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    蒙藥嘎日迪對大鼠腸黏膜屏障功能修復(fù)的實(shí)驗(yàn)研究△

    2012-11-29 08:00:44裴凌鵬龐宗然劉同祥李樹春
    中國民族醫(yī)藥雜志 2012年2期
    關(guān)鍵詞:粘膜細(xì)菌陽性

    崔 箭 裴凌鵬 龐宗然 劉同祥 李樹春

    (中央民族大學(xué) 中國少數(shù)民族傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)研究院,北京 100081)

    潰瘍性結(jié)腸炎屬蒙醫(yī)結(jié)腸“寶日病”范疇,蒙醫(yī)認(rèn)為該病的發(fā)生與多種因素有關(guān),其內(nèi)因是致病“三要素”和琪素、希日烏素。外因是飲食不當(dāng)、精神刺激、感染等均可傷及腸胃,腸胃傷則運(yùn)化失常,導(dǎo)致肝內(nèi)惡血(壞血或病血)增多,此惡血經(jīng)由胃時(shí)與巴達(dá)干結(jié)合,在小腸與希日合并最后到達(dá)結(jié)腸與赫依聚合,使腸功能失調(diào),損傷結(jié)腸脈絡(luò),使腸粘膜損傷,形成粘膜潰瘍而引發(fā)此病。寶日病熱邪久積結(jié)腸,使熱毒成“粘”,雍而為膿,至血敗肉腐產(chǎn)生潰瘍、出血等病理變化。因此,疏肝除濁,行氣消滯,消熱涼血,消“粘”解毒,活血化瘀,祛腐生肌是治療關(guān)鍵。內(nèi)服嘎日迪膠囊(主要由阿給、野罌粟等組成的蒙藥制劑),具有疏肝除濁,清除腑熱、消“粘”解毒、止痢、止痛等功效[1-2]。本文擬觀察嘎日迪膠囊對大鼠腸粘膜屏障功能損傷的修復(fù)作用,為其臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 主要試劑:嘎日迪膠囊(中央民族大學(xué)民族藥開發(fā)中試基地提供,批號010312,符合GPP標(biāo)準(zhǔn),臨用時(shí)充分研磨后用蒸餾水配成所需濃度的混懸液,主要成分為野罌粟堿、阿給黃酮);柳氮磺吡啶片(北京雙鶴制藥廠);超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒、還原型谷胱甘肽(GSH)試劑盒、丙二醛(MDA)試劑盒(購自南京建成生物工程研究所)。

    1.1.2 主要儀器:732-B型分光光度計(jì)(北京光學(xué)儀器廠);離心機(jī)(北京醫(yī)療儀器廠);全自動血液流變儀(日本日立公司);PS-2000全自動生化分析儀(美國Beckman公司)。

    1.1.3 實(shí)驗(yàn)動物:SD大鼠,體重200~250g,雌雄各半,合格證號:XKY-100215-10,購自中國軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物養(yǎng)殖中心。

    1.2 方法

    1.2.1 動物分組、造模與給藥:SD大鼠48只,雌雄各半,隨機(jī)分為4組,每組12只。正常對照組與模型組:每日灌胃蒸餾水20mL·kg-1;嘎日迪組:每日灌胃 0.6g·kg-1;陽性藥物組:每日灌胃0.4g·d-1。

    1.2.2 腸系膜淋巴結(jié)細(xì)菌培養(yǎng)及腸道細(xì)菌易位率計(jì)算:按無菌要求取回盲部腸系膜淋巴結(jié),稱重后加1mL無菌等滲鹽水制成勻漿,取均漿液0.1mL接種于血平板,孵育48h后計(jì)算菌落數(shù)。按國際通用標(biāo)準(zhǔn),以每克淋巴結(jié)組織菌落>100菌落形成單位為細(xì)菌移位陽性,計(jì)算各組腸道細(xì)菌易位率(即移位陽性動物個數(shù)/該組動物總數(shù)×100%)。

