9種殺菌劑對樟子松枯梢病的室內(nèi)毒力測定

摘要：利用菌絲生長速率法和孢子萌發(fā)抑制法， 測定了9種殺菌劑對松球殼孢菌的毒力，篩選出有效控制松枯梢病的高效殺菌劑。主要結(jié)果：抑制菌絲生長試驗，25%苯醚甲環(huán)唑效果最好，對病原菌抑制的EC50值為0.0797mg·L-1，32.5%苯甲+醚菌酯次之；在抑制孢子萌發(fā)方面，32.5%苯甲+醚菌酯效果最好，對分生孢子萌發(fā)抑制的EC50值為0.0481mg·L-1，25%苯醚甲環(huán)唑次之。綜合分析，32.5%苯甲+醚菌酯和25%苯醚甲環(huán)唑不但可以抑菌菌絲生長，還可以有效抑制孢子萌發(fā)，同傳統(tǒng)殺菌劑多菌靈、代森錳鋅比較，苯醚甲環(huán)唑和醚菌酯等新型殺菌劑更具優(yōu)勢，可以作為防治樟子松枯稍病的備選藥劑。

關(guān)鍵詞：樟子松枯梢?。粺o公害殺菌劑；毒力測定

中圖分類號：S482.2 文獻標(biāo)識碼：A 文章編號：1674-0432（2012）-12-0038-2

樟子松（Pinus sylvestris var mongolica）因具有耐干旱、耐瘠薄、抗寒、速生等生物學(xué)特性，而且材質(zhì)優(yōu)良，用途廣泛，成為用材林、防護林以及綠化的優(yōu)良樹種。樟子松現(xiàn)已成為三北防護林工程和治沙工程建設(shè)的主要造林樹種之一[1]。樟子松枯梢病是由由松球殼孢菌（Sphaeropsis sapinea（Fr）Dyko et Sutton）引起的樟子松人工林主要病害[2-5]，在北方地區(qū)包括黑龍江、吉林、遼寧以及內(nèi)蒙古均有發(fā)生，隨著樟子松人工林面積的逐年擴大，樟子松枯梢病害日趨嚴(yán)重，造成了巨大的經(jīng)濟損失。對樟子松枯梢病的有效持續(xù)控制是當(dāng)前研究的重點，目前樟子松枯梢病主要以化學(xué)防治結(jié)合營林措施為主[6-7]，經(jīng)過多年的研究，形成了有效的防控方法和技術(shù)，但是也存在一定的問題，農(nóng)藥品種老舊，病原產(chǎn)生抗藥性，以及防治過程中造成的環(huán)境污染等一系列問題亟待解決。本文的主要工作是對高效無公害農(nóng)藥品種進行篩選，以期篩選得到好的農(nóng)藥品種，為樟子松枯梢病的防治提供理論基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1 供試菌株和藥劑

1.1.1 病原菌株 供試病原菌松球殼孢菌（Sphaeropsis sapinea（Fr）Dyko et Sutton）分離自黑龍江省牡丹江海林林業(yè)局奮斗林場樟子松人工林，4℃保存于PDA斜面。

1.1.2 供試藥劑 選用9種無公害農(nóng)藥進行毒力測定，具體名稱種類見表1。

1.2 試驗方法

對樟子松枯稍病菌松球殼孢菌的毒力測定，分別采取菌絲生長抑制法和孢子萌發(fā)抑制法進行篩選，通過計算抑制中濃度（EC50），篩選出高效的無公害農(nóng)藥品種。

1.2.1 菌絲生長抑制法 采用直接添加法，用無菌水將殺菌劑分別配制成10倍的母液，用移液器分別吸取定量藥液加入到100mL PDA培養(yǎng)基中（培養(yǎng)基溫度為50℃左右）混勻，使其終濃度分別為100、200、500、1000、2000、3000、5000、8000倍8個濃度梯度，倒入直徑為9cm 的培養(yǎng)皿制成帶藥平板培養(yǎng)基，進行抑菌測定，以無菌水作空白對照。在培養(yǎng)好的松球殼孢菌（Sphaeropsis sapinea）菌落邊緣用0.5cm打孔器切取菌絲塊，分別移到混有供試農(nóng)藥的PDA平板培養(yǎng)基上，每處理3個重復(fù)。在25℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)48h后，采用十字交叉法測量松球殼孢菌（Sphaeropsis sapinea）菌落直徑，計算菌落直徑平均值和菌絲生長抑制率。

