國產(chǎn)蘭索拉唑藥代動力學(xué)研究

于維穎，孟 華，湯新強(qiáng)

消化性潰瘍是一種常見的消化系統(tǒng)疾病［1］，抑制胃酸分泌是治療該病的主要措施［2］。傳統(tǒng)的抗胃酸藥物主要是中和胃酸和抗組胺藥物，但其抑酸作用不夠強(qiáng)，潰瘍復(fù)發(fā)率高［3］。而質(zhì)子泵抑制劑(PPI)能高效抑制H+-K+-ATP酶，進(jìn)而強(qiáng)效抑制胃酸分泌［4-5］，臨床廣泛用于防治消化性潰瘍和損傷。但PPI治療后仍存在復(fù)發(fā)的問題，從根治潰瘍的觀點(diǎn)來看，不能說已有了理想的藥物［6］。本實(shí)驗(yàn)旨在通過研究國產(chǎn)蘭索拉唑的藥代動力學(xué)，以尋求簡單快捷的測定蘭索拉唑血藥濃度的方法，同時為臨床合理用藥提供依據(jù)。

1 儀器與設(shè)備

日本Shimadzu液相色譜儀;受試制劑:蘭索拉唑片，規(guī)格15 mg/片，揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)四川海蓉藥業(yè)有限公司產(chǎn)品，批號:041208;蘭索拉唑標(biāo)準(zhǔn)品和內(nèi)標(biāo)物4'-乙氧基苯己酮由天津武田藥品有限公司提供。乙腈、三乙胺為色譜純;乙醚、二氯甲烷、丙二醇為分析純;空白血漿由大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗(yàn)科提供。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 色譜條件 采用 HypersilBDS C18色譜柱(4.6 mm ×150 mm，5 μm);流動相為水-乙腈-三乙胺(620∶380∶1)，檢測波長為 285 nm，柱溫40℃，流速為1.0 mL/min。

2.2 血漿樣品處理 取空白血清(或加樣血清、血清樣品)0.5 mL，用萃取液乙醚-二氯甲烷(7∶3)5 mL，1 min 渦旋混勻，2 000 r/min 離心5 min，取上清液3.8 mL，再加入萃取液(二氯甲烷∶乙醚∶丙二醇)(60∶140∶1)0.5 mL，在35℃水溶液中用N2吹干，殘?jiān)昧鲃酉?0 μL渦旋重組溶解后，備用。

2.3 專屬性試驗(yàn) 分別將正常人的空白血清0.5 mL、5.0 μg/mL 蘭索拉唑二氯甲烷溶液10 μL和40 μg/mL 4'-乙氧基苯己酮的二氯甲烷溶液10 μL加入空白血清0.5 mL(1 min渦旋混勻)，再依“2.2”項(xiàng)下處理后，取20 μL 進(jìn)樣。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 具塞提取管內(nèi)分別加入5.0 μg/mL的蘭索拉唑的二氯甲烷溶液5、10、20、50、100、200 μL 及 40 μg/mL 的 4'-乙氧基苯己酮的二氯甲烷溶液10 μL，再分別加入正常人的空白血清0.5 mL，1 min渦旋混勻，每管內(nèi)蘭索拉唑的實(shí)際濃度為每1 mL血清含蘭索拉唑0.05、0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 μg，然后按“2.2”項(xiàng)方法提取后，取20 μL進(jìn)樣分析。用測得的蘭索拉唑峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積比值X(A蘭/A內(nèi))與蘭索拉唑的濃度(C)進(jìn)行線性回歸，計算回歸方程。

2.5 精密度的考查 分別配制含蘭索拉唑0.05、0.5、2.0 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)血清樣品，并分別于1 d內(nèi)及連續(xù)5 d內(nèi)按“2.2”項(xiàng)下處理，進(jìn)樣20 μL測定，經(jīng)計算求得其濃度，并得出標(biāo)準(zhǔn)偏差(SD)和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)。

2.6 回收率的測定 分別配制含蘭索拉唑0.05、0.5、2.0 μg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)血清樣品，按“2.2”項(xiàng)下血清樣品的處理與測定方法操作，取20 μL進(jìn)樣測定，以測得值與加入值之比計算相對回收率。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 將“2.6”項(xiàng)下的低、中、高3個濃度的標(biāo)準(zhǔn)血清樣品，分別于第1、2、3、4、5、6、7 及第10日測定蘭索拉唑濃度，考查血樣的放置穩(wěn)定性。

2.8 受試者蘭索拉唑血藥濃度的測定 受試者于試驗(yàn)前一日晚8:00開始禁食，試驗(yàn)當(dāng)日晨7:30空腹服藥30 mg，分別于服藥前(0 h)和服藥后0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、4.0、6.0、8.0、12.0 h取血3 mL，按“2.2”項(xiàng)下操作處理后，取20 μL 進(jìn)樣，測得每個受試者各時刻蘭索拉唑的血藥濃度。2.9 藥代動力學(xué)參數(shù) Cmax﹑Tmax采用實(shí)測值，其余數(shù)據(jù)由中國藥理學(xué)會數(shù)學(xué)藥理委員會所選用的3p97程序擬合求得。

