正交試驗(yàn)優(yōu)選癬濕凝膠制備工藝

鄧燕芬，龐廷媛，程國(guó)華（廣州醫(yī)學(xué)院附屬腫瘤醫(yī)院，廣州510095）

正交試驗(yàn)優(yōu)選癬濕凝膠制備工藝

鄧燕芬＊，龐廷媛，程國(guó)華#（廣州醫(yī)學(xué)院附屬腫瘤醫(yī)院，廣州510095）

目的：優(yōu)選癬濕凝膠的制備工藝。方法：在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，以乙醇與冰乙酸比例、浸漬時(shí)間、滲漉速度為考察因素，以總固體量和蛇床子素含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)優(yōu)選制備工藝。結(jié)果：最佳制備工藝為乙醇-冰乙酸（4∶1，V/V），浸漬時(shí)間56 h，滲漉速度0.2 mL·min－1。結(jié)論：該工藝簡(jiǎn)便、穩(wěn)定，可用于制備癬濕凝膠。

癬濕凝膠；蛇床子素；制備工藝

癬濕水劑是由土荊皮、蛇床子、百部、蟬蛻、斑蝥等12味中藥組成的外用制劑，具有抗真菌、抗細(xì)菌的作用，用于各種癬癥的治療，療效確切[1]。近年來，凝膠劑作為一種新型外用劑型，廣泛應(yīng)用于臨床皮膚病的治療和美容護(hù)膚，其具有涂展性好、無油膩感、不污染衣物、易于清洗，透皮、吸收速度比霜?jiǎng)┛斓忍攸c(diǎn)[2]。故筆者將該處方的水劑研制成凝膠劑，在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，篩選出對(duì)制備工藝影響較大的因素，采用正交試驗(yàn)優(yōu)化工藝條件。

1 儀器與試藥

BT125 D Sartorius電子天平（北京賽多利斯天平有限公司）；XSZ-7 G生物顯微鏡及槍型夜視攝像機(jī)（重慶光學(xué)儀器廠）；RW20 DZM.n強(qiáng)力流線型攪拌機(jī)（德國(guó)IKA公司）；GZX-9070 MBE數(shù)顯鼓風(fēng)干燥箱（上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）；QE-300中藥粉碎機(jī)（武義縣屹立工具有限公司）。

土荊皮（產(chǎn)地：廣東，批號(hào)：090909）、蛇床子（產(chǎn)地：河北，批號(hào)：090502），均購于廣東天誠(chéng)中藥飲片有限公司；大風(fēng)子仁（產(chǎn)地：安徽，批號(hào)：090612）、百部（產(chǎn)地：安徽，批號(hào)：090514）、鳳仙透骨草（產(chǎn)地：安徽，批號(hào)：090317）、斑蝥（產(chǎn)地：安徽，批號(hào)：090415），均購于廣東和翔制藥有限公司；防風(fēng)（產(chǎn)地：陜西，批號(hào)：090521）、吳茱萸（產(chǎn)地：貴州，批號(hào)：090625）、花椒（產(chǎn)地：安徽，批號(hào)：090313），均購于廣東廣弘醫(yī)藥有限公司；當(dāng)歸（產(chǎn)地：甘肅，批號(hào)：090709）、側(cè)柏葉（產(chǎn)地：廣東，批號(hào)：090306）、蟬蛻（產(chǎn)地：湖北，批號(hào)：090629），均購于廣州市白云健藥品有限公司；無水乙醇（分析純，成都市科龍化工試劑廠）；冰乙酸（優(yōu)級(jí)純，上?；瘜W(xué)試劑公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 癬濕凝膠的制備工藝

將處方中斑蝥粉碎成細(xì)粉，其余11味藥材粉碎成粗粉，與斑蝥粉末混勻，照流浸膏劑與浸膏劑項(xiàng)下的滲漉法[3]試驗(yàn)，用乙醇-冰乙酸（3∶1，V/V）的混合液作溶劑，浸漬48 h，緩緩滲漉，收集滲漉液1000mL，靜置；取上清液，濾過，加凝膠基質(zhì)適量，攪勻，灌裝，即得。

2.2 單因素試驗(yàn)

