血管緊張素原基因M235T多態(tài)性和房顫傳統(tǒng)危險因素的交互作用

王 成 (新鄉(xiāng)市中心醫(yī)院心血管內(nèi)一科，河南 新鄉(xiāng) 453100)

研究表明遺傳因素參與房顫的發(fā)生及發(fā)展〔1，2〕。腎素-血管緊張素系統(tǒng)(RAS)是體內(nèi)重要的神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)，其過度激活可以引起心房重構(gòu)，最終導(dǎo)致房顫的發(fā)生。血管緊張素原(AGT)是RAS系統(tǒng)重要的組成部分，AGT基因M235T多態(tài)性是房顫發(fā)生的獨立危險因素〔3，4〕。近來國外有研究表明，M235T多態(tài)性與高血壓、高脂血癥共同導(dǎo)致了冠心病的發(fā)生〔5，6〕，但目前還沒有關(guān)于M235T多態(tài)性與房顫傳統(tǒng)危險因素是否協(xié)同導(dǎo)致房顫發(fā)生的相關(guān)研究。本研究針對中國漢族人群，探討M235T多態(tài)性是否與房顫傳統(tǒng)危險因素協(xié)同導(dǎo)致房顫的發(fā)生。

1 資料與方法

1.1 研究對象 慢性房顫組250例，男146例，女104例，年齡(54.53±6.58)歲，均為2010年5月至2012年5月在本院心內(nèi)科住院的患者。納入標準:①靜息心電圖、24 h動態(tài)心電圖均提示永久性房顫，并且不伴有其他心律失常;②體表心電圖、胸片、超聲心動圖、生化功能、心肌酶譜及冠狀動脈造影等排除冠心病〔7〕、擴張型心肌病、肥厚型心肌病、致心律失常型右室心肌病及心臟瓣膜病等器質(zhì)性心臟病〔8〕;③排除病態(tài)竇房結(jié)綜合征、長R-R間期、Ⅱ度或高度房室傳導(dǎo)阻滯等心律失常;④排除電解質(zhì)紊亂和代謝性疾病，如風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、糖尿病等。對照組200例，男122例，女78例，年齡(52.04±5.64)歲，為同期在我院體檢的健康體檢者，經(jīng)詢問病史、心電圖、血生化、心臟彩色多普勒超聲及心臟ECT等檢查排除房顫及其他心律失常，并且均符合上述排除標準。

1.2 AGT基因M235T多態(tài)性檢測 本實驗經(jīng)過醫(yī)院倫理委員會批準。病例組和對照組均空腹12 h后采集靜脈血4 ml，抽血前均簽署知情同意書。采用PCR-RFLP法檢測M235T多態(tài)性。PCR引物序列如下，引物1:5'-CGTTTGTGCAGGGCCTGGCTCTC-3';引物 2:5'-AGGGTGCTGTCCACACTGGACCC-3'。擴增條件如下:首先于90℃預(yù)變性3 min，然后94℃ 1 min，68℃1 min，72℃ 1 min，共35個循環(huán)，最后于 72℃延伸10 min。在20 μl反應(yīng)體系中分別加入 PCR 產(chǎn)物 7 μl和 ThtⅢ酶(10 U/μl，于65℃水浴消化4～6 h。PCR產(chǎn)物及酶切產(chǎn)物均使用瓊脂糖凝膠電泳檢測。AGT基因PCR產(chǎn)物為163 bp，該產(chǎn)物經(jīng)ThtⅢ酶切后產(chǎn)生不同的特異性片段，形成3種基因型:MM基因型(野生型)，因不含酶切位點不被切開，顯示l條163 bp的擴增片段;MT基因型(雜合子)，同時具有140 bp和163 bp兩條條帶;TT基因型(突變型)為1條新的140 bp的酶切片段。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析 計量資料采用t檢驗，計數(shù)資料采用χ2檢驗;用基因計數(shù)法計算病例組和對照組的基因型頻率，是否符合哈迪-溫伯格(H-W)平衡定律采用χ2檢驗;AGT基因M235T多態(tài)性與房顫關(guān)系采用非條件Logistic回歸分析，關(guān)聯(lián)程度用優(yōu)勢比(OR)及95%可信區(qū)間(CI)表示，采用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)處理;AGT基因多態(tài)性與房顫傳統(tǒng)風(fēng)險因子的關(guān)系采用叉生分析表法〔9〕分析。

2 結(jié)果

2.1 病例組及對照組臨床和生化特征比較 兩組年齡及性別分布無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。兩組BMI、高血壓、糖尿病及腦梗死病史比例、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇 (LDLC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

2.2 AGT基因多態(tài)性分析 對照組M235T基因型分布均符合H-W平衡定律(P＞0.05)。M235T病例組、對照組主要基因型均為TT，兩組差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，主要等位基因均為T，亦無明顯統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。見表2。

2.3 Logistic回歸分析 以房顫為應(yīng)變量，年齡、性別、BMI、TG、TC、HDL-C、LDL-C、TG、吸煙史、高血壓史、糖尿病史、腦梗死史為自變量。結(jié)果表明TG、高血壓、糖尿病及腦梗死史以及M235T多態(tài)性TT型為房顫發(fā)生的獨立危險因素。攜帶AGT基因M235T多態(tài)性的TT型患房顫的風(fēng)險增加(OR=2.02，95%CI=1.14～2.56)。