3 結(jié)果

3.1 血藥濃度測定方法考查結(jié)果

3.1.1 專屬性試驗(yàn)的結(jié)果 見圖1(A)(B)。A為空白血清經(jīng)提取后進(jìn)樣的結(jié)果，在蘭索拉唑和內(nèi)標(biāo)峰的位置上無干擾成分出現(xiàn)。B為空白血清加標(biāo)準(zhǔn)品和內(nèi)標(biāo)物后結(jié)果，可見二峰分離完全，峰形尖銳，對稱，基線噪音小，保留時間分別為內(nèi)標(biāo)峰7.75 min、蘭索拉唑5.80 min。

圖1 液相色譜圖

3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備的結(jié)果

在0.05～2.0 μg/mL范圍內(nèi)，蘭索拉唑濃度C與峰面積比值X(A蘭/A內(nèi))成線性關(guān)系(見圖2)，回歸方程:C=0.632 9 X+0.0563 5(r=0.999 1)。最低檢測濃度為 0.05 μg/mL。

3.3 精密度考查結(jié)果 低、中、高3個濃度的蘭索拉唑標(biāo)準(zhǔn)血清樣品日內(nèi)及日間測定值RSD均＜10%，符合臨床生物樣品分析要求。見表1。

圖2 蘭索拉唑測定標(biāo)準(zhǔn)曲線(橫坐標(biāo):橫面積比)

表1 蘭索拉唑血藥濃度測定的重現(xiàn)性(n=5)

3.4 回收率測定結(jié)果 蘭索拉唑在0.05～0.2 μg/mL濃度范圍內(nèi)的相對回收率為94% ～96%。見表2。

表2 蘭索拉唑血藥濃度測定的準(zhǔn)確度(n=5)

3.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果 蘭索拉唑血清樣品在-20℃儲藏，第10日蘭索拉唑濃度下降16% ～26%，血清樣品7 d內(nèi)穩(wěn)定。見表3。

表3 蘭索拉唑血清樣品的儲存穩(wěn)定性

3.6 血藥濃度測定結(jié)果 受試制劑中蘭索拉唑的 AUC0→t、AUC0→∞分 別 為 (3.387 ± 1.225)、(3.533 ±1.237)h·μg/mL，Cmax為(0.918 ±0.252)μg/mL、Tmax、T1/2分別為(1.917 ± 0.583)、(2.081±0.771)h。蘭索拉唑的藥代動力學(xué)曲線符合一室開放模型。蘭索拉唑藥-時曲線見圖3。

圖3 蘭索拉唑血藥濃度-時間曲線

3 討論

蘭索拉唑是一種第二代質(zhì)子泵抑制劑，治療十二指腸潰瘍優(yōu)于H2受體拮抗劑，是治療十二指腸潰瘍的安全、有效的藥物。近年來已廣泛應(yīng)用于消化性潰瘍、反流性食管炎、上消化道出血等疾病的治療，是消化性潰瘍治療的首選藥物［7］。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用高效液相色譜法測定蘭索拉唑的血藥濃度，同時研究了國產(chǎn)蘭索拉唑在人體內(nèi)的藥代動力學(xué)參數(shù)。結(jié)果顯示，本方法測得的國產(chǎn)蘭索拉唑的人體藥代動力學(xué)參數(shù)與文獻(xiàn)報道測得的數(shù)據(jù)基本一致［8］。

高效液相色譜法測定蘭索拉唑的血藥濃度已有報道［9］。本實(shí)驗(yàn)在大量研究文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，改變了流動相的組成，縮短了實(shí)驗(yàn)的時間。實(shí)驗(yàn)中使用了新的內(nèi)標(biāo)物4'-乙氧基苯己酮，其二氯甲烷溶液穩(wěn)定，在實(shí)驗(yàn)條件下，峰形較好，且與蘭索拉唑分離完全，為蘭索拉唑測定中的內(nèi)標(biāo)物較為理想。蘭索拉唑的乙腈-水溶液經(jīng)紫外光譜掃描，在285 nm附近為一最大吸收平臺，實(shí)驗(yàn)選用乙腈和水做流動相，在此處對吸收無干擾，靈敏度高。流動相中加入三乙胺起抑制峰拖尾作用。流動相pH值控制在7.0左右，否則影響出峰時間。正常人口服蘭索拉唑后，其血藥濃度在測定范圍內(nèi)，靈敏度可達(dá)到測定要求。

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［5］彭幼英.蘭索拉唑聯(lián)合克拉霉素、阿莫西林治療消化性潰瘍臨床療效觀察［J］.實(shí)用藥物與臨床，2008，11(4):208-209.

［6］Kataoka H，Jho T，Itoh M.Recent topics on important drugs for H.pylori eradication:Omeprazole［J］.Nihon Rinsho，2005，63:333-337.

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