HPLC法測定蒙藥材小秦艽花中龍膽苦苷的含量

李海歐唐傳禹宋宏春

（1.內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010000;2.內(nèi)蒙古食品藥品檢驗(yàn)所，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010000）

小秦艽花原植物載于十八世紀(jì)蒙醫(yī)伊希巴拉珠爾著《認(rèn)藥白晶鑒》。稱：“（邦占）生于沼澤地，葉小，橢圓狀，莖細(xì)。據(jù)花色分為白、藍(lán)、黑三種?！笔攀兰o(jì)蒙藥學(xué)家占布拉道爾吉著《無誤蒙藥鑒》載：“初秋時節(jié)生于潮濕草灘，性狀同上（白花龍膽）但葉小，花淡藍(lán)色?！蔽墨I(xiàn)報(bào)道[3]，藥材中含有主要有效成分龍膽苦苷，為了考察本藥材的質(zhì)量，故對其有效成分龍膽苦苷建立了含量測定。經(jīng)方法學(xué)考察和對2批樣品的測定結(jié)果表明，本法操作簡單，重復(fù)性好；龍膽苦苷化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，可作為本藥材的質(zhì)量控制指標(biāo)。

1 儀器與試劑

1.1 儀器：高效液相色譜儀為島津LC-20A；二極管陣列檢測器；色譜數(shù)據(jù)工作站為LC-solution。

1.2 試劑試藥：龍膽苦苷對照品：購于中國藥品生物制品檢定所，批號：110770-200611；小秦艽花：分別采集于內(nèi)蒙古大青山蜈蚣壩、內(nèi)蒙古呼和浩特市和林格爾縣南天門，經(jīng)內(nèi)蒙古食品藥品檢驗(yàn)所標(biāo)本館周凱主任、內(nèi)蒙古食品藥品檢驗(yàn)所蒙藥室康雙龍主任鑒定均為正品。甲醇為色譜純，其他均為分析純試劑。水為純化水。

2 方法學(xué)考察

2.1 色譜條件：十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（Allitima，Apollo 5μm 4.6mm×250mm）的硅膠柱；流動相：甲醇-水（25∶75）；流速：1.0mL·min-1；檢測波長270nm，理論板數(shù)按龍膽苦苷峰計(jì)算應(yīng)不低于5000。

2.2 供試品溶液的制備：供試品溶液的制備 取本品粗粉約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率40kHz）30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3 對照品溶液的制備：取龍膽苦苷對照品適量，精密稱定，置量瓶中，加甲醇制成每1mL含0.1mg的溶液，即得。

2.4 專屬性考察：精密吸取甲醇空白溶劑，龍膽苦苷對照品溶液，供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀。龍膽苦苷對照品色譜峰峰純度好，紫外光譜最大吸收為274nm；供試品溶液中龍膽苦苷色譜峰保留時間與龍膽苦苷對照品一致，峰純度及分離度好，紫外光譜與龍膽苦苷對照品一致，在274nm處有最大吸收。甲醇空白溶劑無吸收。表明該含量測定方法專屬性好，空白溶劑無干擾。結(jié)果見圖4。（見圖A B C）

2.5 線性關(guān)系考察：按2.3對照品溶液制備方法，精密稱取龍膽苦苷對照品2.363mg，置25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度（濃度為：94.52μg·mL-1）。精密吸取對照品溶液 2.0、4.0、6.0、8.0、10.0μL，注入高效液相色譜儀，記錄峰面積值，與進(jìn)樣量做線性回歸。結(jié)果表明龍膽苦苷在189.04～945.20ng范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。線性回歸方程為y=1280.416x-278.950；r=1.000。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，分別在放置 0、4、8、12、18、24(h)，注入液相色譜儀，記錄峰面積值，結(jié)果表明龍膽苦苷在24h內(nèi)的面積積分值基本穩(wěn)定不變。RSD為0.24(%)。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批樣品按供試品溶液制備方法制備6份樣品溶液，分別注入液相色譜儀測定峰面積，計(jì)算含量，結(jié)果平均含量為0.0973%,RSD為0.44%。

2.8 精密度試驗(yàn)：取同一批樣品，分別注入液相色譜儀測定峰面積，RSD=0.20%，結(jié)果顯示精密度試驗(yàn)良好。

2.9 回收率試驗(yàn)：取同一批已知含量的樣品6份，每份取0.75g（正常量的一半），精密稱定，分別精密加入龍膽苦苷對照品適量，按供試品溶液制備方法制備樣品溶液，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，分別注入液相色譜儀測定含量，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收試驗(yàn)驗(yàn)證結(jié)果

3 樣品含量測定

就內(nèi)蒙古大青山、南天門采集的2批樣品采用標(biāo)準(zhǔn)草案確定的【含量測定】項(xiàng)下測定龍膽苦苷的含量（含量測定結(jié)果為按干燥品計(jì)算），結(jié)果見表2。

圖A 空白溶劑色譜圖

圖B 對照品色譜圖

圖C 供試品色譜圖

4 討論

4.1 檢測波長的選擇：采用島津LC-20A二極管陣列檢測器，在200～400nm波長范圍掃描。結(jié)果龍膽苦苷在274nm有最大吸收；結(jié)合《中國藥典》2010年版一部秦艽項(xiàng)下含量測定方法，選擇270nm作為檢測波長。

4.2 研究表明，采用此方法操作簡便，重現(xiàn)性好，可作為該品種的質(zhì)量控制內(nèi)在指標(biāo)。

[1]國家藥典委員會.中國藥典2010年版一部[M].中國醫(yī)藥科技出版社.

[2]衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)蒙藥分冊[S].

[3]師彥平.小秦艽花化學(xué)成分研究[J].高等學(xué)?；瘜W(xué)學(xué)報(bào)，1992,10:1258-1261.