團(tuán)頭魴消化器官淀粉酶活性的研究

摘要：消化酶活性是反映魚(yú)類消化機(jī)能的重要生理指標(biāo)，魚(yú)類消化酶活性的高低決定著魚(yú)類對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化吸收的能力，因而消化酶活性的研究可為人工配合飼料的研制提供科學(xué)的理論依據(jù)，此外，它還可以為改善魚(yú)類飼養(yǎng)方法、提高產(chǎn)量、制定魚(yú)類合理飼養(yǎng)策略、降低養(yǎng)殖成本提供必要的基礎(chǔ)資料。隨著魚(yú)類養(yǎng)殖業(yè)的迅速發(fā)展和生理生化的研究進(jìn)展，國(guó)內(nèi)外對(duì)魚(yú)類主要消化酶的研究也取得了進(jìn)一步的發(fā)展，國(guó)外對(duì)魚(yú)類消化酶的研究比較早，1940年獲得了第一個(gè)魚(yú)胃蛋白酶的結(jié)晶，后來(lái)先后報(bào)道了野鯪、蟾胡子鯰、叉尾鯰、狗魚(yú)擬鯉等魚(yú)類消化酶消化性的研究情況。國(guó)內(nèi)對(duì)這方面研究的起步比較晚，但也取得了不少的成果，如：吉林農(nóng)大的周景祥教授等人研究了大眼獅鱸淀粉酶，郭善軍教授等人研究了團(tuán)頭魴等三種魚(yú)的淀粉和蛋白酶的活性。本文選擇北方養(yǎng)殖的團(tuán)頭魴做研究對(duì)象，研究它的消化器官中淀粉酶和蛋白酶最適pH值和活性強(qiáng)度。

關(guān)鍵詞：團(tuán)頭魴；消化器官淀粉酶活性；研究

中圖分類號(hào)：S963文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1674-0432（2012）-07-0042-1

1 材料和方法

試驗(yàn)用團(tuán)頭魴購(gòu)于活魚(yú)市場(chǎng)，共4條，均為一齡魚(yú)。

2 方法

2.1 酶粗提物的制備

活魚(yú)運(yùn)回后，測(cè)體長(zhǎng)、體重等，殺死后置于碎冰解剖盤中解剖，取出肝胰臟，胃，腸，脾臟，用冷卻去離子水沖洗內(nèi)容物，將腸分為前中后三段（因?yàn)閳F(tuán)頭魴為無(wú)胃魚(yú)類，所以前腸代替部分胃的功能），將團(tuán)頭魴肝胰臟、胃、中腸、后腸分別合并，用分析天平稱重，然后加入樣品重10倍的冷卻去離子水在勻漿器中勻漿，然后在10000r/min的離心機(jī)中離心8min，取上清液置于4℃以下冰箱中保存，24h內(nèi)分析完畢。

2.2 淀粉酶活力的測(cè)定

2.2.1 活力測(cè)定原理 碘——淀粉比色法：淀粉經(jīng)一定粉酶催化水解成麥芽糖及糊精，在底物淀粉已知且過(guò)量的條件下，反應(yīng)后加入碘液與未被催化水解的淀粉結(jié)合成藍(lán)色復(fù)合物，其藍(lán)色的深淺與未經(jīng)酶促反應(yīng)的空白管比較成比例。從而計(jì)算出淀粉的量，推算出淀粉酶活力。

2.2.2 最適pH測(cè)定 用磷酸氫二鈉一檸檬酸緩沖溶液，設(shè)置pH值為2.0、2.2、2.4、2.6、2.8、3.0、3.2、3.4、3.6、3.8、4.0、4.4、4.8、5.2、5.6、6.0、6.4、6.8、7.2、8.0.設(shè)置溫度40℃，每個(gè)pH設(shè)計(jì)兩個(gè)平行組，在恒溫水浴中控制溫度。

2.2.3 活力的計(jì)算 淀粉酶活力=(Ab-Au)/Ab×0.4×(30÷7.5)×組織稀釋倍數(shù)

式中：Ab=空白管吸光度，Au=測(cè)定管的吸光度。淀粉酶活性定義：1mL酶濾液中的酶，在40℃和底物淀粉作用30min，水解10mg淀粉為1個(gè)淀粉酶活性單位。

2.2.4 測(cè)定步驟 取4支試管（其中1支為空白對(duì)照管，3支為平行測(cè)定管）分別加入底物緩沖液1mL（0.4g/L淀粉溶液），然后按所測(cè)的pH值再分別加入1mL不同梯度的pH溶液于40℃水浴5min。在測(cè)定管中加入0.4mL酶粗提物（內(nèi)臟勻漿上清液）于40℃水浴7.5min。在空白管中加入1mL碘稀釋液（0.1mol/L）和5.2mL去離子水，最后在722分光光度計(jì)波長(zhǎng)在660nm比色，并通過(guò)公式計(jì)算其酶活力。

3 結(jié)果

在不同pH下團(tuán)頭魴各消化器官淀粉酶活力。在pH為2.0-8.0范圍之內(nèi)，團(tuán)頭魴各消化器官淀粉酶最適pH分別為：肝胰臟為6.4，中腸為6.4，后腸為7.2，胃為6.8，脾臟為7.2，各消化器官淀粉酶活性在肝胰臟中最強(qiáng)，脾臟中也較強(qiáng)，而在胃中最弱。

在最適合pH下團(tuán)頭魴各消化器官淀粉酶活力為：肝胰臟為60.0，脾臟為58.21，胃為40.63，前腸為40.00，后腸為41.12。

4 討論

團(tuán)頭魴各消化器官中淀粉酶活力最強(qiáng)的是肝胰臟，活力最弱的是中腸，在脾臟中淀粉酶的活力也較強(qiáng)，后腸和胃中淀粉酶的活力則相對(duì)較弱。因此可以推測(cè)團(tuán)頭魴消化器官中，肝胰臟和脾臟為主要的淀粉酶分泌器官，而胃和腸起輔助消化淀粉的作用，但有報(bào)道指出脾臟的功能并非分泌淀粉酶，其具有一定的淀粉酶只是因?yàn)槠⑴K中彌散分布著一定肝胰臟組織，所以它的淀粉酶活力也較高，這與本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果是基本相符的。

作者簡(jiǎn)介：王鐵彥（1955-）男，中專 就職于吉林省亮甲山水庫(kù)管理局，從事水產(chǎn)養(yǎng)殖工作；尤新智（1962-）男，中專，就職于蛟河市水產(chǎn)技術(shù)推廣站，從事水產(chǎn)技術(shù)推廣工作。