酵母表達(dá)的PCV2 Cap蛋白在豬體的免疫特性分析

摘要：PCV2也稱之為豬圓環(huán)病毒Ⅱ型，它是顯示出綜合癥狀的一種疾病，只能適用于豬體，這種疾病的傳播率高、傳播范圍廣、死亡率高，能帶來非常嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，而PCV2 Cap蛋白是根據(jù)PCV2研制而成的，它具有增長豬群生長指數(shù)以及降低豬群死亡系數(shù)的優(yōu)點(diǎn)，能緩解PCV2所帶來的后果。

關(guān)鍵詞：豬圓環(huán)病毒Ⅱ型；豬α干擾素；PCV2 Cap蛋白；免疫特性

中圖分類號(hào)：S858.28 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1674-0432（2012）-12-0194-1

豬圓環(huán)（PCV）是一種隸屬于圓環(huán)病毒范圍的病毒，表現(xiàn)為無囊膜、二十面體，其具有自主復(fù)制的特性，它主要有兩種形式，分別是PCV1以及PCV2，其中PCV1沒有臨床疾病，不會(huì)造成豬的致病性，而PCV2則顯示出存在臨床疾病，會(huì)造成豬的致病性，尤其是對(duì)正在成長型的豬仔能形成不可避免的危害。PCV基因中包含兩個(gè)最為重要的閱讀框，分別是ORF1以及ORF2，其中ORF1也稱之為Rep，它是由PCV1氨基酸與PCV2氨基酸組成的，主要顯示出病毒的自主復(fù)制；ORF2也稱之為cap，它是由233氨基酸的編碼組成，主要顯示出病毒的免疫性原蛋白。目前我國主要研究的是PCV2病毒的疫苗，因?yàn)樗窃斐韶i群死亡率最高的病毒。

1 實(shí)驗(yàn)材料以及實(shí)驗(yàn)方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

實(shí)驗(yàn)需要準(zhǔn)備病毒、細(xì)胞、菌種、動(dòng)物、重組Cap以及試劑，其中病毒、細(xì)胞以及菌種為PCV2 JS分離株、沒有被PCV1所污染的細(xì)胞PK15、酵母菌株X-33所代表的PCV2 Cap蛋白分泌表達(dá)以及酵母菌株pPICZαA-ORF2所代表的PCV2 Cap蛋白分泌表達(dá)；動(dòng)物是選用剛剛斷奶28天的豬仔，數(shù)量為20頭PCV2呈現(xiàn)陰性的豬仔以及數(shù)量為20頭PCV2母源抗體呈現(xiàn)陰性的豬仔；重組Cap是采用酵母菌株X-33以及酵母菌株pPICZαA-ORF2的發(fā)酵法培養(yǎng)出來的，具體做法為把8000g的發(fā)酵液進(jìn)行離心15min，之后把上清液取走進(jìn)行電泳鑒定，鑒定方法為SDS-PAGE；試劑選用鋁膠佐劑，而鋁膠佐劑必須達(dá)到10зU.mL-1的抗病毒活性，且必須按照豬α干擾素的酵母表達(dá)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

為了實(shí)現(xiàn)酵母表達(dá)的PCV2 Cap蛋白在豬體的免疫特性，需要豬α干擾素與酵母表達(dá)的PCV2 Cap蛋白組成疫苗，單位是亞，或者把一定數(shù)量的鋁膠與酵母表達(dá)的PCV2 Cap蛋白組成疫苗，單位是亞；把剛剛斷奶28天豬仔中一組接種亞單位的豬α干擾素重組，把另一組接種亞單位的鋁膠佐劑，建立對(duì)照表格，分別顯示空白對(duì)照的數(shù)據(jù)以及功毒對(duì)照的數(shù)據(jù)，并在21天以后進(jìn)行免疫的加強(qiáng)，14天以后進(jìn)行功毒，功毒材料選用PCV2 JS。在接種了亞單位的豬α干擾素重組的豬仔體內(nèi)發(fā)現(xiàn)了中和抗體以及ELISA抗體的數(shù)值都異常高，而接種亞單位的鋁膠佐劑的豬仔體內(nèi)發(fā)現(xiàn)了中和抗體以及PCV2，兩者相比較發(fā)現(xiàn)豬α干擾素重組豬仔體內(nèi)的抗體比鋁膠佐劑豬仔體內(nèi)的抗體要多出許多；通過功毒對(duì)照表發(fā)現(xiàn)，只接受了功毒的豬仔出現(xiàn)發(fā)熱現(xiàn)象，并伴隨著病毒血癥的出現(xiàn)，在功毒后接種了豬α干擾素重組的豬仔完全沒有病毒血癥的出現(xiàn)，而在功毒后接種了鋁膠佐劑的豬仔有2頭出現(xiàn)發(fā)熱并伴隨著病毒血癥，剩下的均沒有病毒血癥的出現(xiàn)。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

通過上述實(shí)驗(yàn)可以知道PCV2 Cap蛋白分泌表達(dá)的酵母能成功誘導(dǎo)豬仔的中和抗體，并使它快速、有效的產(chǎn)生，而PMWS與抗病毒的染體產(chǎn)生結(jié)果和PCV2 Cap蛋白分泌表達(dá)的Fenaux結(jié)果是一樣的，都呈現(xiàn)出病毒的顆粒狀。鋁膠佐劑的特點(diǎn)是具有緩釋抗原的功能，而Cap蛋白重組卻呈現(xiàn)出分子的相對(duì)質(zhì)量小、蛋白成分過于簡單、產(chǎn)生的抗體停留時(shí)間短以及產(chǎn)生的抗原體弱，鋁膠佐劑可以中和Cap蛋白重組的缺點(diǎn)，所以在實(shí)際操作時(shí)可以把Cap蛋白重組以鋁膠佐劑的形式制作出來，這樣既中和了病毒，又刺激了淋巴細(xì)胞。

在Cap蛋白重與豬α干擾素的結(jié)果表明，PCV2 Cap蛋白分泌表達(dá)的酵母具有非常出色的免疫原性，并在空白對(duì)照以及功毒對(duì)照中顯示出，沒有進(jìn)行任何措施的豬仔全部呈現(xiàn)出退毛、毛發(fā)粗亂、發(fā)熱以及食欲對(duì)退的血癥現(xiàn)象，而接種亞單位的鋁膠佐劑后，絕大部分的豬仔能在短時(shí)間內(nèi)發(fā)熱減退、血癥減輕，一小部分豬仔還是出現(xiàn)了持續(xù)發(fā)熱的血癥現(xiàn)象；所以PCV2病毒的最好防治措施是亞單位的Cap蛋白重組。豬α干擾素與Cap蛋白重組的相結(jié)合，具有更加出色的保護(hù)效果，這是因?yàn)樨iα干擾素既能調(diào)節(jié)蛋白抗原的免疫力，還能使Cap蛋白重組的廣譜抗病毒性得到充分的發(fā)揮。

參考文獻(xiàn)

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作者簡介：劉寶艷（1969-），女，就職于榆樹市畜牧總站，研究方向：畜牧獸醫(yī)。