    1.2.3 血液流變學(xué)測定:于末次給藥后,腹主動脈取血,加抗凝劑全自動血液流儀檢測血液流變學(xué)各項(xiàng)指標(biāo)。

    1.2.4 血清內(nèi)毒素測定:分離血清后,按試劑盒說明書進(jìn)行血清內(nèi)毒素測定。

    1.2.5 血清GSH、SOD活性和MDA含量測定:按試劑盒說明書進(jìn)行上述三項(xiàng)指標(biāo)測定。

    1.2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:各組數(shù)據(jù)均用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件做統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,結(jié)果以 表示,應(yīng)用t檢驗(yàn)判定其差異。

    2 結(jié)果

    2.1 一般情況:實(shí)驗(yàn)期間各組動物進(jìn)食、飲水及生長狀況良好,經(jīng)連續(xù)灌胃20天未有死亡。實(shí)驗(yàn)開始與結(jié)束各組大鼠體重差別均無顯著性。

    2.2 腸道細(xì)菌易位率:為排除人為污染,實(shí)驗(yàn)將只有腹腔棉拭子培養(yǎng)陽性大鼠的腸系膜淋巴結(jié)培養(yǎng)結(jié)果才能作為細(xì)菌移位陽性率進(jìn)行計(jì)算。與對照組相比,模型組出現(xiàn)細(xì)菌移位率明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);而嘎日迪組與陽性藥物組均低于模型組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),具體試驗(yàn)數(shù)據(jù)見表1。菌種進(jìn)一步鑒定可知,腸系膜淋巴結(jié)培養(yǎng)陽性的細(xì)菌主要是以大腸桿菌為主的腸道寄生菌。

    2.3 血液流變學(xué)指標(biāo)變化:由表2可見,與對照組相比,模型組大鼠全血粘度、全血還原粘度和紅細(xì)胞聚集指數(shù)均升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),而紅細(xì)胞電泳指數(shù)降低,差異亦具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與模型組相比,嘎日迪組和陽性藥物組均具有改善大鼠高切變率下的全血粘度、低切變率下的全血粘度、高切變率下的全血還原粘度和低切變率下的全血還原粘度及紅細(xì)胞聚集指數(shù)的作用,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),同時(shí)可升高紅細(xì)胞電泳指數(shù),差異亦具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

    2.4 血清內(nèi)毒素水平變化:由表3可見,與對照組比較,模型組血清內(nèi)毒素水平明顯升高,差異顯著具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);與模型組比較,嘎日迪組和陽性藥物組均明顯降低,差異顯著具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

    表1 各組大鼠腸道細(xì)菌移位率

    表2 各組大鼠血液流變學(xué)變化(n=12, ±s)

    表2 各組大鼠血液流變學(xué)變化(n=12, ±s)

    注:與對照組比較:aP<0.05,存在差異;與模型組比較:bP<0.05,存在差異。

    組別全血粘度(mPa/s)10.00 50.00 150.00紅細(xì)胞電泳指數(shù)對照組模型組噶日迪組陽性藥物組11.01±0.79 13.27±0.87a 12.08±0.81b 12.10±0.77b 6.25±0.48 8.81±0.60a 7.17±0.52b 7.20±0.49b 5.11±0.45 6.90±0.55a 6.05±0.45b 6.02±0.46b 6.72±0.50 6.40±0.48a 6.56±0.46b 6.59±0.46b

    表2 (續(xù))各組大鼠血液流變學(xué)變化(n=12,±s)

    表2 (續(xù))各組大鼠血液流變學(xué)變化(n=12,±s)

    注:與對照組比較:aP<0.05,存在差異;與模型組比較:bP<0.05,存在差異。

    組別全血還原粘度(mPa/s)10.00 50.00 150.00紅細(xì)胞聚集指數(shù)對照組模型組噶日迪組陽性藥物組33.21±1.25 37.09±1.32a 35.47±1.26b 35.20±1.24b 17.09±1.08 20.22±1.20a 18.60±1.17b 18.43±1.15b 14.80±1.01 17.05±1.11a 16.27±1.03b 16.08±1.05b 6.08±0.48 6.37±0.50a 6.20±0.48b 6.18±0.46b

    表3 各組大鼠血清內(nèi)毒素水平變化(n=12,±s)

    表3 各組大鼠血清內(nèi)毒素水平變化(n=12,±s)

    注:與對照組比較:aP<0.01,差異顯著;與模型組比較:bP<0.01,差異顯著。

    組別 內(nèi)毒素(EU/L)對照組模型組噶日迪組陽性藥物組271.15±28.12 315.07±32.62a 289.57±29.40b 285.09±28.71b

