甲砜霉素對(duì)肉雞睪丸組織結(jié)構(gòu)的影響

唐海蓉 陳仕均 劉興友 銀梅 王選年 潘耀謙 李敬璽

摘要：將152只4日齡雄性AA+肉雞隨機(jī)分為4組，每組38只，分別在飼料中添加0（對(duì)照組）、500（試驗(yàn)Ⅰ組）、1 000（試驗(yàn)Ⅱ組）、1 500 mg/kg（試驗(yàn)Ⅲ組）的甲砜霉素，自由采食，試驗(yàn)期2周，對(duì)睪丸進(jìn)行病理形態(tài)學(xué)觀察。2周后測(cè)量體重、睪丸重、睪丸臟器系數(shù)，并作睪丸石蠟切片測(cè)量曲精細(xì)管面積和觀察甲砜霉素對(duì)肉雞睪丸的病理組織學(xué)影響。結(jié)果表明，各試驗(yàn)組肉雞體重和曲精細(xì)管面積以及試驗(yàn)Ⅱ、Ⅲ組試驗(yàn)雞的睪丸重極顯著低于對(duì)照組（P<0.01），試驗(yàn)Ⅰ組試驗(yàn)雞的睪丸重和睪丸臟器系數(shù)極顯著大于對(duì)照組（P<0.01）；各試驗(yàn)組肉雞曲精細(xì)管出現(xiàn)不同程度的生精細(xì)胞數(shù)量減少，精原細(xì)胞和睪丸支持細(xì)胞發(fā)生水泡變性，甚至壞死，結(jié)締組織增生。結(jié)果表明，用甲砜霉素添加量500 mg/kg及以上的飼料持續(xù)飼喂肉雞，可對(duì)肉雞的睪丸造成損傷，并且這種損傷在一定范圍內(nèi)存在顯著的劑量效應(yīng)關(guān)系。

關(guān)鍵詞：肉雞；甲砜霉素；睪丸；組織結(jié)構(gòu)

中圖分類號(hào)：S852.3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2013）08-1880-03

甲砜霉素又名硫霉素，是氯霉素類的第二代廣譜抗菌藥，其對(duì)大腸桿菌、沙門氏菌、巴氏桿菌等都具有良好的抗菌作用[1-3]。因此，在中國(guó)廣泛使用。但在實(shí)際生產(chǎn)中，養(yǎng)殖戶違規(guī)濫用抗生素，不僅加劇了細(xì)菌對(duì)甲砜霉素的耐藥性，而且加劇了其在動(dòng)物機(jī)體內(nèi)的殘留量。國(guó)內(nèi)外研究表明，甲砜霉素具有一定毒副作用。目前，關(guān)于甲砜霉素對(duì)試驗(yàn)動(dòng)物小白鼠和大鼠危害的研究較多[4-6]，但對(duì)于經(jīng)濟(jì)食用動(dòng)物危害的研究較少，僅見(jiàn)于鯉魚[7]和肉雞[8，9]，且其研究主要涉及甲砜霉素對(duì)血液生化指標(biāo)、免疫器官的病理組織學(xué)，以及其在動(dòng)物性產(chǎn)品中的殘留及其檢測(cè)等[10，11]方面。而關(guān)于甲砜霉素對(duì)肉雞睪丸的影響鮮有報(bào)道。本試驗(yàn)通過(guò)研究不同水平的甲砜霉素對(duì)肉雞睪丸組織結(jié)構(gòu)的影響，旨在探討甲砜霉素中毒的機(jī)理以及為臨床合理利用甲砜霉素提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

甲砜霉素為湖南湘藥制藥有限公司生產(chǎn)，純度為99.7%，批號(hào)：20050212；Leica-RM2235型切片機(jī)（德國(guó)萊卡公司）； Axiostar plus數(shù)碼顯微鏡（德國(guó)Zeiss公司）。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物分組

試驗(yàn)于2010年在河南科技學(xué)院動(dòng)物科學(xué)學(xué)院實(shí)訓(xùn)中心進(jìn)行。將152只4日齡雄性AA+肉雞（購(gòu)自內(nèi)黃縣牛召鄉(xiāng)碾子頭村種雞場(chǎng)）稱重后隨機(jī)分為4組，每組38只，按甲砜霉素添加量分為0（對(duì)照組）、500（試驗(yàn)Ⅰ組）、1 000（試驗(yàn)Ⅱ組）、1 500 mg/kg （試驗(yàn)Ⅲ組）。自由采食與飲水，采用3層半重疊肉雞一次育成籠舍飼，飼養(yǎng)過(guò)程嚴(yán)格遵循《AA+肉雞飼養(yǎng)管理手冊(cè)》。

