HPLC法同時測定復(fù)方兒茶酊中兒茶素與原兒茶素的含量

龍瀟鴻，范衛(wèi)東，鄭嬌妮

（1.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院，重慶400010；2.重慶市第四人民醫(yī)院藥劑科，重慶400014）

HPLC法同時測定復(fù)方兒茶酊中兒茶素與原兒茶素的含量

龍瀟鴻1＊，范衛(wèi)東1#，鄭嬌妮2

（1.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院，重慶400010；2.重慶市第四人民醫(yī)院藥劑科，重慶400014）

目的：建立同時測定復(fù)方兒茶酊中兒茶素與原兒茶素含量的方法。方法：采用高效液相色譜法。色譜柱為YMC ODS（250 mm×4.6 mm，5μm），流動相為0.04 mol·L－1枸櫞酸溶液-N，N-二甲基甲酰胺-四氫呋喃（45∶8∶2，V/V/V），流速為1.0 mL·min－1，檢測波長為280 nm，柱溫為35℃。結(jié)果：兒茶素與原兒茶素的檢測濃度分別在0.051 8～0.259 0、0.010 1～0.203 0 mg·mL－1（r均為0.999 9）范圍內(nèi)與各自峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系；平均加樣回收率分別為101.63%和100.49%，RSD分別為1.27%和1.12%（n均為9）。結(jié)論：本方法簡便、準確、穩(wěn)定，能有效控制復(fù)方兒茶酊的質(zhì)量。

高效液相色譜法；復(fù)方兒茶酊；兒茶素；原兒茶素；含量測定

復(fù)方兒茶酊主要由兒茶、黃柏、冰片等常用中藥組成，具有收濕斂瘡、清熱解毒的作用，同時對燒傷具有抗菌消腫、活血止痛、促進創(chuàng)面愈合的功效，臨床主要用于治療各種原因引起的燒燙傷[1]，至今約有30余年的臨床應(yīng)用歷史。本方君藥兒茶味苦、性寒，功能收濕生肌斂瘡，《本草正》曰：“用治濕爛諸瘡”。因此，對本方兒茶中主要有效成分兒茶素、原兒茶素的含量進行有效控制尤為必要。筆者采用高效液相色譜（HPLC）法對本方中兒茶素、原兒茶素的含量進行了測定，以為該制劑的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

LC-20AT型HPLC儀、AW-200型電子天平（日本島津公司）；KQ-250B型超聲儀（鞏義市予華儀器有限責任公司，功率：250 W，頻率：40 kHz）。

兒茶素、原兒茶素對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號分別為877-200001、879-200203）；甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純；復(fù)方兒茶酊（批號：20100920-1、20100920-2、20100920-3）及缺兒茶的陰性樣品均由重慶醫(yī)科大學(xué)藥物分析實驗室制備。

2 方法與結(jié)果[2～5]

2.1 色譜條件

色譜柱：YMC ODS（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動相：0.04 mol·L－1枸櫞酸溶液-N，N-二甲基甲酰胺-四氫呋喃（45∶8∶2，V/V/V）；流速：1.0 mL·min－1；檢測波長：280 nm；柱溫：35℃。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液 精密稱定兒茶素對照品0.002 59 g，置于10 mL量瓶中，以50%甲醇定容，制得每1 mL含0.259 mg的兒茶素對照品溶液；精密稱定原兒茶素0.002 03 g，置于10 mL量瓶中，以50%甲醇定容，制得每1 mL含0.203 mg的原兒茶素對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液 精密移取樣品1 mL，置于100 mL量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性對照溶液 取缺兒茶的陰性樣品0.5 g，按“2.2.2”項下方法制備陰性對照溶液，即得。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗

分別取陰性對照溶液、兒茶素對照品溶液、原兒茶素對照品溶液、供試品溶液各適量，按上述色譜條件進樣測定，對系統(tǒng)適用性參數(shù)進行考察。結(jié)果，兒茶素和原兒茶素的理論板數(shù)分別為5 689、7 526；分離度為5.36。供試品溶液中兒茶素和表兒茶素的峰與其他峰能達到基線分離，且陰性對照無干擾。色譜見圖1。

2.4 線性關(guān)系考察

分別取兒茶素對照品溶液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 mL，加50%甲醇溶解并定容至10 mL量瓶中，得一系列兒茶素對照品溶液。精密吸取上述兒茶素對照品溶液各10μL，分別注入液相色譜儀，按上述色譜條件進樣測定。以兒茶素峰面積積分值（X）為橫坐標，進樣濃度（Y，mg·mL－1）為縱坐標，繪制標準曲線，得兒茶素的回歸方程為Y＝0.000 172X+2.255 312（r＝0.999 9，n＝5）。結(jié)果表明，兒茶素進樣濃度在0.051 8～0.259 0 mg·mL－1范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系。

圖1 高效液相色譜圖A.兒茶素對照品；B.原兒茶素對照品；C.供試品；D.陰性對照Fig 1 HPLC chromatogramsA.catechin control；B.epicatechin control；C.test samples；D.negative control

分別取原兒茶素對照品溶液 0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 mL，加50%甲醇溶解并定容至10 mL量瓶中，得一系列原兒茶素對照品溶液。精密吸取上述原兒茶素對照品溶液各10 μL，分別注入液相色譜儀，按上述色譜條件進樣測定。以原兒茶素峰面積積分值（X）為橫坐標，進樣濃度（Y，mg·mL－1）為縱坐標，繪制標準曲線，得原兒茶素的回歸方程為Y＝0.000 176X+0.159 399（r＝0.999 9，n＝7）。結(jié)果表明，原兒茶素進樣濃度在0.010 1～0.203 0 mg·mL－1范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗

