失血性休克高張鹽復蘇對急性肺損傷與腸淋巴液致炎作用影響

張婕 童雷 曹玨 計超 陳武榮

[摘要]目的觀察并比較高張鹽和乳酸林格液復蘇對失血性休克大鼠急性肺損傷和腸淋巴液的影響。方法將雄性SD大鼠40只分成4組（n=10），分別為假休克組（組Ⅰ）、休克組（組Ⅱ）、乳酸林格氏液組（組Ⅲ）和高張鹽溶液組（組Ⅳ）。復蘇后比較肺干濕重比和肺組織學變化，收集并測定腸淋巴液腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）含量，觀察腸淋巴液對肺巨噬細胞的刺激作用。結果組Ⅱ和組Ⅲ肺干濕重比和組織中白細胞浸潤程度顯著高于組Ⅰ和組Ⅳ，組Ⅱ和組Ⅲ大鼠在休克期及復蘇后的腸淋巴液TNF-α、IL-1β、IL-6含量及對肺巨噬細胞刺激作用均顯著高于組Ⅰ、組Ⅳ。結論高張鹽溶液復蘇可降低失血性休克大鼠腸淋巴液促炎作用，減輕失血性休克后的急性肺損傷。

[關鍵詞]失血性休克；高張鹽；復蘇；細胞因子；急性肺損傷

[中圖分類號]R605.971 [文獻標識碼]A [文章編號]1674-4721（2012）12（a）-0009-03

失血性休克（HS）患者救治后并發(fā)的多臟器功能障礙（MODS）是失血性休克患者后期的主要死亡原因[1]。急性肺損傷（ALI）是失血性休克后首發(fā)的臟器功能障礙。休克后機體腸淋巴液內腫瘤壞死因子-α（tumornecrosisfactor-α，TNF-α）、白介素-1β（interlukin1β，IL-1β）、白介素-6（interlukin-6，IL-6）等促炎因子升高與ALI發(fā)生有密切關系[2]。近年來用7.5%高張鹽溶液（HTS）治療失血性休克具有較好的減輕ALI的作用，體外實驗提示HTS還具有免疫調節(jié)作用[3]。本文觀察乳酸林格氏液（RL）和HTS復蘇對失血性休克后ALI和腸淋巴液的影響。

1材料與方法

1.1材料

健康雄性SD大鼠40只，體重（300±50）g。

1.2方法

1.2.1造模方法 2.5％戊巴比妥鈉50mg/kg腹腔注射麻醉后，取腹正中切口，分離腸系膜淋巴管并置入腸淋巴引流管，作右頸動脈和左頸靜脈插管，監(jiān)測平均動脈壓（MAP）。上述操作完成并穩(wěn)定60min后，經(jīng)右頸總動脈放血，在10min內使平均動脈壓降低至40mmHg，維持1h建立大鼠失血性休克模型，取出的血液肝素化保存[4]。大鼠分為4組，每組10只，組Ⅰ為假休克組，不做放血處理；組Ⅱ為單純休克組，休克后不予復蘇；組Ⅲ為乳酸林格氏液復蘇組，大鼠HS后30min內輸入2倍失血量RL和1/2的放血量；組Ⅳ為HTS復蘇組，大鼠HS后30min內輸入7.5%高滲氯化鈉4mL/kg和1/2的放血量。

1.2.2肺組織標本和肺巨噬細胞提取 各組大鼠分別收集休克前、休克時、復蘇后2h腸淋巴液。復蘇后120min靜注戊巴比妥處死大鼠，測定肺干濕重比并做肺組織病理學檢查。肺間質白細胞浸潤分級評分如下：0，無浸潤；1，輕度；2，中度；3，重度[5]。右肺葉做肺灌洗，收集肺巨噬細胞以RPMI1640營養(yǎng)液保存。Wright-Giemsa染色細胞計數(shù)測定巨噬細胞比例90%以上，苔盼藍拒染試驗測定細胞活力90%以上[6]。

1.2.3腸淋巴液與肺巨噬細胞孵育前后TNF-α、IL-1β、IL-6含量測定 采用雙抗體夾心ABC-ELISA法測定上述指標。取復蘇后2h收集的腸淋巴液于4℃低溫離心機內10000g離心20min，上清按說明書置入酶標板測定各數(shù)據(jù)。腸淋巴液用0.9%氯化鈉溶液稀釋至原液5%，取100μL與細胞濃度為1×106/mL的巨噬細胞RPMI1640培養(yǎng)液100μL混勻，置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱孵育4h。取出培養(yǎng)板于4℃低溫離心機內10000g離心20min，按上法測定孵育后淋巴液內TNF-α、IL-1β、IL-6含量[7]。

1.3統(tǒng)計學處理

所得數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標準差表示，使用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進行處理，多樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義，P<0.01為差異有高度統(tǒng)計學意義。