1.3 檢測(cè)指標(biāo)

肉雞飼養(yǎng)2周。每日觀察并記錄臨床癥狀，對(duì)發(fā)病死亡雞即時(shí)進(jìn)行剖檢。每周稱重1次，記錄各組平均體重。于受試驗(yàn)后2周從各組隨機(jī)抽取6只雞，分別稱體重和采血后，放血致死，剖檢并肉眼觀察睪丸的一般病變后稱重，根據(jù)臟器系數(shù)=臟器濕重/體重，計(jì)算其臟器系數(shù)。采取定期撲殺或采集死亡雞的睪丸，用10%中性甲醛固定，石蠟包埋，切片及H.E常規(guī)染色，在普通光學(xué)顯微鏡下觀察病理組織學(xué)變化。每張切片選取30個(gè)近圓形的曲精細(xì)管，由尼康NIS-Elements D圖像處理軟件測(cè)量曲精細(xì)管面積。

1.4 數(shù)據(jù)處理

所有數(shù)據(jù)采用SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)軟件統(tǒng)計(jì)。各組數(shù)據(jù)均以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，用單因子方差分析檢驗(yàn)各組的差異顯著性。

2 結(jié)果與分析

2.1 甲砜霉素對(duì)肉雞性狀及曲精細(xì)管面積的影響

由表1可以看出，不同劑量甲砜霉素均能抑制肉雞體重增長(zhǎng)，降低睪丸曲精細(xì)管面積；各試驗(yàn)組與對(duì)照組之間，試驗(yàn)Ⅰ組與試驗(yàn)Ⅱ、Ⅲ組之間差異極顯著。500 mg/kg的甲砜霉素對(duì)睪丸重量和睪丸臟器系數(shù)有促進(jìn)作用，顯著大于對(duì)照組；1 000 mg/kg和1 500 mg/kg的甲砜霉素對(duì)睪丸重量和睪丸臟器系數(shù)具有一定抑制作用，睪丸重量極顯著低于對(duì)照組，睪丸臟器系數(shù)與對(duì)照組之間差異不顯著，組間差異不顯著。

2.2 甲砜霉素對(duì)肉雞睪丸形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

由圖1可知，對(duì)照組曲精細(xì)管形成完整的管腔，曲精細(xì)管上皮由支持細(xì)胞、精原細(xì)胞和少量初級(jí)精母細(xì)胞構(gòu)成，上皮呈多層排列，部分細(xì)胞處于分裂狀態(tài)，支持細(xì)胞數(shù)量較多（圖1-A）。與對(duì)照組相比，試驗(yàn)Ⅲ組雞睪丸的曲精小管管壁完整，但小管直徑較小，曲精細(xì)管內(nèi)細(xì)胞多呈單層排列，且排列松散，生殖細(xì)胞數(shù)量較少，多為支持細(xì)胞、精原細(xì)胞、極少量的初級(jí)精母細(xì)胞；大部分生殖細(xì)胞呈現(xiàn)空泡變性，部分支持細(xì)胞核濃縮深染。曲精細(xì)管間結(jié)締組織大量增生（圖1-B）。試驗(yàn)Ⅱ組睪丸的大部分曲精細(xì)管管壁完整，但管腔直徑較小，生精細(xì)胞多為單層排列，數(shù)量極少，僅見(jiàn)少量的精原細(xì)胞，且部分精原細(xì)胞從基膜脫落到管腔內(nèi)，支持細(xì)胞多呈濃縮深染。間質(zhì)結(jié)締組織輕度增生（圖1-C）。試驗(yàn)Ⅰ組睪丸的曲精細(xì)管管壁完整，但管腔直徑較小，生精細(xì)胞排列為2或多層，部分支持細(xì)胞輕度空泡變性，局部可見(jiàn)核濃縮（圖1-D）。另外，各試驗(yàn)組均罕見(jiàn)核分裂相。