    2.5 血清GSH、SOD活性與MDA含量變化:由表4可見,與對照組比較,模型組血清MDA含量明顯升高,GSH和SOD活性明顯降低,差異顯著具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);與模型組比較,嘎日迪組和陽性藥物組均明顯降低血清MDA含量,升高GSH和SOD活性,差異顯著具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

    表4 各組大鼠血清GSH、SOD活性和MDA含量水平變化(n=12,±s)

    表4 各組大鼠血清GSH、SOD活性和MDA含量水平變化(n=12,±s)

    注:與對照組比較:aP<0.01,差異顯著;與模型組比較:bP<0.01,差異顯著。

    組別 GSH(nmol/L) SOD(nmol/L) MDA(nmol/mL)對照組模型組噶日迪組陽性藥物組12.29±1.80 9.80±1.07a 11.07±1.07b 11.16±1.08b 189.50±6.11 156.21±4.73a 169.48±5.06b 171.09±5.09b 11.06±1.21 13.12±1.33a 12.26±1.30b 12.21±1.27b

    3 結(jié)論

    腸道不僅能消化、吸收營養(yǎng)物,而且對腸道細(xì)菌及其毒素具有重要的屏障作用。危重病人的腸道不是處于傳統(tǒng)所認(rèn)為的休眠狀態(tài),而是活躍地參與應(yīng)激反應(yīng)。一般情況,當(dāng)機(jī)體在應(yīng)激狀態(tài)下,存在由神經(jīng)-內(nèi)分泌介導(dǎo)的適應(yīng)性反應(yīng),即出現(xiàn)選擇性內(nèi)臟血管痙攣以保持心、肺及腦等重要臟器的血液供應(yīng),結(jié)果導(dǎo)致腸粘膜缺血、缺氧,血管通透性增加,粘膜上皮水腫,上皮細(xì)胞膜及細(xì)胞間連接斷裂,細(xì)胞壞死或凋亡,上皮從絨毛頂端開始脫落甚至粘膜全層脫落而形成潰瘍,導(dǎo)致腸通透性增加、腸道細(xì)菌易位及腸源性膿毒癥的發(fā)生,使之成為全身炎癥反應(yīng)綜合征的細(xì)菌來源,觸發(fā)多器官功能衰竭,甚至危及生命[3-6]。

    目前研究多以腸道細(xì)菌移位率及血清內(nèi)毒素水平等作為腸粘膜屏障功能的評價(jià)指標(biāo)[5]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,蒙藥嘎日迪膠囊可有效降低大鼠腸道細(xì)菌移位的發(fā)生與血清內(nèi)毒素含量,腸系膜淋巴結(jié)培養(yǎng)陽性的細(xì)菌主要是以大腸桿菌為主的腸道寄生菌。

    GSH和SOD均是機(jī)體重要的自由基對抗劑,而MDA為氧自由基攻擊生物膜不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的終產(chǎn)物,其值高低間接反映機(jī)體組織細(xì)胞受自由基損傷程度,因此上述三個指標(biāo)可作為評價(jià)機(jī)體抗氧化作用的主要依據(jù)[7-8]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,蒙藥嘎日迪膠囊具有良好的抗氧化作用,可明顯降低MDA含量,升高GSH和SOD活性,從而抵抗腸粘膜局部自由基損傷,降低粘膜上皮細(xì)胞的死亡率,減少潰瘍面,提高腸通透性。腸粘膜局部的血管通透程度以及血液流變性質(zhì)的改善對于粘膜屏障功能恢復(fù)具有重要的作用[9-10]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,蒙藥嘎日迪膠囊可降低高且變率下的全血粘度、低且變率下的全血粘度、高且變率下的全血還原粘度和低且變率下的全血還原粘度、紅細(xì)胞聚集指數(shù),同時(shí)升高紅細(xì)胞電泳指數(shù),具有較好改善腸粘膜局部缺血狀態(tài),提高血管的通透性。

    綜上而言,蒙藥嘎日迪膠囊具有很好修復(fù)腸粘膜屏障損傷的功能,為臨床應(yīng)用提供了可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù),究其作用機(jī)理尚需深入地探討。

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