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    正交設計優(yōu)選延胡索中延胡索乙素及原阿片堿的最佳提取工藝

    2012-11-29 08:00:46敖志遠
    中國民族醫(yī)藥雜志 2012年2期
    關鍵詞:乙素延胡索阿片

    敖志遠

    (阜新蒙藥有限責任公司,遼寧 阜新 123000)

    延胡索為罌粟科植物CorydaLis yanhusuo W.T.Wang的干燥塊莖,其味辛、苦,溫,歸肝、脾經(jīng),具有活血、利氣、止痛之功效,用于胸脅、脘腹疼痛、經(jīng)閉通經(jīng)、產(chǎn)后瘀阻、跌撲腫痛等[1]。延胡索的主要活性成分為生物堿,其具有強烈的生理活性,可擴張冠狀動脈,具有一定的中樞鎮(zhèn)靜作用,故急需建立一種簡單可行,穩(wěn)定性高的提取延胡索中生物堿的方法,為進一步研究其活性成分提供理論依據(jù)。在本試驗過程中,我們以不同濃度的乙醇為提取溶劑,不同提取時間,不同提取次數(shù)和溶劑用量為因素,用L9(34)正交設計,以延胡索乙素含量,原阿片堿含量,提取液的得膏率為指標,選擇最佳的提取工藝。

    1 儀器與試藥

    HSS型電子恒溫水浴鍋:上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠;

    RE-52AA型旋轉蒸發(fā)器:上海亞榮生化儀器廠;

    SHZ-DⅢ型循環(huán)水式真空泵:鞏義市予華儀器有限責任公司;

    Agilent 1100 Series高效液相色譜儀(配有DAD、自動進樣器)、ChemStation工作站(Agilent科技有限公司);

    HS6150型超聲波清洗器(天津恒奧科技發(fā)展有限公司);CP225D電子分析天平(德國Sartorius,十萬分之一);

    延胡索藥材(由遼寧省本溪三藥有限公司提供),經(jīng)遼寧中醫(yī)藥大學中藥鑒定教研室翟延君教授鑒定為罌粟科植物CorydaLis yanHusuo W.T.Wang的干燥根;

    延胡索乙素(供含量測定用,購自中國藥品生物制品檢定所,批號 110726-201011);

    原阿片堿(供含量測定用,購自中國藥品生物制品檢定所,批號 110853-200402);

    甲醇(色譜純,購于天津市科密歐化學試劑開發(fā)中心);

    其它試劑均為分析純。

    2 方法與結果

    2.1 正交實驗法優(yōu)選延胡索提取工藝:選用L9(34)因素水平表,結合成分性質及生產(chǎn)實際選擇乙醇濃度,乙醇用量,提取時間,提取次數(shù)為因素,各因素水平見表1[2-4]。根據(jù)正交安排9種提取工藝,見表2。

    2.2 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

    色譜柱:Agilent TC-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm);流動相:甲醇-磷酸鹽溶液(64:36)流速:1 mL·min-1;柱溫:25℃;檢測波長:283 nm。

    2.3 對照品溶液的制備

    精密稱取延胡索乙素對照品適量,加甲醇制成0.104 mg·mL-1的溶液,作為對照品溶液。

    精密稱取原阿片堿對照品適量,加甲醇制成0.094 mg·mL-1的溶液,作為對照品溶液。

    2.4 供試品溶液的制備

    等量稱取9份樣品各100g,以表3的9種工藝組合進行乙醇回流提取,備用。

    2.5 驗證和補充試驗:為了判定A1B2C3D1結果是否最佳,對上述因素和水平有待于驗證;由于溶劑用量影響顯著,又以6倍量提取最好,因為又增加了4倍和12倍提取試驗,結果見表4。量)×0.4;原阿片堿評分(Y)=(原阿片堿含量/最大原阿片堿含量)×0.4;干膏收率評分(M)=(干膏收率/最大干膏收率)×0.2;綜合評分(Z)=X+Y+M

