逍遙散及其配伍組方對(duì)阿爾茨海默病小鼠學(xué)習(xí)記憶的影響

王虎平 吳紅彥

(甘肅中醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)課部 甘肅省中藥藥理與毒理學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，甘肅 蘭州 730000)

阿爾茨海默病(AD)已成為嚴(yán)重威脅老年人生活質(zhì)量甚至生命健康的疾病之一?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)其發(fā)病機(jī)制認(rèn)識(shí)不清，對(duì)癥性的治療根本不能滿足臨床的需求，于是，研究的方向轉(zhuǎn)向了中醫(yī)藥。本研究基于從肝論治AD，以調(diào)肝名方逍遙散干預(yù)氫溴酸東莨菪堿所致AD模型小鼠，探討逍遙散防治AD的作用及其機(jī)制，闡釋其疏肝、養(yǎng)血、健脾相結(jié)合的配伍機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 主要材料 Y型水迷宮由甘肅中醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心自制;逍遙散組成生藥購(gòu)于甘肅中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院;氫溴酸東莨菪堿注射液由上海禾豐制藥有限公司提供，批號(hào):100101;超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒、丙二醛(MDA)試劑盒、乙酰膽堿酯酶(AchE)試劑盒、膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(ChAT)試劑盒、單胺氧化酶(MAO)試劑盒及考馬斯亮藍(lán)蛋白測(cè)試盒均為南京建成生物化學(xué)試劑有限公司提供，批號(hào):20100522;SPF級(jí)KM小鼠60只，體重(20±2)g，雌雄各半，由甘肅中醫(yī)學(xué)院科研實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào):SCXK(甘)2004-0006-0000994。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物分組及給藥 KM小鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、逍遙散全方組、疏肝養(yǎng)血組、疏肝健脾組、健脾養(yǎng)血組，每組10只?？瞻捉M與模型組小鼠每天灌胃生理鹽水0.2 ml/10 g，逍遙散全方組、疏肝養(yǎng)血組、疏肝健脾組、健脾養(yǎng)血組小鼠每天灌胃各組對(duì)應(yīng)藥物水煎液0.2 ml/10 g。逍遙散方中各藥的劑量均按照2005版《中華人民共和國(guó)藥典》中逍遙丸劑量換算得到〔1〕，逍遙散全方組(柴胡、當(dāng)歸、白芍、茯苓、白術(shù)、煨姜、薄荷、甘草)、疏肝養(yǎng)血組(柴胡、當(dāng)歸、白芍、薄荷)、疏肝健脾組(柴胡、茯苓、白術(shù)、煨姜、甘草、薄荷)、健脾養(yǎng)血組(當(dāng)歸、白芍、茯苓、白術(shù)、煨姜、甘草)小鼠每天灌胃生藥量分別為 2.485、1.136、1.775、2.059 g/kg。連續(xù)灌胃給藥10 d。

1.2.2 模型復(fù)制 給藥第6、8、10天，除空白組小鼠于灌胃1 h后腹腔注射生理鹽水0.2 ml·10 g－1外，其余各組小鼠分別于灌胃1 h后腹腔注射氫溴酸東莨菪堿0.02 mg·10 g－1復(fù)制AD模型。

1.2.3 Y型水迷宮實(shí)驗(yàn) 給藥第6、8天，各組小鼠分別于腹腔注射20 min后使用甘肅中醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心自制Y型水迷宮進(jìn)行學(xué)習(xí)能力訓(xùn)練。給藥第10天，各組小鼠分別于腹腔注射20 min后進(jìn)行記憶能力測(cè)試。水迷宮實(shí)驗(yàn)中，小鼠從入水臂直接游至安全臂?？颗_(tái)為正確，進(jìn)入另一臂則為錯(cuò)誤。學(xué)習(xí)能力以達(dá)到連續(xù)9次正確所需的次數(shù)為指標(biāo)，超過(guò)30次則記為30，每次達(dá)到安全臺(tái)的時(shí)間為潛伏時(shí)間;記憶能力以15次中正確的次數(shù)為指標(biāo)，并記錄每次的潛伏時(shí)間〔2〕。

1.2.4 腦組織勻漿SOD、MDA、AchE、ChAT及MAO活性的測(cè)定 行為學(xué)指標(biāo)測(cè)試結(jié)束后，處死動(dòng)物，迅速取出腦組織，以生理鹽水制成10%的腦組織勻漿，用低溫離心機(jī)3 000 r/min離心15 min，吸取上清液，按試劑盒要求測(cè)定小鼠腦組織勻漿SOD、MDA、AchE、ChAT 及 MAO 活性。

2 結(jié)果

2.1 逍遙散及其配伍組方對(duì)AD模型小鼠學(xué)習(xí)能力及學(xué)習(xí)潛伏時(shí)間的影響 與空白組相比，模型組小鼠學(xué)習(xí)能力低下、潛伏時(shí)間較長(zhǎng)，有顯著性差異(P＜0.01)。與模型組相比，逍遙散全方組及各配伍組方組均能提高小鼠學(xué)習(xí)能力、降低其潛伏時(shí)間，有顯著性差異(P＜0.01或P＜0.05);但以全方組最為明顯，與各配伍組方組相比，有顯著性差異(P＜0.05)。見表1。

2.2 逍遙散及其配伍組方對(duì)AD模型小鼠記憶能力及記憶潛伏時(shí)間的影響 與空白組相比，模型組記憶能力低下、潛伏時(shí)間較長(zhǎng)，有非常顯著性差異(P＜0.01)。與模型組相比，逍遙散全方組及各配伍組方組均能提高小鼠記憶能力、降低潛伏時(shí)間，有顯著性差異(P＜0.01或P＜0.05);但以全方組最為明顯，與各配伍組方組相比，有顯著性差異(P＜0.05)。見表2。

表1 逍遙散及其配伍組方對(duì)AD模型小鼠學(xué)習(xí)能力及學(xué)習(xí)潛伏時(shí)間的影響，n=10)

表1 逍遙散及其配伍組方對(duì)AD模型小鼠學(xué)習(xí)能力及學(xué)習(xí)潛伏時(shí)間的影響，n=10)

與模型組相比:1)P＜0.05，2)P＜0.01;與逍遙散全方組相比:3)P＜0.05，表2～4同

?