2.2.1 不同比例的提取溶劑對(duì)總固體量、蛇床子素溶出的影響分別取一個(gè)處方量的同批號(hào)藥材5份，用不同比例的乙醇-冰乙酸作溶劑，按“2.1”項(xiàng)下方法制成1000 mL癬濕凝膠，測(cè)定樣品中的蛇床子素含量[4]、總固體量[2]、醋酸含量[5]，結(jié)果見表1。

表1 不同比例的提取溶劑對(duì)蛇床子素和總固體物溶出的影響Tab 1Effects of extraction solution with different proportions on the dissolution of osthole and total solid matters

從表1可知，乙醇比例升高，樣品中蛇床子素含量升高，總固體量下降。由于質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定總固體量應(yīng)＞0.75 g，醋酸含量應(yīng)高于10.0%，而醋酸量太高，對(duì)皮膚刺激性較大，因此選擇乙醇-冰乙酸比例以4∶1或3∶1較為合適。而以乙醇-冰乙酸（3∶1，V/V）為提取溶劑比乙醇-冰乙酸（4∶1，V/V）為提取溶劑樣品中蛇床子素含量少約1%，總固體量卻多約7%，故初步選擇乙醇-冰乙酸（3∶1，V/V）為提取溶劑。

2.2.2 不同粒度的藥材對(duì)總固體量、蛇床子素溶出的影響

取同批號(hào)藥材適量，分成4組，每組一個(gè)處方量，分別將3組藥材粉碎成細(xì)粉、粗粉和1cm以下粗粒。另一組作為對(duì)照組。按“2.1”項(xiàng)下方法制成1000 mL癬濕凝膠，測(cè)定樣品中蛇床子素含量和總固體量，并觀察澄清度，結(jié)果見表2。

表2 不同粒度的藥材對(duì)蛇床子素和總固體物溶出的影響Tab 2 Effects of medicinal material with different granularity on the dissolution of osthole and total solid matters

由表2可知，藥材的粒度越細(xì)，越有利于總固體物、有效成分溶出。因此，宜于將藥材粉碎成粗粉或細(xì)粉。但藥材粒度太細(xì)，靜置較長(zhǎng)，且樣品中有輕微混濁，故藥材粒度選擇粗粉較為合適。

2.2.3 不同浸漬時(shí)間對(duì)總固體量、蛇床子素溶出的影響取同批號(hào)藥材適量，分為5組，每組一個(gè)處方量，按“2.1”項(xiàng)下方法分別浸漬24、32、48、60、72 h后滲漉，制成1000 mL癬濕凝膠，測(cè)定樣品中總固體量、蛇床子素含量，結(jié)果見表3。

表3 不同浸漬時(shí)間對(duì)總固體量、蛇床子素溶出的影響Tab 3Effects of different maceration time on the dissolution of osthole and total solid matters

由表3可知，浸漬48 h后滲漉，樣品的總固體量、蛇床子素含量沒有明顯的變化。從節(jié)省生產(chǎn)時(shí)間考慮，選擇浸漬48 h較為適宜。

2.2.4 不同滲漉速度對(duì)總固體量、蛇床子素溶出的影響取同批號(hào)藥材適量，分成6組，每組一個(gè)處方量，按“2.1”項(xiàng)下方法分別以0.2、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL·min－1速度滲漉，收集滲漉液1000 mL，測(cè)定樣品中總固體量、蛇床子素含量，結(jié)果見表4。

表4 不同滲漉速度對(duì)總固體量、蛇床子素溶出的影響Tab 4Effects of different percolation velocity on the dissolution of osthole and total solid matters

由表4可知，當(dāng)滲漉速度為0.2～1.0 mL·min－1時(shí)，總固體量、蛇床子素含量均無明顯變化，但滲漉速度為1.5～2.5 mL· min－1時(shí)，總固體量、蛇床子素含量均明顯減少。因此，滲漉速度應(yīng)為0.2～1.0 mL·min－1，即每分鐘1～5 mL·kg－1較為合適。2.2.5不同滲漉液收集量對(duì)總固體量、蛇床子素含量的影響

