿，比色法測定心肌LDH、MDA 活性、硝酸還原酶測定NO活性、鄰苯三酚自氧化法測定SOD 活性，以反應(yīng)生成的無機(jī)磷（Pi）含量反應(yīng)ATP酶活性。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所獲數(shù)據(jù)經(jīng)檢查核實(shí)后，由兩名統(tǒng)計(jì)分析人員以雙錄入方式錄入到EpiData軟件中進(jìn)行比對(duì)，核查無誤后導(dǎo)入SPSS19.0軟件中，計(jì)量資料以（±s）描述，計(jì)數(shù)資料以實(shí)際發(fā)生數(shù)進(jìn)行描述，組間比較資料正態(tài)分布時(shí)采用方差分析，并以SNK 法進(jìn)行兩兩比較，不服從正態(tài)分布時(shí)以秩和檢驗(yàn)進(jìn)行比較，以P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 4組大鼠梗死區(qū)面積比較 4 組大鼠梗死面積比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），模型組梗死面積占總面積的49.27%，高于陽性對(duì)照組（38.24%）和實(shí)驗(yàn)組（27.36%）（P＜0.05），陽性對(duì)照組高于實(shí)驗(yàn)組（P＜0.05）。具體見表1。

表1 4組大鼠梗死區(qū)面積比較（±s）

表1 4組大鼠梗死區(qū)面積比較（±s）

注：與對(duì)照組相比，△P＜0.05，▲P＜0.01；與模型組相比，◇P＜0.05，◆P＜0.01；與陽性對(duì)照組相比，□P＜0.05，■P＜0.01

組 別梗死面積（%）F P對(duì)照組0 26.389 0.000模型組49.27±9.65▲陽性對(duì)照組38.24±8.79▲◆實(shí)驗(yàn)組27.36±9.56▲◆■

2.2 4組復(fù)灌期末心功能比較 復(fù)灌期末，模型組和陽性對(duì)照組LVDP、LVEDP、＋DP／dtmax和－DP／dtmax與對(duì)照組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；實(shí)驗(yàn)組LVDP、LVEDP 與對(duì)照相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；陽性對(duì)照組LVDP、＋DP／dtmax和－DP／dtmax與對(duì)照組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；實(shí)驗(yàn)組LVEDP、＋DP／dtmax和－DP／dtmax與對(duì)照組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。具體見表2。

表2 4組復(fù)灌期末心功能比較（±s）

表2 4組復(fù)灌期末心功能比較（±s）

注：與對(duì)照組相比，△P＜0.05，▲P＜0.01；與模型組相比，◇P＜0.05，◆P＜0.01；與陽性對(duì)照組相比，□P＜0.05，■P＜0.01

組 別LVDP（%）LVEDP（%）＋DP／dtmax（%）＋DP／dtmax（%）20±11 1103±356 21±11 26±13模型組66±18▲ 741±125▲ 59±26▲66±32▲陽性對(duì)照組 38±21▲◆ 720±154▲ 44±23▲◇ 41±23▲◆實(shí)驗(yàn)組33±12▲◆892±102◆■ 20±12◆■ 25±18對(duì)照組◆■

2.3 4 組生化指標(biāo)比較 模型組與對(duì)照組LDH、SOD、MDA 和NO 差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；對(duì)LDH，陽性對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組與模型組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；對(duì)SOD，陽性對(duì)照組與對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），陽性對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組與模型組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），實(shí)驗(yàn)組與陽性對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；對(duì)MDA，陽性對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；對(duì)NO，陽性對(duì)照組與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），陽性對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；陽性對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組在LDH、MDA 和NO 上差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。具體見表3。

表3 4組生化指標(biāo)比較（±s）

表3 4組生化指標(biāo)比較（±s）

注：與對(duì)照組相比，△P＜0.05，▲P＜0.01；與模型組相比，◇P＜0.05，◆P＜0.01；與陽性對(duì)照組相比，□P＜0.05，■P＜0.01

組 別LDH（Ku／g）SOD（Ku／g）MDA（mmol／g）NO（μmol／g）6.5±1.6 189±45 8.1±3.6 62.9±14.2模型組16.2±3.5▲ 125±23▲ 14.2±6.8▲ 36.4±12.1▲陽性對(duì)照組 6.6±2.5◆ 152±41▲◆ 8.4±3.2◆ 57.3±12.5▲◆實(shí)驗(yàn)組6.8±4.2◆ 174±32◆□ 8.2±1.5◆ 60.2±14.6對(duì)照組◆

3 討 論

高血壓患者易出現(xiàn)冠脈舒張功能障礙，心肌發(fā)生纖維化，比正常心肌更易出現(xiàn)缺血／再灌注損傷。臨床用藥證實(shí)，西藥雖然能夠降低血壓，但其作用位點(diǎn)單一，服用后毒副作用大［3，4］。隨著中藥應(yīng)用的推廣，復(fù)發(fā)芪麻膠囊在高血壓治療中的作用越來越受到人們重視［5］。

本研究發(fā)現(xiàn)，復(fù)發(fā)芪麻膠囊預(yù)防用藥能夠有效縮小心肌梗死區(qū)面積，其功效甚至強(qiáng)于依托普利；對(duì)心功能比較中可以看到，復(fù)發(fā)芪麻膠囊治療組在LVDP、＋DP／dtmax和－DP／dtmax三個(gè)方面對(duì)心功能起到保護(hù)作用，說明復(fù)發(fā)芪麻膠囊能夠提高心臟收縮－舒張，使心臟血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)得以恢復(fù)，能夠保護(hù)缺血受損的心肌，減少再灌注損傷。傳統(tǒng)中醫(yī)也認(rèn)為，方中黃芪健脾補(bǔ)腎，天麻理氣活血，疏通經(jīng)絡(luò)；法半夏祛痰化濕，清痰去火［6］，諸藥合用可奏清痰祛濕、活血健脾之功［7］。

缺血再灌注損傷的臨床表現(xiàn)有心肌酶漏出、鈣超載和氧自由基增多等［8，9］。復(fù)發(fā)芪麻膠囊應(yīng)用可以減輕再灌注損傷，推測其原因可能是藥物應(yīng)用觸發(fā)體內(nèi)某些受體內(nèi)源性激動(dòng)劑，從而與受體結(jié)合，引發(fā)心肌細(xì)胞級(jí)聯(lián)反應(yīng)［10］。本研究結(jié)果顯示，發(fā)芪麻膠囊可以減少損傷心肌LDH 漏出，使心肌ATP酶活性增加，改善心肌細(xì)胞代謝障礙，增加NO 濃度，減輕心肌細(xì)胞鈣超載，改善能量代謝，使受損心肌釋放內(nèi)源性保護(hù)物質(zhì)，減輕缺血／再灌注損傷作用。

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