表2 逍遙散及各配伍組方對(duì)AD模型小鼠記憶能力及記憶潛伏時(shí)間的影響n=10)

表2 逍遙散及各配伍組方對(duì)AD模型小鼠記憶能力及記憶潛伏時(shí)間的影響n=10)

?

2.3 逍遙散及其配伍組方對(duì)AD模型小鼠腦組織勻漿SOD、MDA活性的影響 與空白組相比，模型組小鼠腦組織SOD活性增高、MDA活性降低(P＜0.01)。與模型組相比，逍遙散全方組及各配伍組方組均能提高小鼠腦組織SOD活性、降低MDA活性(P＜0.01或P＜0.05);但以全方組最為明顯，與各配伍組方組相比，有顯著性差異(P＜0.05)。見表3。

2.4 逍遙散及其配伍組方對(duì)AD模型小鼠腦組織 AchE、ChAT、MAO活性的影響 與空白組相比，模型組小鼠腦組織AchE活性增高、ChAT活性降低(P＜0.01)。與模型組相比，逍遙散全方組及各配伍組均能提高小鼠腦組織SOD活性、降低MDA活性(P＜0.01或P＜0.05);但以全方組最明顯，與各配伍組相比差異顯著(P＜0.05)。見表4。

表3 逍遙散及各配伍組方對(duì)AD模型小鼠腦組織勻漿SOD、MDA活性的影響s，n=10)

表3 逍遙散及各配伍組方對(duì)AD模型小鼠腦組織勻漿SOD、MDA活性的影響s，n=10)

?

表4 逍遙散及各配伍組方對(duì)AD模型小鼠腦組織勻漿AchE、ChAT、MAO活性的影響，n=10)

表4 逍遙散及各配伍組方對(duì)AD模型小鼠腦組織勻漿AchE、ChAT、MAO活性的影響，n=10)

?

3 討論

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，AD的發(fā)病可能與基因突變、免疫功能紊亂、神經(jīng)遞質(zhì)改變、神經(jīng)生長(zhǎng)營(yíng)養(yǎng)因子缺失等諸多因素有關(guān)，相應(yīng)的治療多為膽堿酯酶抑制劑、抗氧化劑、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子、興奮性氨基酸等對(duì)癥給藥，根本不能滿足患者的臨床需求。中醫(yī)藥在AD的防治中取得了一定的成效。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，AD主要在于腎、心、脾三臟功能的失調(diào)，總屬本虛標(biāo)實(shí)，虛責(zé)之于年老體弱、五臟虛損、腦失所養(yǎng);實(shí)責(zé)之于氣滯血瘀、痰濁內(nèi)阻、蒙蔽腦竅，多以補(bǔ)益心腎，填精益髓，散血化痰，開竅醒神為治。

本課題組基于中醫(yī)基本理論和現(xiàn)代藥理研究，認(rèn)為AD與肝功能的失調(diào)密切相關(guān)。經(jīng)云:“肝者，將軍之官，謀慮出焉”，“肝者，罷極之本，魂之居也”。肝主疏泄，暢情志，藏陰血，司筋脈，為神魂之居，行為之主，與AD精神與行為兩方面的失常關(guān)系甚密。據(jù)此，我們提出了從肝論治AD的假說(shuō)，并用調(diào)肝名方逍遙散系列開展了相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究，取得了良好效果〔3～5〕，為AD的從肝論治及其逍遙散的防治研究奠定了基礎(chǔ)。

本研究亦表明，逍遙散及其配伍組方皆能較好的改善AD模型小鼠學(xué)習(xí)記憶、抗氧化及中樞神經(jīng)遞質(zhì)活性，對(duì)AD有較好的防治作用，更加確立了AD從肝論治的正確性及“調(diào)肝”治法的有效性;各組指標(biāo)皆顯示逍遙散全方組明顯優(yōu)于其他配伍組方組，充分體現(xiàn)了逍遙散中疏肝、養(yǎng)血、健脾三者結(jié)合的配伍結(jié)構(gòu)與氣血同調(diào)，體用并治，補(bǔ)瀉兼施的協(xié)同功用對(duì)防治AD的有效性及科學(xué)性，為AD提供了新的論治方法和組方思路。至于逍遙散防治AD的深層機(jī)理有待進(jìn)一步探討。

1 中華人民共和國(guó)藥典2005年版〔M〕.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:564.

2 陳 勤.抗衰老研究實(shí)驗(yàn)方法學(xué)〔M〕.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，1996:94.

3 吳紅彥，王虎平.逍遙散及其拆方對(duì)癡呆模型小鼠學(xué)習(xí)記憶能力及抗氧化能力的影響〔J〕.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2009;15(10):102-4.

4 吳紅彥，王虎平.以肝脾論治老年性癡呆及逍遙散對(duì)老年癡呆模型小鼠學(xué)習(xí)記憶能力、中樞膽堿能神經(jīng)元活性的影響〔J〕.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2010;16(5):168-70.

5 吳紅彥，王虎平，王彩霞.黑逍遙散對(duì)老年性癡呆的防治作用及其機(jī)制研究〔J〕.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2011;22(4):912-3.