紫外分光光度法測定金不換不同部位總黃酮含量

劉廣河，丁艷霞，李亞真

（河南大學藥學院 中藥教研室，河南 開封475004）

金不換別名土大黃（浙江）、綠當歸（江西）、大暈藥（四川）、血三七、化血蓮（江蘇）［1］，為蓼科（Polygonaceae）植物鈍葉酸模（Rumex obtusifolius L.）的干燥根及根莖。金不換生于山腳或山坡的近水旁，分布于河南、江蘇、浙江、江西、湖南、廣東、四川［2］，有清熱解毒、涼血止血、消瘀止痛的功效。治療熱毒瘡瘍、無名腫毒、蟲蛇咬傷、疥癬，血熱妄行之咯血、吐血、衄血等［3］?；瘜W成分研究表明該屬植物主含蒽醌和黃酮類化合物［4］，對金不換中總黃酮的含量測定未見報道。本文采用紫外分光光度法對其有效成分黃酮的含量進行了測定，為準確闡明金不換的藥用部位提供參考依據(jù)，為臨床應用提供科學的實驗依據(jù)。

1 材料與儀器

黃酮標準品蘆丁（中國藥品生物制品檢定所）；所用試劑亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉和乙醇皆為分析純；所用水為蒸餾水。

FA1004N電子天平（上海精密科學儀器有限責任公司）；循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長城科工貿有限責任公司）；UV-1600型紫外可見分光光度儀（北京瑞利分析儀器公司）。

2 方法與結果

2.1 供試品溶液的制備［5］

精密稱取藥材的根、莖、葉粉末各3.0g，分別置圓底燒瓶中，加體積分數(shù)為50%甲醇50mL，水浴加熱回流提取2h，抽濾，濾液不澄清，用0.45μm一次性濾膜過濾，置50mL容量瓶中，加體積分數(shù)為50%甲醇定容至刻度。振蕩搖勻，即得根、莖、葉3種供試品溶液。

2.2 標準溶液制備［6］

精密稱取蘆丁對照品0.020 9g，置100mL容量瓶中，緩慢加入體積分數(shù)為70%乙醇并使其溶解，定容至刻度，振蕩搖勻，配制成0.209g／L的標準溶液，備用。

2.3 測定波長選擇

精密量取蘆丁對照液2mL，置10mL量瓶中，加50g／L NaNO2溶液0.3mL，搖勻，放置6min，加100g／L Al（NO3）3溶液0.3mL，搖勻，放置6min，加40g／L NaOH溶液4mL，再用體積分數(shù)為30%乙醇液稀釋至刻度，搖勻，放置15min后置比色皿中，在波長400～600nm之間測定吸收譜，確定最大吸收波長為510nm。

2.4 穩(wěn)定性考察

按測定波長選擇項方法于510nm處測定吸光度，然后每隔30min測定吸光度，觀察根部供試品溶液吸光度變化情況并記錄，計算其RSD值。得RSD為2.35%。

2.5 標準曲線制備

精密吸取蘆丁對照液0.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5mL，分別置10mL容量瓶中，加50g／L NaNO2溶液0.3mL，振蕩搖勻，放置6min，加100g／L Al（NO3）3溶液0.3mL，振蕩搖勻，放置6min，再加40g／L NaOH溶液4mL，振蕩搖勻，用體積分數(shù)為30%乙醇定容至刻度，振蕩搖勻，放置15min后采用紫外分光光度法，置比色皿中在510nm處測定吸光度，以對照品濃度（g／L）為橫坐標，吸光度A為縱坐標，回歸方程Y＝11.464 X＋0.000 4，r＝0.999 7，蘆丁的線性范圍為0.031 35～0.073 15g／L（圖1）。

圖1 蘆丁標準曲線

2.6 精密度實驗

精密吸取蘆丁標準品溶液2.5mL置10mL容量瓶中，加50g／L NaNO2溶液0.3mL，搖勻，放置6min，加100g／L Al（NO3）3溶液0.3mL，搖勻，放置6min，加40g／L NaOH 溶液4mL，再用體積分數(shù)為30%乙醇稀釋至刻度，搖勻，放置15min后測其吸光度，重復測定5次，得吸光度的平均值為0.599，RSD 為0.16%。

2.7 加樣回收率實驗

精密量取已知含量的根部樣品3g，5份，按照“2.1”項處理樣品，得到根部供試品溶液，然后精密加入蘆丁對照品0.20mg。加50g／L NaNO2溶液0.3mL，振 蕩 搖 勻，放 置 6min，加 100g／L Al（NO3）3溶液0.3mL，振蕩搖勻，放置6min，再加40g／L NaOH溶液4mL，振蕩搖勻，用體積分數(shù)為30%乙醇定容至刻度（10mL），振蕩搖勻，放置15min后采用紫外分光光度法，置比色皿中在510nm處測定吸光度，得加樣回收率為100.5%，RSD值2.28%。結果見表1。

2.8 樣品測定

精密量取金不換根、莖、葉供試品溶液各2mL，分別置10mL容量瓶中，用體積分數(shù)為50%甲醇定容至刻度；再分別精密量取2mL置10mL容量瓶中，加50g／L NaNO2溶液0.3mL，振蕩搖勻，放置6min，加100g／L Al（NO3）3溶液0.3mL，振蕩搖勻，放置6min，再加40g／L NaOH溶液4mL，振蕩搖勻，用體積分數(shù)為30%乙醇定容至刻度，振蕩搖勻。因得到的試液有沉淀，故需過濾后放置15min，在510nm處測其吸光度，每個樣品平均測定2次，取平均值，并在標準曲線中計算其總黃酮含量。結果見表2。

表1 金不換加樣回收率實驗結果

表2 金不換不同部位總黃酮含量

3 討論

本實驗采用紫外分光光度法對地方性藥用植物金不換進行總黃酮含量測定。結果表明，地方性藥用植物金不換含有較高的黃酮，平均總黃酮含量在2.409 5%～1.489 7% ，其中根的黃酮含量明顯高于葉和莖。我們全面系統(tǒng)考查了地方性藥用植物金不換各部位總黃酮含量，對其進行了質量評價，從而為地方性藥用植物金不換的質量評價及其藥用開發(fā)提供更可靠的理論依據(jù)。

本實驗結果表明，該方法的穩(wěn)定性與精密度均較好，加樣回收率在100.5%，RSD為2.28%，說明方法準確、可靠，可用于地方性藥用植物金不換中總黃酮的測定。

［1］田代華，謝宗萬.實用中藥辭典［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2002：783－785.

［2］丁寶章，王遂義，高增義.河南植物志：第1冊［M］.鄭州：河南科學技術出版社，1988：323－324.

［3］何麗一，陳碧珠，肖培根.酸模屬中草藥的調查鑒定與成分分析［J］.藥學學報，1981，16（4）：289－293.

［4］張廣慶，趙海鵬，王振月，等.酸模屬植物的化學成分與藥理活性研究進展［J］.世界科學技術——中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2008，10（5）：89－91.

［5］赫錦錦，張木升，李欽，等.分光光度法測定杜仲雄花茶中總黃酮的含量［J］.河南大學學報：醫(yī)學版，2011，30（1）：11－13.

［6］孫佩霞，葉麗卡，張曉麗.比色法測定淫羊藿膠囊中總黃酮的含量［J］.遼寧藥物與臨床，1998，1（2）：59－60.