    表2 延胡索提取條件正交試驗表

    表3 方差分析

    方差分析:由直觀分析表3和方差分析表4,可知A因素對延胡索提取工藝有顯著性影響,各因素作用主次為A>B>C>D,A因素中以A1最大,B,C,D因素均無顯著性影響,綜合考慮工藝成本最終確定最佳工藝為A1B2C3D2,即最佳提取工藝為:6倍量70%乙醇提取2次,2h。

    表4 驗證補充試驗

    表4 結果表明,正交試驗優(yōu)選條件A1B2C3D2經(jīng)驗證結果,比正交表內9份樣品提取效果都好,增加溶劑用量可以提高提取效果,減少溶劑用量即降低提取效果,綜合考慮工藝成本最終仍確定最佳提取工藝為A1B2C3D2,即最佳提取工藝為:6倍量70%乙醇提取2次,2h。

    3 討論

    3.1 延胡索為臨床常用藥,其主要活性成分為生物堿,延胡索中生物堿具有鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、抗?jié)冏饔谩⒁种莆阜置?、解痙及增加冠脈血流量,抗心律失常等作用。延胡索生物堿含量較低,其在酸水或乙醇中有較好的溶解性能。為充分提高生物堿的利用率,采用乙醇回流提取,進行正交試驗法優(yōu)選提取工藝,為延胡索的臨床合理應用及其進一步研究開發(fā)打下良好的基礎[5-7]。

    3.2 應用多指標正交設計法試驗進行工藝優(yōu)選時,首先要解決指標間量綱不一致和指標間的矛盾問題。針對指標間的重要性差異給出各指標權重系數(shù),然后進行綜合評分分析。故本試驗將指標的權重系數(shù)設為延胡索乙素含量為0.4、原阿片堿含量為0.4 ,出膏率為0.2。綜合評分后,數(shù)據(jù)間具有顯著性差異,綜合考慮工藝成本最終確定最佳工藝為6倍量70%乙醇提取2次,每次2小時。對該提取方法進行方法學分析,結果均表明該方法穩(wěn)定可行??蔀檠雍鞯倪M一步開發(fā)提供理論依據(jù)。

    3.3 本試驗亦考察了2010版藥典所用含量測定方法及乙腈-水系統(tǒng),發(fā)現(xiàn)該法易出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象。且流動相配制復雜,故本試驗選取甲醇-磷酸鹽溶液(64:36)為流動相,流動相現(xiàn)配現(xiàn)用,條件穩(wěn)定,峰形佳,分離度好,理論塔板數(shù)達到要求。經(jīng)過方法學試驗表明該工藝穩(wěn)定可行,并且延胡索中2種生物堿得率較高,從而有利于提高對延胡索的綜合利用。

    [1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].北京:人民衛(wèi)生出版社,2010:94.

    [2]黃春青,林亞平,靳鳳云,等.均勻設計法結合藥效學指標優(yōu)選金鐵鎖提取工藝[J].中國中藥雜志,2008,33(15):1817-1820.

    [3]張志國,歐陽榮,黃曉霞,等.正交設計優(yōu)選抗瘤升白片的提取工藝[J].中國實驗方劑學雜志,2002,8(2):1-3.

    [4]張紹軒,李勇,黃青,等.用正交試驗優(yōu)選鹽酸乙醇回流法提取麻黃的工藝研究[J].中成藥,2008,30(5):758-760.

    [5]廖維,夏新.華延胡索提取工藝的研究[J].中成藥,2004,26(10):6-8.

    [6]王寧寧,焉媛媛,李月,等.不同提取方式對天麻復方中藥的藥效學影響[J].中藥材,2007,30(4):452-454.

    [7]李麗,周軍,張瑩,等.多指標綜合評分法優(yōu)化痛風寧顆粒提取工藝[J].中成藥,2007,29(2):281-285.

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