NADPH氧化酶p22phox亞基基因多態(tài)性與高血壓左心室肥厚的相關(guān)性

池小鉅, 呂 卓, 岑 孌

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NADPH氧化酶p22phox亞基基因多態(tài)性與高血壓左心室肥厚的相關(guān)性

池小鉅1*, 呂 卓2, 岑 孌1

（1廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院腫瘤內(nèi)科, 南寧 530021;2廣西江濱醫(yī)院內(nèi)科, 南寧 530021）

探討中國漢族人群中NADPH氧化酶p22phox亞基C242T基因多態(tài)性與高血壓左心室肥厚（LVH）的相關(guān)性。連續(xù)收入初診漢族原發(fā)性高血壓患者286例，超聲心動(dòng)圖評估并計(jì)算患者左心室質(zhì)量指數(shù)，將患者分為單純高血壓和高血壓合并LVH，并記錄體質(zhì)量指數(shù)、血壓、血糖和血脂等。同時(shí)，采用限制性片段長度多態(tài)性鑒定p22phox亞基C242T基因型。全部患者中均未檢出TT基因型，而高血壓合并LVH的患者中CT基因型（＝0.002）和T等位基因出現(xiàn)的頻率（＝0.005）均顯著高于單純高血壓患者。Logistic回歸分析顯示p22phox亞基C242T多態(tài)性與性別、收縮壓同為高血壓合并LVH的獨(dú)立影響因素，存在Ｔ突變的高血壓患者合并LVH的風(fēng)險(xiǎn)降低63%（＝0.007）。CYBA C242T多態(tài)性與中國漢族高血壓患者LVH相關(guān)，T等位基因可能是LVH的保護(hù)因素。

左心室肥厚; NADPH氧化酶; 基因多態(tài)性

左心室肥厚（left ventricular hypertrophy，LVH）是心腦血管事件的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，高血壓患者一旦合并LVH則心力衰竭的風(fēng)險(xiǎn)明顯增高[1]。研究發(fā)現(xiàn)，氧化應(yīng)激在高血壓并發(fā)LVH的病理生理過程中有重要作用，而NADPH氧化酶是血管壁氧自由基的主要來源，因此其在LVH的發(fā)生中具有重要的意義[2]。P22phox是NADPH氧化酶的一個(gè)重要亞單位，研究證實(shí)P22phox的編碼基因是CYBA，其第242基因C→T突變可導(dǎo)致NADPH氧化酶活性改變，從而影響血管壁自由基生成，導(dǎo)致心血管風(fēng)險(xiǎn)的改變[3]。本研究通過限制性片段長度多態(tài)性（restriction fragment length polymorphism，RFLP）方法探討CYBA C242T基因多態(tài)性與高血壓患者LVH的相關(guān)性。

1 對象與方法

1.1 對象

連續(xù)收入2008年1月至2011年12月在武警廣東省總隊(duì)醫(yī)院心血管內(nèi)科門診就診的初診漢族原發(fā)性高血壓患者。高血壓診斷標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)《中國高血壓防治指南》2005年修訂版，即坐位收縮壓（systolic blood pressure，SBP）≥140mmHg（1mmHg＝0.133kPa）和（或）舒張壓（diastolic blood pressure，DBP）≥90mmHg。排除具有如下任一情況患者：繼發(fā)性高血壓、糖尿病、冠心病、瓣膜性心臟病、先天性心臟病和其他器質(zhì)性心臟病、惡性腫瘤、免疫系統(tǒng)疾病、以及肝腎功能異常。最終入選初診漢族原發(fā)性高血壓286例，年齡（60.42±10.64）歲，其中男性和女性各143例。其后，根據(jù)超聲心動(dòng)圖結(jié)果將其分為單純高血壓組和高血壓合并LVH組。

1.2 方法

1.2.1 臨床資料采集 記錄受試者年齡、性別、血壓、身高、體質(zhì)量和實(shí)驗(yàn)室檢查數(shù)據(jù)，包括空腹血糖（fasting blood glucose，F(xiàn)BG）、甘油三酯（triglycerides，TG）、總膽固醇（total cholesterol，TC）等。計(jì)算體質(zhì)量指數(shù)（BMI）＝體質(zhì)量（kg）/[身高（m）]2。

1.2.2 超聲心動(dòng)圖檢查 采用GEVivid7彩色多普勒超聲診斷儀（美國），探頭頻率1.7～3.4MHz測定左心室舒張末期內(nèi)徑（left ventricular end-diastolic dimension，LVEDD）、舒張期室間隔厚度（interventricular septal thickness，IVST）、舒張期左心室后壁厚度（left ventricular posterior wall thickness，LVPWT）。根據(jù)Devereux公式計(jì)算左心室質(zhì)量（left ventricular mass，LVM）和左心室質(zhì)量指數(shù)（left ventricular mass index，LVMI）。LVH定義為：男性LVMI＞125g/m2，女性LVMI＞120g/m2。