取一個(gè)處方量藥材，按“2.1”項(xiàng)下方法制備，分步收集滲漉液，每200 mL為一份，共收集8份，總量為1600 mL，測(cè)定滲漉液分別為200、400、600、800、1000、1200、1400、1600 mL時(shí)的總固體量和蛇床子素含量，并計(jì)算蛇床子素浸出率（浸出率＝（蛇床子素量/總浸出量）×100%），結(jié)果見表5。

表5 不同滲漉液收集量對(duì)總固體量、蛇床子素含量的影響Tab 5Effects of different percolate collection volume on the dissolution of osthole and total solid matters

由表5可知，滲漉液收集至總量800 mL時(shí)，總固體量、蛇床子素浸出率已近90%，至1000 mL時(shí)蛇床子素浸出率已近95%，從節(jié)省成本和生產(chǎn)時(shí)間考慮，收集滲漉液1000 mL較為合理。

2.3 正交試驗(yàn)優(yōu)選工藝

按處方量稱取藥材適量，在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，選取對(duì)工藝影響較大的3個(gè)因素，即乙醇與冰乙酸比例（A）、浸漬時(shí)間（B）、滲漉速度（C）進(jìn)行考察，以總固體量、蛇床子素含量為指標(biāo)，按正交試驗(yàn)L9（34）表安排試驗(yàn)[4]。因素水平見表6；正交試驗(yàn)結(jié)果見表7；方差分析結(jié)果見表8。

表6 因素水平Tab 6 Factors and levels

表7 正交試驗(yàn)結(jié)果Tab 7Results of orthogonal test

由表7、表8可知，以總固體量為指標(biāo)，最佳工藝條件為A1B3C1；以蛇床子素含量為指標(biāo)，最佳工藝條件仍為A1B3C1。各因素影響總固體量大小的順序?yàn)镃＞B＞A，影響蛇床子素含量的順序?yàn)锳＞B＞C。C因素對(duì)總固體量有顯著性影響（P＜0.05），而各因素對(duì)蛇床子素含量無顯著性影響，這可能與浸漬時(shí)間長(zhǎng)、滲漉速度慢有關(guān)。當(dāng)浸漬時(shí)間足夠長(zhǎng)、滲漉速度較慢時(shí)，一定量的提取溶劑已最大限度地提取出蛇床子素，增大提取溶劑的量也無法提高蛇床子素含量。提取最佳工藝條件為A1B3C1，即用乙醇-冰乙酸（4∶1，V/V）為溶劑，浸漬時(shí)間為56 h，滲漉液收集速度為0.2 mL·min－1。

表8 方差分析結(jié)果Tab 8 Results of analysis of variance

2.4 工藝穩(wěn)定性試驗(yàn)

為考察工藝穩(wěn)定性與合理性，以100倍處方量投料3批，按上述最佳工藝制備3批癬濕凝膠，并測(cè)定樣品的醋酸含量、總固體量和蛇床子素含量，結(jié)果見表9。

表9 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果Tab 9Results of verification test

由表9可知，醋酸含量在18.50%～19.45%范圍內(nèi)，總固體量均高于0.80g，蛇床子素含量在0.2017～0.3849mg·mL－1范圍內(nèi)，與正交試驗(yàn)結(jié)果相當(dāng)，表明優(yōu)選工藝合理、可行。

2.5 癬濕凝膠和癬濕藥水穩(wěn)定性對(duì)比試驗(yàn)

取處方量藥材10份，按“2.1”項(xiàng)下方法操作，收集得滲漉液10000 mL。取5份滲漉液，按上述最佳工藝制成癬濕凝膠；取5份滲漉液，按2010年版《中國(guó)藥典》（一部）癬靈藥水制備方法[3]制成癬濕藥水，于室溫下避光放置，于0、1、3、6、12月時(shí)考察蛇床子素含量、顏色、澄清度的變化情況。不同劑型的癬濕制劑穩(wěn)定性比較見表10。

表10 不同劑型的癬濕制劑穩(wěn)定性比較Tab 10 Comparison of the stability of different dosage forms of Xuanshi gelatin

