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    HPLC法測(cè)定朱格倫烏日-6中羥基紅花黃色素A的含量

    2012-11-29 08:00:44王明新朱艷紅
    中國(guó)民族醫(yī)藥雜志 2012年2期
    關(guān)鍵詞:烏日黃色素紅花

    王明新朱艷紅

    (1.內(nèi)蒙古呼倫貝爾市人民醫(yī)院,內(nèi)蒙古 海拉爾 021000;2.通遼市藥品檢驗(yàn)所,內(nèi)蒙古 通遼 028000)

    朱格倫烏日-6是由蓮子、石榴、肉桂、豆蔻、蓽茇、紅花六味藥組成的復(fù)方蒙藥制劑。功能主治為使反常之精華歸位,調(diào)經(jīng)。用于由赫依所致的白帶過多,月經(jīng)淋漓,腰腎部疼痛,不消化引起的胃痛等病。紅花為該方中主要成份之一,具有活血通經(jīng),散瘀止痛功效。對(duì)本方的臨床療效有重要作用,以紅花中主要有效成分羥基紅花黃色素A為定量監(jiān)控指標(biāo)可有效地控制產(chǎn)品的質(zhì)量。本文采用HPLC法測(cè)定其中羥基紅花黃色素A的含量,方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好。可作為質(zhì)量控制的方法。

    1 儀器、試劑和藥品

    島津LC-10AT高效液相色譜儀,SPD-10Avp檢測(cè)器、CTO-2A柱溫箱、SIL-HTA自動(dòng)進(jìn)樣器、CLASS-VP工作站組成。甲醇、乙腈為色譜純,水為高純水,磷酸為分析純。羥基紅花黃色素A(批號(hào):111637-200503購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。朱格倫烏日-6批號(hào):20061208 20090606 20090612由呼倫貝爾市蒙醫(yī)院制劑室提供。

    2 方法和結(jié)果

    2.1 色譜條件:色譜柱:phenomenexC18柱(250mm×4。6mm,5μm),流動(dòng)相為甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液(26:2:72),檢測(cè)波長(zhǎng)為 403nm,流速為 1.0mL·min-1,進(jìn)樣量 10μL。

    2.2 溶液的制備

    2.2.1 對(duì)照品溶液制備:精密稱取羥基紅花黃色素A對(duì)照品適量,加50%甲醇制成每1mL含羥基紅花黃色素A 0.04275mg·mL-1。

    2.2.2 供試品溶液:取朱格倫烏日-6,研細(xì),取粉末2g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入50%甲醇50mL,密塞,超聲(功率90W,頻率59kHz)處理40min,放冷,過0.45μm微孔濾膜取續(xù)濾液,即得。

    2.2.3 陰性樣品溶液:按照朱格倫烏日-6的制備工藝制備不含紅花的陰性樣品,并按“2.2.2”項(xiàng)下方法制成陰性樣品溶液。

    2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn):取對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性樣品溶液,在上述色譜條件下進(jìn)樣分析,理論塔板數(shù)按羥基紅花黃色素A峰計(jì)算不低于3000。樣品中其他成分對(duì)羥基紅花黃色素A的測(cè)定無(wú)干擾。結(jié)果見圖1。

    圖1 羥基紅花黃色素A對(duì)照品(A)、樣品(B)、缺紅花陰性樣品(C)高效液相色譜圖

    2.4 線性關(guān)系考察:精密吸取配制好的對(duì)照品溶液2、6、8、10、15、20、30μL分別進(jìn)樣。以峰面積A為縱坐標(biāo),以對(duì)照品進(jìn)樣量X(μg)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。羥基紅花黃色素A進(jìn)樣量在0.0855~1.2825μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好?;貧w方程為Y=3045787.8X-71952.8 r=0.999。

    2.5 精密度試驗(yàn):取取“2.2.1”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液,在上述色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣6次,羥基紅花黃色素A色譜峰面積的RSD(n=6)為0.42%。

    2.6 重復(fù)性試驗(yàn):取樣品粉末6份,按“2.2.2”項(xiàng)下方法操作,平行制備供試品溶液6份,在上述色譜條件下進(jìn)行分析測(cè)定。結(jié)果羥基紅花黃色素A含量的平均值(n=6)為1.09mg·g-1,RSD為0.9%。

    2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液,室溫放置,分別于0,2,4,6,8,12,24h 按上述色譜條件測(cè)定。測(cè)得羥基紅花黃色素A峰面積的RSD(n=6)1.6%。結(jié)果表明供試品溶液室溫旋轉(zhuǎn)24h內(nèi)穩(wěn)定。

    2.8 回收率試驗(yàn):精密稱取已知含量的樣品約1g,共6份,分別精密加入羥基紅花黃色素A對(duì)照品溶液適量,按“2.2.2”項(xiàng)下方法操作,測(cè)定含量,并計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。羥基紅花黃色素A平均回收率(n=9)為100.1%。

    表1 朱格倫烏日-6中羥基紅花黃色素A的回收率

    2.9 樣品測(cè)定:取朱格倫烏日-6,按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,在上述色譜條件下進(jìn)樣分析,記錄色譜峰面積,計(jì)算含量。結(jié)果見表2。

    表2 朱格倫烏日-6中羥基紅花黃色素A的含量測(cè)定結(jié)果(n=3)

    3 討 論

    3.1 試驗(yàn)對(duì)提取方法、提取時(shí)間進(jìn)行了考察,結(jié)果采用50%甲醇超聲提取40min進(jìn)行供試品溶液的制備,該法提取效能高,干擾物質(zhì)少,操作簡(jiǎn)單、快捷。

    3.2 配制一定濃度的羥基紅花黃色素A對(duì)照品溶液,分別在200~500nm波長(zhǎng)內(nèi)進(jìn)行全掃描,羥基紅花黃色素A在403nm處有較強(qiáng)的紫外吸收。實(shí)驗(yàn)選擇403nm進(jìn)行測(cè)定。

    3.3 本文建立了一種準(zhǔn)確可靠、專屬性強(qiáng)、簡(jiǎn)單快捷的定量方法,通過對(duì)黃芩苷的含量測(cè)定,達(dá)到控制該制劑質(zhì)量的目的。

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