1.2.3 DNA提取和基因型檢測 采取外周血提取基因組DNA。應(yīng)用RFLP方法檢測CYBA C242T多態(tài)性。PCR正義引物：5￠-TGCTTGTGGGTAAACCAAGGCCGGTG-3￠；反義引物：5￠-AACACTGAGGTAAGTGGGGGTGGCTCCTGT-3￠（北京寶杰羅生物科技有限公司合成）。PCR產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳鑒定。采用Ⅰ酶切，酶切產(chǎn)物點(diǎn)樣于2%的瓊脂糖凝膠，100V電泳90min，鑒定基因型。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSSl7.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料計(jì)算百分率并采用2檢驗(yàn)進(jìn)行比較。等位基因和基因型頻率采用直接計(jì)數(shù)法統(tǒng)計(jì)，2檢驗(yàn)評估全部患者隊(duì)列和兩組患者隊(duì)列中C、T等位基因的Hardy-Weinberg平衡偏離度。多因素非條件logistic回歸分析評估CYBA C242T基因突變和其他危險(xiǎn)因素與LVH相關(guān)性。雙側(cè)＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 一般臨床資料比較

高血壓合并LVH組SBP顯著高于單純高血壓組[（159.57±15.12）（155.75±13.73）mmHg，＝0.031]，DBP兩組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＞0.05）。同時(shí)，兩組的年齡、性別組成、病程、BMI、FBG和血脂差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＞0.05；表1）。

表1 兩組一般臨床資料比較

LVH: 左心室肥厚; BMI: 體質(zhì)量指數(shù); SBP: 收縮壓; DBP: 舒張壓; FBG: 空腹血糖; TC: 總膽固醇; TG: 甘油三酯。1mmHg＝0.133kPa。與單純高血壓組比較,*＜0.05

2.2 基因型和等位基因分布頻率比較

全部患者中檢出CC基因型215例、CT基因型71例，未檢出TT基因型。全部患者和兩組患者經(jīng)Hardy-Weinberg平衡定律檢驗(yàn)均為遺傳平衡群體。高血壓合并LVH組與單純高血壓組比較，基因型（＝0.002）和等位基因（＝0.005）分布在兩組間差異均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。單純高血壓組CT基因型（31.0%15.2%）和T等位基因攜帶率（15.5%7.6%）均顯著高于高血壓合并LVH組（＜0.01；表2）。

2.3 LVH危險(xiǎn)因素的logistic回歸分析

將全部研究對象視為一個(gè)隊(duì)列人群，以是否合并LVH為自變量，年齡、性別、BMI、SBP、DBP、FBG、TC、TG以及是否存在C242T突變?yōu)橐蜃兞浚M(jìn)行l(wèi)ogistic回歸。表3結(jié)果顯示，女性、SBP是LVH的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，而T等位基因突變是LVH的保護(hù)因素，存在T突變的高血壓患者合并LVH的風(fēng)險(xiǎn)降低63%。

表2 兩組間基因型和等位基因頻率分布

LVH: 左心室肥厚。與單純高血壓組比較,**＜0.01

表3 LVH危險(xiǎn)因素的logistic回歸分析

LVH: 左心室肥厚; SBP: 收壓縮

3 討 論

氧化應(yīng)激可導(dǎo)致內(nèi)皮功能紊亂、受損，是導(dǎo)致高血壓及其靶器官損傷發(fā)生和發(fā)展的不可忽視的重要因素。NADPH氧化酶是ROS的主要來源，因此NADPH氧化酶在高血壓炎癥進(jìn)程中具有重要的意義[2]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示，NADPH氧化酶的活化在壓力負(fù)荷誘導(dǎo)的LVH的發(fā)生中具有重要作用[3]。NADPH氧化酶存在于細(xì)胞膜上，主要催化O2從NADPH得到一個(gè)電子生成超氧陰離子O2-。NADPH氧化酶主要由5個(gè)亞基構(gòu)成，當(dāng)細(xì)胞處于靜止期時(shí)，p40phox、p47phox和p67phox亞基形式復(fù)合體存在于細(xì)胞液中；p22phox和gp9lphox于細(xì)胞膜上相互結(jié)合形成一個(gè)異二聚體，即細(xì)胞色素b558。當(dāng)細(xì)胞受到刺激被激活后，p47phox磷酸化，帶動(dòng)復(fù)合體由胞液向細(xì)胞膜遷移，與胞膜上的細(xì)胞色素b558結(jié)合，形成有活性的NADPH氧化酶復(fù)合體，產(chǎn)生活性氧。該酶主要存在于吞噬細(xì)胞中，但也廣泛存在于血管壁的內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、成纖維細(xì)胞以及心肌細(xì)胞中[2]。