取兒茶素對照品溶液與原兒茶素對照品溶液各適量，重復(fù)進樣6次，記錄峰面積。結(jié)果，兒茶素、原兒茶素峰面積的RSD分別為2.3%、2.1%（n均為6），表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗

精密移取同一供試品溶液（批號：20100920-1）適量，分別于0、4、8、12、18、24 h進樣10μL，記錄峰面積。結(jié)果，兒茶素、原兒茶素峰面積的RSD分別為0.56%、0.98%（n均為6），表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗

精密移取同一批（批號：20100920-1）樣品適量，按“2.2.2”項下方法平行制備6份供試品溶液，計算各組分含量。結(jié)果，兒茶素和原兒茶素含量的RSD分別為0.15%、1.52%（n均為6），表明本方法重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率試驗

精密移取0.1 mL兒茶素含量為9.04 g·L－1的樣品（批號：20100920-1），置于10 mL量瓶中，平行9份，每3份分別加入兒茶素對照品溶液2.5、3.0、3.5 mL，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，再按上述色譜條件測定，計算兒茶素的加樣回收率，結(jié)果見表1。

精密移取0.1 mL原兒茶素含量為1.32 g·L－1的樣品（批號：20100920-1），置于10 mL量瓶中，平行9份，每3份分別加入原兒茶素對照品溶液1.5、2、2.5 mL，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，再按上述色譜條件測定，計算原兒茶素的加樣回收率，結(jié)果見表2。

表1 兒茶素的加樣回收率試驗結(jié)果（n＝9）Tab 1 Results of recovery test of catechin（n＝9）

表2 原兒茶素的加樣回收率試驗結(jié)果（n＝9）Tab 2 Resultsof recovery test of epicatechin（n＝9）

2.9 樣品含量測定

取3批樣品，分別按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，各進樣10μL，照上述方法測定3批復(fù)方兒茶酊中兒茶素、原兒茶素的峰面積，按標準曲線法計算含量，結(jié)果見表3。

3 討論

表3 樣品含量測定結(jié)果（n＝3）Tab 3 Results of content determination of samples（n＝3）

復(fù)方兒茶酊用藥后在創(chuàng)面形成一層藥膜，可立即解除燒灼感，使患者獲得清涼感而止痛；可以減少滲出和體液蒸發(fā)，減少補液和抗生素的應(yīng)用；該藥收斂迅速形成痂皮，使創(chuàng)面與該藥接觸處呈濕潤狀態(tài)，對燒傷后間生態(tài)組織有保護作用，促使上皮組織再生修復(fù)，因此在臨床應(yīng)用多年，口碑較好。

本方法簡便、穩(wěn)定、專屬性強、靈敏度高，能有效控制復(fù)方兒茶酊的質(zhì)量；并對于含兒茶的制劑，本法同樣適用于其中兒茶素與原兒茶素含量的測定，從而為此類品種的質(zhì)量控制提供了一種有效方法。

[1] 王權(quán)龍.復(fù)方兒茶酊治療燒傷35例[J].陜西中醫(yī)，2010，31（10）：1 365．

[2] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[S].2010年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：9.

[3] 曲銀鋒，李松武，劉乃強，等.HPLC法測定小兒瀉速停顆粒中兒茶素和表兒茶素的含量[J].食品與藥品，2009，11（5）：39．

[4] 高劍鋒，易以木，邱 娟，等.HPLC法測定復(fù)方兒茶軟膏中兒茶素和表兒茶素含量[J].藥物分析雜志，2007，27（7）：1 105．

[5] 王 勤，侯鐵軍.HPLC法測定鎖陽中原兒茶酸的含量[J].中國藥房，2007，18（15）：1 170．

Content Determination of Catechin and Epicatechin in Compound Catechu Tinctureby HPLC

LONG Xiao-hong，F(xiàn)AN Wei-dong
（The Second Affiliated Hospital of Chongqing Medical University，Chongqing 400010，China）
ZHENG Jiao-ni
（Dept.of Pharmacy，Chongqing Fourth People’s Hospital，Chongqing 400014，China）

OBJECTIVE：To establish the method for the content determination of catechin and epicatechin in Compound catechu tincture.METHODS：HPLC method was adopted.The determination was performed on YMC ODS（250 mm×4.6 mm，5μm）column with mobile phase consisted of 0.04 mol·L－1citric acid solution-N，N-dimethylformamide-tetrahydrofuran（45∶8∶2，V/V/V）at the flow rate of 1.0 mL·min－1.The detection wavelength was 280 nm and column temperature was 35℃.RESULTS：The linear range of catechin and epicatechin were 0.051 8～0.259 0 mg·mL－1（r＝0.999 9）and 0.010 1～0.203 0 mg·mL－1（r＝0.999 9）.The average recoveries were 101.63%（RSD＝1.27%，n＝9）and 100.49%（RSD＝1.12%，n＝9）.CONCLUSION：The method is simple，accurate and stable for quality control of Compound catechu tincture.

HPLC；Compound catechu tincture；Catechin；Epicatechin；Content determination

R283.662；R927.2

A

1001-0408（2012）43-4093-03

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2012.43.24

2012-01-30

2012-09-14）