2.4 AGT基因多態(tài)性與傳統(tǒng)風(fēng)險因素的交互研究 將M235T多態(tài)性TT型攜帶者與傳統(tǒng)房顫風(fēng)險因素(TG、TC、HDL-C、LDL-C、TG、高血壓、糖尿病及腦梗死等)納入叉生分析軟件，結(jié)果表明M235T多態(tài)性TT型與患腦梗死或高血壓協(xié)同增加了患房顫的風(fēng)險。見表3。

表1 房顫組及對照組特征(s)

表1 房顫組及對照組特征(s)

指標 房顫組(n=250)對照組(n=200)P值54.53±6.58 52.04±5.64 0.34 BMI(kg/m2)23.08±4.53 19.87±3.56 0.56 TG(mmol/L)1.75±0.68 1.18±0.24 0.00 TC(mmol/L)4.95±1.22 3.98±1.58 0.00 HDL-C(mmol/L)1.16±0.36 1.76±0.32 0.00 LDL-C(mmol/L)2.87±0.68 2.31±0.52 0.05男性〔n(%)〕 120(48.0)108(54.0)0.52高血壓〔n(%)〕 58(23.2)20(10.0)0.00糖尿病〔n(%)〕 45(18.0)17(8.5)0.001)腦卒中〔n(%)〕 29(11.6)5(2.5)年齡(歲)0.38

表2 兩組M235T SNPS基因型及等位基因的分布〔n(%)〕

表3 M235T基因多態(tài)性與傳統(tǒng)風(fēng)險因素的交互作用

3 討論

房顫是最常見的持續(xù)性心律失常，國內(nèi)總發(fā)病率為0.4%，隨著年齡增長房顫的發(fā)生率逐漸增加，＞75歲發(fā)病率可達10%左右。其發(fā)生與近期心衰史、高血壓病史、≥75歲、糖尿病、腦卒中等危險因素相關(guān)。M235T多態(tài)性是AGT基因第二個外顯子的第704位的胸腺嘧啶核苷酸(T)變成了胞嘧啶核苷酸(C)，導(dǎo)致第235個密碼子編碼的甲硫氨酸(Met)變成了蘇氨酸(Thr)，因為第235個密碼子編碼的氨基酸不一致，形成了兩個等位基因:235M(野生型)和235T(變異型)，對人類而言構(gòu)成了3種基因型:純合子235MM、235TT和雜合子235MT。M235T多態(tài)性增加房顫風(fēng)險的機制未明，研究表明TT基因型攜帶者血清AGT水平升高，而AGT水平的升高又相應(yīng)引起血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)濃度的增加。AngⅡ通過成纖維細胞的AngⅡ受體Ⅰ(ATⅠ)介導(dǎo)，主要經(jīng)絲裂原活化蛋白激酶家族的細胞外信號調(diào)節(jié)激酶途徑刺激成纖維細胞的增殖，從而誘導(dǎo)其Ⅰ、Ⅲ型膠原mRNA表達及Ⅰ、Ⅲ型膠原合成及分泌增加，最終導(dǎo)致心房纖維化〔9，10〕。同時，AngⅡ水平增高，通過與AT1受體結(jié)合可激活MAPK系統(tǒng)，從而激活 MAPK家族的信號分子ERK，而ERK激活可使縫隙蛋白 S255，S279，S282多位點磷酸化，導(dǎo)致心肌縫隙連接蛋白(Cx)合成增加;升高的AngⅡ與AT1受體結(jié)合，經(jīng)與G蛋白耦聯(lián)，導(dǎo)致細胞內(nèi)Ca2+內(nèi)流增加，從而激活Ca2+依賴的蛋白酶Cal2 pains并破壞細胞亞微結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致溶酶體釋放，最后使Cx降解增加及含量降低〔11〕。這種合成-降解的失衡可能會引起Cx重構(gòu)，而心房纖維化和Cx重構(gòu)對房顫的發(fā)生及發(fā)展具有重要影響〔4〕。

近年來，基因-環(huán)境間交互作用對心血管疾病的影響逐漸成為研究熱點。波蘭的Niemiec等〔4〕研究納入255名高加索人(包括158名冠心病患者和97名無冠心病患者)，分析結(jié)果表明冠心病患者M235T的T等位基因與血膽固醇過多(TC≥5 mmol/L或LDL-C≥3 mmol/L)協(xié)同增加了患冠心病的危險。而M235T多態(tài)性與房顫危險因素的交互作用研究目前還未見相關(guān)報道。本文發(fā)現(xiàn)M235T與腦梗死、高血壓協(xié)同增加了患房顫的風(fēng)險，其機制可能是ATⅡ不僅能使小動脈平滑肌收縮及外周血管阻力增加，還能興奮交感神經(jīng)系統(tǒng)，使去甲腎上腺素分泌增加及血管收縮，最終促進高血壓及腦梗死的發(fā)生與發(fā)展，其機制還有待進一步研究。

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