目前認(rèn)為p22phox亞單位是維持NADPH氧化酶結(jié)構(gòu)穩(wěn)定和活化的一個(gè)關(guān)鍵亞單位[4]。其編碼基因CYBA位于染色體16q24，由6個(gè)外顯子和5個(gè)內(nèi)含子組成。1990年Dinauer等發(fā)現(xiàn)CYBA C242T多態(tài)性。位于外顯子242位的C→T突變，導(dǎo)致編碼改變CAC→TAC，使p22phoX亞基第72位組氨酸被酪氨酸代替。該改變可能影響該部位2個(gè)潛在的血紅素結(jié)合位點(diǎn)，從而影響結(jié)合血紅素的能力而失去氧化功能，導(dǎo)致血管壁氧自由基和氧化應(yīng)激水平降低[2]。近10年來，臨床對CYBA C242T多態(tài)性與動(dòng)脈粥樣硬化病變及其危險(xiǎn)因素的相關(guān)性進(jìn)行了廣泛的研究[2,5]。Inoue等[6]的研究發(fā)現(xiàn)，在日本人群中T等位基因可提供動(dòng)脈粥樣硬化保護(hù)作用。但是，一些在白種人群的研究提示，C242T多態(tài)性與冠心病的嚴(yán)重程度不相關(guān)[7,8]，甚至有一些研究提示T等位基因與心腦血管疾病的進(jìn)展正相關(guān)[9,10]。關(guān)于C242T多態(tài)性與高血壓相關(guān)性的研究較少。Moreno等[11]報(bào)道在白種人中，多態(tài)性與原發(fā)性高血壓相關(guān)，T等位基因存在保護(hù)人群免于發(fā)生高血壓的作用。同樣，來自我國漢族人群中的研究也支持T等位基因?yàn)樵l(fā)性高血壓的保護(hù)基因[12]。而有關(guān)C242T多態(tài)性與高血壓合并靶器官損害的相關(guān)性的報(bào)道則更少。

本研究發(fā)現(xiàn)，高血壓合并LVH的患者中CT基因型頻率和T等位基因頻率均顯著高于對照組，而納入年齡、性別、血壓、血脂和血糖等常見心血管危險(xiǎn)因素的logstic回歸結(jié)果證實(shí)，C242T多態(tài)性與高血壓患者LVH獨(dú)立相關(guān)，T等位基因存在保護(hù)LVH發(fā)生的作用。但與本研究結(jié)果相反，Schreiber等[13]對巴西高血壓人群的分析結(jié)果顯示C242T突變是LVH的危險(xiǎn)因素。有觀點(diǎn)認(rèn)為，上述各研究對C242T突變是否具有保護(hù)性的結(jié)果的差異，與種族差異相關(guān)。同時(shí)，CYBA基因上還存在其他一些可影響NADPH氧化酶功能的突變，這些突變之間于C242T突變可能存在相互作用[2]。進(jìn)一步深入認(rèn)識(shí)NADPH氧化酶的作用機(jī)制、其編碼基因多態(tài)性對其功能的影響，可能能夠幫助我們更好地理解多態(tài)性與心血管疾病的關(guān)系。

總之，本研究提示CYBA C242T多態(tài)性可能與中國高血壓患者合并LVH相關(guān)，中國患者中T等位基因存在保護(hù)作用。因此檢測其基因型可能對于篩查高危人群，早期發(fā)現(xiàn)及時(shí)防治，以減少患者靶器官損害有重要意義。但該結(jié)果仍有待于擴(kuò)大樣本中進(jìn)一步比較證實(shí)。

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（編輯: 周宇紅）

Correlation of p22phox gene polymorphism of NADPH oxidase with left ventricular hypertrophy in hypertensive patients

CHI Xiao-Jyu1*, LYU Zhuo2, CEN Luan1

(1Department of Oncology, First Affiliated Hospital, Guangxi Medical University, Nanning 530021, China;2Department of Internal Medicine, Jiangbin Hospital, Nanning 530021, China)

To investigate the correlation of the C242T polymorphism of NADPH oxidase p22-phox gene with left ventricular hypertrophy (LVH) in Chinese Han hypertensive subjects.A total of 286 consecutive patients of Han nationality with newly diagnosed essential hypertension admitted in our hospital from January 2008 to December 2011 were enrolled in this study. They were all evaluated with echocardiography for left ventricular mass index, and were divided into hypertension with or without LVH. Body mass index (BMI), blood pressure, fasting blood glucose, triglycerides and total cholesterol were documented. P22-phox C242T polymorphism was analyzed by restriction fragment length polymorphism (RFPL).The frequencies of CT genotype and T allele were significantly higher in the patients with LVH patients than those without LVH (＝0.002,＝0.005), but no any case of TT genotype was found. Logistic analysis showed that the C242T polymorphism in NADPH oxidase p22phox, as well as female sex and systolic blood pressure were independent risk factors for LVH. Compared to patients with CC genotype, the risk of LVH was decreased by 63% in those with CT genotype (＝0.007).The C242T polymorphism in NADPH oxidase p22phox is correlated with LVH in Chinese hypertensive patients. The T allele might be protective factor for LVH.

left ventricular hypertrophy; NADPH oxidase; polymorphism

R592; R544.1

A

10.3724/SP.J.1264.2013.00109

2013-03-01;

2013-05-06

池小鉅, Tel: 0771-3277289, E-mail: 258043050@qq.com