2結果

2.1肺組織損傷比較

組Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的肺干濕重比分別為4.2±1.2、6.8±1.8、8.0±1.8、5.1±1.2，組Ⅱ和組Ⅲ大鼠肺干濕重比顯著高于組Ⅰ和組Ⅳ（P<0.05）。肺間質白細胞浸潤程度評分組Ⅱ和組Ⅲ分別為2.40±0.70、2.90±0.32，顯著高于組Ⅰ（0.50±0.53）和組Ⅳ（1.10±0.74）（P<0.01）。

2.2腸淋巴液在復蘇前后的TNF-α、IL-1β、IL-6變化

組Ⅰ大鼠腸淋巴液中TNF-α、IL-1β、IL-6含量在實驗期間均無顯著變化，組Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ大鼠休克后TNF-α、IL-1β、IL-6均顯著升高。組Ⅲ大鼠復蘇2h后IL-1β、IL-6、TNF-α均顯著升高；組Ⅳ大鼠復蘇后TNF-α、IL-1β、IL-6較休克時水平均顯著降低，與休克前水平相當。各組大鼠休克與復蘇前后TNF-α、IL-1β、IL-6含量變化見表1。

2.2腸淋巴液與巨噬細胞孵育前后TNF-α、IL-1β、IL-6變化

休克后2h的腸淋巴液經(jīng)與肺巨噬細胞孵育后，組Ⅱ和組Ⅲ腸淋巴液內TNF-α、IL-1β、IL-6水平均顯著升高，而組Ⅰ和組Ⅳ均無顯著升高。見表2。

3討論

失血性休克復蘇效果除與失血速度、失血量和持續(xù)時間有關外，還與失血性休克的復蘇策略相關[8]。本文失血性休克動物模型采用臨床常用的2倍失血量RL聯(lián)合輸血方案和HTS4mL/kg聯(lián)合輸血方案，結果表明HTS復蘇明顯減輕休克后ALI的損傷程度，表現(xiàn)為肺干濕重比和肺間質白細胞浸潤程度顯著低于RL復蘇組大鼠。HTS復蘇組大鼠腸淋巴液中的促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6在復蘇后2h其水平與休克前水平相當，而RL復蘇組大鼠腸淋巴液中的促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6則進一步升高，且HTS治療組大鼠腸淋巴液刺激肺巨噬細胞作用明顯低于RL組和單純休克組大鼠。

失血性休克復蘇后發(fā)生MODS是休克患者度過休克期后死亡的主要原因[1]。休克后發(fā)生MODS的機制目前尚不清楚。根據(jù)休克后MODS發(fā)生的“腸源性學說”[9]，保護腸黏膜和減輕休克后腸淋巴液的促炎作用可以減輕休克后ALI發(fā)生率及其程度。本文的研究結果支持這一假說。在休克采取HTS復合部分庫血復蘇后，肺的通透性和肺實質白細胞浸潤程度明顯較單純休克組減輕，同時腸淋巴液內TNF-α、IL-1β、IL-6等促炎因子的水平也明顯降低，提示這兩者之間有一定的相關性。而采用RL復合部分庫血回輸后其肺的通透性及肺實質白細胞浸潤反而較單純休克組更為明顯，且腸淋巴液中各促炎因子水平進一步升高，這與CottonBA等[10]的研究結果一致。RL和HTS同屬晶體液，但對失血性休克的復蘇效果存在較大差異。HTS進入循環(huán)后通過滲透壓差異將組織間隙體液回吸收至循環(huán)系統(tǒng)中，有助于減輕組織的水腫，而大劑量的RL等滲液體對維持循環(huán)作用不明顯，且因微循環(huán)血管通透性升高容易進入組織間隙，加重局部組織的缺氧。

小劑量HTS用于失血性休克液體復蘇不僅具有較好的擴容效果，而且HTS具有較好的免疫功能調節(jié)作用。本文的研究結果表明，HTS復蘇后不僅對腸淋巴液TNF-α、IL-1β、IL-6等促炎因子的水平有降低作用，且腸淋巴液與肺巨噬細胞孵育后，對肺巨噬細胞的刺激作用也明顯較RL為低，提示HTS減輕肺損傷的作用主要在于其免疫調節(jié)作用。腸淋巴液被認為是休克后腸道誘發(fā)遠處器官損傷的共同通路，將休克后大鼠的腸淋巴液引流可以消除失血性休克后的ALI[11]，而注射休克后大鼠的腸淋巴液可以誘發(fā)ALI[12]。本文結果表明，HTS復蘇組大鼠的ALI程度明顯減輕，而單純休克組和RL復蘇組大鼠ALI程度則劇烈得多。結合HTS復蘇組大鼠腸淋巴液內促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6水平較RL組和單純休克組顯著降低，且腸淋巴液與肺巨噬細胞孵育后TNF-α、IL-1β、IL-6水平也顯著低于RL組和單純休克組，筆者推測HTS不僅可以減輕腸淋巴液內促炎因子的生成，同時也可調控肺巨噬細胞的免疫活性強度，從而起到減輕休克后ALI發(fā)生發(fā)展的作用。

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（收稿日期：2012-08-06 本文編輯：陳 ?。?/p>