由表10可知，放置12個(gè)月后，癬濕藥水和癬濕凝膠中的蛇床子素含量沒有明顯的變化，但癬濕藥水的顏色在放置過程中會(huì)產(chǎn)生變化，從暗黃綠色逐漸變?yōu)樽攸S色，且在放置6個(gè)月后會(huì)產(chǎn)生少量的沉淀。由此可見，癬濕凝膠較癬濕藥水更為穩(wěn)定。

3 討論

癬濕凝膠中土荊皮的主要成分為土荊皮酸；吳茱萸主含揮發(fā)油、內(nèi)酯等成分；防風(fēng)、當(dāng)歸、蛇床子、大風(fēng)子仁、花椒等的主要有效成分為揮發(fā)油；斑蝥主要成分為斑蝥素；側(cè)柏葉含揮發(fā)油、黃酮等成分；百部主含生物堿。上述藥材的成分多為脂溶性成分，易溶于乙醇。制備工藝中采用一定比例的乙醇進(jìn)行滲漉提取效果較好，且在提取工藝中，不同比例的乙醇-冰乙酸對(duì)有效成分蛇床子素的溶出影響較大。

滲漉一般以每分鐘1～5 mL·kg－1的速度收集滲漉液。癬濕凝膠處方中藥材總量為187.25 g，折算為滲漉速度應(yīng)為每分鐘0.2～1.0 mL。本試驗(yàn)以不同的滲漉速度進(jìn)行試驗(yàn)，考察滲漉速度對(duì)總固體量、蛇床子素溶出的影響，按滲漉法[6，7]操作要求，收集滲漉液，先收集藥材量85%的最初滲漉液，另器存放。繼續(xù)滲漉，收集繼得液約為藥材量的3～7倍。本處方藥材總量為187.25 g，按上述操作要求，先收集最初滲漉液液量約160mL（187.25×85%），再收集續(xù)得液約560～1300mL。本處方制成量為1000 mL，試驗(yàn)中分步收集滲漉液，分別測(cè)定其總固體量、蛇床子素含量，結(jié)果當(dāng)滲漉速度為0.2～1.0 mL· min－1時(shí)，總固體量、蛇床子素含量均無明顯差異，但滲漉速度為1.5～2.5mL·min－1時(shí)，總固體量、蛇床子素含量均明顯減少。因此，滲漉速度應(yīng)為0.2～1.0mL·min－1，即每分鐘1～5 mL·kg－1較為合適。

[1]孟楣，倪曉燕，馬格非.癬濕特效藥水質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中藥新藥與臨床藥理，2007，18（3）：230.

[2]王金鳳，蔡興東.中藥凝膠劑研究近況[J].中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥，2011，18（2）：14.

[3]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）[S].2010年版.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄11、附錄51、1239.

[4]黃美蘭，王希，黃榮林.高效液相色譜法測(cè)定癬濕藥水中蛇床子素的含量[J].廣東藥學(xué)，2003，113（3）：4.

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[6]韓強(qiáng)，呂冬梅，王來成.正交試驗(yàn)優(yōu)選淫羊藿總黃酮的提取工藝.[J].中國(guó)藥房，2008，19（30）：2347.

[7]黃泰康.中成藥學(xué)[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，1999：218.

Optimization of the Preparation Technology of Xuanshi Gelatin

DENG Yan-fen，PANG Ting-yuan，CHENG Guo-hua（The Affiliated Tumor Hospital of Guangzhou Medical College，Guangzhou 510095，China）

OBJECTIVE：To optimize the preparation technology of Xuanshi gelatin.METHODS：Based on single factor test，the preparation technology was optimized by orthogonal design with the ratio of ethanol to glacial acetic acid，maceration time and percolation velocity as factors using the contents of osthole and total solid matters as index.RESULTS：The optimal conditions for preparation was ratio of ethanol to glacial acetic acid of 4∶1（V/V），maceration time of 56h，percolation velocity of 0.2mL·min－1. CONCLUSION：The optimal technology is simple and stable，which can be used for the prepartion of Xuanshi gelatin.

Xuanshi gelatin；Osthole；Preparation technology

R284.2；R283.6

A

1001-0408（2012）27-2523-04

2012-03-15

2012-05-20）

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2012.27.10