高效液相色譜法測定蜂王漿含片中10－羥基-2-癸烯酸的含量

劉 蔚，宋衛(wèi)中，宋景芳

（1.河南大學附屬東京醫(yī)院 藥房，河南 開封475001；2.河南大學 中藥研究所，河南 開封475001）

蜂王漿含片是由鮮王漿經(jīng)冷凍干燥精制而成，具有抗疲勞、增強機體免疫力、養(yǎng)顏護膚［1］的功效。為更好地控制蜂王漿制劑中主要有效成分含量，采用高效液相色譜法，測定蜂王漿含片中的10－羥基-2-癸烯酸的含量［2－4］。

1 儀器、試藥與試劑

高效液相色譜儀（美國 Beckman）；10-羥基-2-癸烯酸對照品（中國藥品生物制品檢定所）；蜂王漿含片（自制）；其他試劑均為分析純。

2 含量測定

2.1 對照品溶液的制備

精密稱定對照品10－羥基-2-癸烯酸適量，加無水乙醇制成質(zhì)量濃度為0.05g／L溶液，即得。

2.2 供試品溶液的制備

取蜂王漿含片10片，研細，取細粉約1.0g，精密稱定，置25mL錐形瓶中，加入預先混合的溶液（0.03mol／L 鹽酸溶液1mL＋水2mL＋乙醇7mL），充分振搖，超聲處理10min，過濾，移入50mL容量瓶中，用乙醇定容，作為供試品溶液。

2.3 色譜條件與系統(tǒng)適用性實驗

選用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料，甲醇－0.03mol／L鹽酸溶液－水（55∶10∶5）為流動相，ODS柱（5mm×245mm，5μm），流量為1.0mL／min，檢測波長為210nm，理論板數(shù)按10-羥基-2-癸烯酸峰計算不低于2 500。

2.4 線性關(guān)系實驗

精密吸取10－羥基-2-癸烯酸對照品乙醇溶液2、6、10、14、18μL，按上述色譜條件測定，記錄峰面積積分值，以積分值為縱坐標，進樣量（μg）為橫坐標，求得回歸方程：Y＝45.646 1 X＋0.136 3，r＝0.999 6。10-羥基-2-癸烯酸在0.110～0.660μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。由于所得標準曲線系一條近乎過原點的直線，可采用外標一點法進行樣品的含量測定。

2.5 精密度實驗

按樣品測定方式對同一供試品溶液重復測定5次，記錄峰面積，RSD＝2.2%。

2.6 穩(wěn)定性實驗

分別于0.5、1、3、6、10h進行穩(wěn)定性測定，結(jié)果表明，于10h內(nèi)測定結(jié)果穩(wěn)定，RSD為0.87%。

2.7 空白實驗

取不含蜂王漿的空白片，按樣品測定法測定，結(jié)果在含10-羥基-2-癸烯酸對照品吸收峰位置無干擾。

2.8 樣品測定

取本品10片，研細，取細粉約1.0g，精密稱定，置25mL錐形瓶中，加入預先混合溶液（0.03mol／L鹽酸溶液1mL＋水2mL＋乙醇7mL），充分振搖，超聲處理10min，過濾，移入50mL容量瓶中，用乙醇定容，作為供試品溶液。另取10－羥基-2-癸烯酸對照品適量，加乙醇制成質(zhì)量濃度為0.05g／L的溶液，作為對照品溶液。分別精密吸取供試品溶液與對照品溶液各10μL，注入高效液相色譜儀，依法測定。3批蜂王漿含片測定結(jié)果表明，每片10-羥基-2-癸烯酸含量均在3.855mg以上，所以，本品蜂王漿含量（以10-羥基-2-癸烯酸計）不得少于3.5mg／片，結(jié)果見表1。

表1 樣品含量測定結(jié)果（n＝3）

2.9 重復性實驗

按照“樣品測定”項下的方法，對同一樣品進行多次測定，10-羥基-2-癸烯酸平均含量為3.867mg，RSD＝3.3%，n＝5。

2.1 0 加樣回收率實驗

精密稱取本品10片，研細，取細粉約0.25g，精密稱定，置25mL錐形瓶中，加入適量10-羥基-2-癸烯酸對照品，依“樣品測定”法測定，計算回收率。實驗結(jié)果顯示，平均回收率為100.12%，RSD 為1.36%。

3 討論

本文對蜂王漿含片中的主要有效成分10-羥基－2－癸烯酸建立了含量測定方法，結(jié)果可靠，對完善蜂王漿制劑的質(zhì)量標準有一定意義［5］。在選定的色譜條件下，主要有效成分10－羥基-2-癸烯酸與雜質(zhì)得到很好分離，操作方法簡便、快速、準確、精密度高，可作為蜂王漿制品的一種定量方法。

［1］宋衛(wèi)中，宋曉勇，劉蔚.蜂王漿的研究與臨床應(yīng)用［J］.中華實用中西醫(yī)雜志，2005，18（6）：917.

［2］劉曉華，孫文基.王漿酸的研究進展概況［J］.亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2006，2（11）：51－54.

［3］蔡柳，林親錄.蜂王漿中10-HDA的研究現(xiàn)狀及前景展望［J］.農(nóng)產(chǎn)品加工，2007（5）：23－25.

［4］農(nóng)業(yè)部蜂產(chǎn)品質(zhì)量檢驗測試中心.蜂產(chǎn)品檢測實用技術(shù)［M］.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2006：69－71.

［5］張敏，孫利華.我國保健品營銷的短視行為［J］.中國藥房，2005，16（13）：973.