菌絲生長抑制率/%=[1-（處理菌落直徑-菌餅直徑）/（對照菌落直徑-菌餅直徑）]×100%）

1.2.2 孢子萌發(fā)抑制法 用無菌水沖洗培養(yǎng)好的松球殼孢菌（Sphaeropsis sapinea）菌落平板，收集孢子，計數(shù)后稀釋到一定濃度，配制成孢子懸浮液，。采用懸滴法測定9種殺菌劑不同濃度梯度對松球殼孢菌（Sphaeropsis sapinea）孢子萌發(fā)的影響，使用的藥物濃度梯度同上，分別取待測農(nóng)藥（含2%葡萄糖）及病原孢子懸浮液各20μL滴于載玻片上，混合，將載玻片置于保濕器中，置于25℃恒溫箱中培養(yǎng)，以2%葡萄糖溶液與松球殼孢菌（Sphaeropsis sapinea）孢子液的混合作對照，每處理3個重復(fù)，24h后鏡檢松球殼孢菌（Sphaeropsis sapinea）分生孢子的萌發(fā)率，每個梯度鏡檢10個視野，將結(jié)果累加。

孢子萌發(fā)抑制率（%）=（1-處理孢子萌發(fā)數(shù)/對照孢子萌發(fā)數(shù)）×100%

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

采用DPS統(tǒng)計軟件和Excel軟件對測定數(shù)據(jù)進行處理和計算，將菌絲生長抑制率和孢子萌發(fā)抑制率分別換算成機率值（y），藥劑濃度換算成濃度對數(shù)（x），按濃度對數(shù)與機率值回歸法求得線性回歸方程y=a+bx，并以回歸方程計算各供試藥劑對立枯絲核菌和腐皮鐮刀軍菌絲生長和孢子萌發(fā)的抑制中濃度（EC50）、機率值與濃度對數(shù)之間回歸的相關(guān)系數(shù)r值，比較不同殺菌劑對松球殼孢菌（Sphaeropsis sapinea）的抑制作用。

2 結(jié)果與分析

2.1 殺菌劑對松球殼孢菌菌絲生長的抑制作用

不同濃度的殺菌劑與其對松球殼孢菌的抑制率之間是一種不對稱的S型曲線關(guān)系，將濃度轉(zhuǎn)化為對數(shù)，抑制率轉(zhuǎn)化為概率值時，濃度與抑制率之間表現(xiàn)為一元直線回歸關(guān)系，通過相關(guān)性分析，可以檢驗線性關(guān)系的顯著性，分析比較殺菌劑對病菌的毒力。

試驗結(jié)果看出，9種殺菌劑的毒力回歸方程表明，y與x間都存在極顯著的直線回歸關(guān)系，9種殺菌劑對松球殼孢菌的菌絲生長均具有一定的抑制作用。對病菌抑制的EC50值，25%苯醚甲環(huán)唑效果最好，對病原菌抑制的EC50值為0.0797mg·L-1，32.5%苯甲+醚菌酯次之，其他依次為50%戊唑醇、25%苯唑醚菌酯、25%醚菌酯、50%嘧菌環(huán)胺、50%異菌脲、80%多菌靈85%代森錳鋅，同傳統(tǒng)殺菌劑多菌靈和代森錳鋅等相比，苯醚甲環(huán)唑和醚菌酯等殺菌劑表現(xiàn)了更強抑制菌絲生長的作用，新型殺菌劑可以作為替代品在防治中進行應(yīng)用。

2.2 不同藥劑對松球殼孢菌孢子萌發(fā)的抑制作用

不同殺菌劑對松球殼孢孢子萌發(fā)的抑制作用結(jié)果見表3，9種殺菌劑對松球殼孢菌分生孢子的萌發(fā)均具有一定的抑制作用。其中，對孢子萌發(fā)抑制的EC50值，32.5%苯甲+醚菌酯效果最好，對分生孢子萌發(fā)抑制的EC50值為0.0481mg·L-1，25%苯醚甲環(huán)唑次之；其他依次為25%醚菌酯、25%苯唑醚菌酯、50%嘧菌環(huán)胺、50%戊唑醇、50%異菌脲、85%代森錳鋅和80%多菌靈。9種殺菌劑對孢子萌發(fā)的抑制作用和菌絲生長的抑制作用排序大體相同，同傳統(tǒng)農(nóng)藥多菌靈、代森錳鋅等相比，新型殺菌劑醚菌酯、苯醚甲環(huán)唑等具有更有效的抑制菌絲生長和孢子萌發(fā)的作用。

3 結(jié)論

本文重點研究了9種高效無公害殺菌劑對松球殼孢菌的室內(nèi)毒力測定，測定對菌絲生長和孢子萌發(fā)的抑制作用，建立毒力回歸方程并計算了對菌絲生長和孢子萌發(fā)抑制作用的EC50值。通過比較排序，苯醚甲環(huán)唑和醚菌酯等新型殺菌劑表現(xiàn)了較強的抑菌作用，同傳統(tǒng)殺菌劑多菌靈和甲基托布津相比，更加具有優(yōu)勢。建議在進一步的防治試驗中，選擇苯醚甲環(huán)唑和醚菌酯等新型殺菌劑進行樟子松枯梢病的防治研究。

參考文獻

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作者簡介：宋修春（1974-），黑龍江省森工總局海林林業(yè)局奮斗林場營林助理工程師，從事森林經(jīng)營，森林保護等方面工作。