3 小結(jié)與討論

研究表明，甲砜霉素可影響動(dòng)物食欲，引起胃腸炎癥，阻礙動(dòng)物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)攝入、消化和吸收[6-9]。本試驗(yàn)中，各試驗(yàn)組肉雞的體重極顯著低于對(duì)照組，試驗(yàn)Ⅲ組顯著低于試驗(yàn)Ⅰ組，試驗(yàn)Ⅱ組極顯著低于試驗(yàn)Ⅰ組，試驗(yàn)Ⅱ、Ⅲ組間差異不顯著。結(jié)果表明，500 mg/kg及以上的甲砜霉素劑量長(zhǎng)時(shí)間持續(xù)混飼，將顯著降低肉雞的生長(zhǎng)性能，延緩體重增長(zhǎng)，且在一定范圍內(nèi)存在劑量效應(yīng)關(guān)系。這與Maita等[6]關(guān)于甲砜霉素對(duì)大鼠和筆者關(guān)于甲砜霉素對(duì)鯉魚[7]的體質(zhì)量影響的報(bào)道一致。

睪丸臟器系數(shù)在一定程度上可反映睪丸的功能情況。當(dāng)睪丸功能受損時(shí)，睪丸通過(guò)自身組織學(xué)形態(tài)的改變進(jìn)行功能代償，以滿足機(jī)體的需要。本試驗(yàn)中， 試驗(yàn)Ⅰ組的睪丸明顯腫脹，臟器系數(shù)顯著大于對(duì)照組，表明日糧中500 mg/kg的甲砜霉素添加量可造成睪丸功能的下降。而試驗(yàn)Ⅱ、Ⅲ組劑量較大，導(dǎo)致睪丸重量與體重下降。病理組織學(xué)檢查結(jié)果也表明， 試驗(yàn)Ⅱ、Ⅲ組試驗(yàn)雞的睪丸曲精細(xì)管面積顯著減小，生精細(xì)胞數(shù)量減少，精原細(xì)胞和睪丸支持細(xì)胞發(fā)生水皰變性，甚至壞死，結(jié)締組織增生，試驗(yàn)Ⅰ組病變程度較輕。

綜上所述，營(yíng)養(yǎng)缺乏可能是引起試驗(yàn)組肉雞體重降低、睪丸重量改變、組織結(jié)構(gòu)損傷的原因之一。同時(shí)，甲砜霉素可顯著損傷腎臟，使血清蛋白隨尿液流失；顯著損傷肝臟，使肝臟合成蛋白質(zhì)減少，從而導(dǎo)致試驗(yàn)組肉雞出現(xiàn)水腫或細(xì)胞水皰變性[8]。另外，由于甲砜霉素能阻斷造血干細(xì)胞的線粒體合成，導(dǎo)致造血干細(xì)胞的增生分裂停止，引起細(xì)胞的呼吸鏈電子傳遞障礙[9]，使ATP合成減少，從而使精原細(xì)胞和睪丸支持細(xì)胞發(fā)生水皰變性，甚至壞死。由于精原細(xì)胞具有增值分化為精母細(xì)胞的潛能；睪丸支持細(xì)胞具有營(yíng)養(yǎng)生精細(xì)胞，合成雄激素蛋白、促進(jìn)精子發(fā)生等功能，且同神經(jīng)細(xì)胞一樣沒(méi)有增殖分裂的潛力，因此一旦受損甚至死亡，所有生殖細(xì)胞都會(huì)死亡，因此上述兩種細(xì)胞的變性死亡必然導(dǎo)致精原細(xì)胞分裂受阻，曲精小管中生精細(xì)胞的數(shù)量減少，曲精小管變小，結(jié)締組織增生。本試驗(yàn)結(jié)果與Maita等[6]關(guān)于甲砜霉素能影響生精細(xì)胞發(fā)育的研究結(jié)果一致，但與其關(guān)于睪丸支持細(xì)胞未受損傷的結(jié)果相反，可能與試驗(yàn)周期和藥物劑量大小不同有一定關(guān)系。

本試驗(yàn)中，甲砜霉素對(duì)肉雞睪丸的影響與其對(duì)肉雞生產(chǎn)性能的影響基本一致。有報(bào)道顯示，血清中雄激素的水平與肉雞的生長(zhǎng)發(fā)育有密切聯(lián)系[12]，甲砜霉素是否對(duì)睪酮的分泌有顯著的影響還需進(jìn)一步試驗(yàn)來(lái)證實(shí)。

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