長(zhǎng)春西汀片溶出度測(cè)定方法的研究

黃文姝，李久旭，孟 莉，趙 娟，王 虹

長(zhǎng)春西汀是吲哚類生物堿藥物，廣泛用于缺血性腦血管疾病的治療［1］。長(zhǎng)春西汀片目前所執(zhí)行的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)仍為暫行部頒標(biāo)準(zhǔn)［WS-11(X-08)-93］，隨著制藥行業(yè)的發(fā)展，其所執(zhí)行的部頒標(biāo)準(zhǔn)已不能完全體現(xiàn)并控制產(chǎn)品的質(zhì)量。溶出度檢查項(xiàng)是口服固體制劑的必檢項(xiàng)目，部頒標(biāo)準(zhǔn)中該檢查項(xiàng)采用中國(guó)藥典溶出度檢查第一法，每籃中投入2片供試品，溶出液經(jīng)0.3 μm濾膜過(guò)濾后，采用分光光度法進(jìn)行測(cè)定。測(cè)定時(shí)每籃投入2片樣品的原因是為了滿足分光光度法測(cè)定濃度的需要。該方式反映的是2片的平均溶出情況，不能體現(xiàn)出一個(gè)制劑單位的溶出行為，顯然不符合溶出度檢查項(xiàng)的目的和要求，因此需要改進(jìn)。本文在原標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)上，對(duì)其溶出度方法進(jìn)行改進(jìn)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 日立L-2000高效液相色譜儀，ZRS-8G型藥物溶出儀，PE Lambda35紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)，賽多利斯天平型號(hào) MSU125P-100-DU及CPA2P，色譜柱為 C18柱(4.6mm ×250 mm，5 μm)。

1.2 試藥 長(zhǎng)春西汀對(duì)照品(東北制藥集團(tuán)股份有限公司，純度99.7%)，長(zhǎng)春胺乙酯對(duì)照品(東北制藥集團(tuán)股份有限公司，純度98.1%)，阿樸長(zhǎng)春胺對(duì)照品(東北制藥集團(tuán)股份有限公司，純度97.3%)，長(zhǎng)春西汀片(A廠家，批號(hào)分別為0909101、0911102、100101)，長(zhǎng)春西汀片(B 廠家，批號(hào)為090502);乙腈為色譜純，水為重蒸餾水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶出條件的選擇

2.1.1 溶出度試驗(yàn)條件的選擇 參照本品原部頒標(biāo)準(zhǔn)中的溶出度試驗(yàn)條件，采用溶出度測(cè)定第一法(中國(guó)藥典2010年版二部附錄XC)，以稀鹽酸12 mL，加水至500 mL為溶劑(即0.067 mol/L鹽酸)，轉(zhuǎn)速為100 r/min。

2.1.2 測(cè)定方法的選擇 長(zhǎng)春西汀片在224、270及314 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，見(jiàn)圖1?？紤]與本品含量測(cè)定項(xiàng)的一致性，采用280 nm作為測(cè)定波長(zhǎng)。本品中含有VC等輔料，如采用分光光度法，在225、270 nm波長(zhǎng)處對(duì)主成分的測(cè)定均有較大干擾，見(jiàn)圖2。在314 nm波長(zhǎng)處雖然輔料沒(méi)有干擾，但溶出液吸光度值＜0.3，不適于定量測(cè)定，考慮以上因素，采用HPLC法進(jìn)行本品溶出度測(cè)定。

圖1 長(zhǎng)春西汀紫外光譜圖

圖2 長(zhǎng)春西汀片輔料紫外光譜圖

2.2 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;0.2 mol/L醋酸銨溶液-乙腈(30∶70)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為280 nm。分別稱取長(zhǎng)春胺乙酯、阿樸長(zhǎng)春胺和長(zhǎng)春西汀對(duì)照品適量，置同一量瓶中，加0.067 mol/L鹽酸溶液溶解并稀釋制成每1 mL中均含10 μg的溶液，作為系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液，取50 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，長(zhǎng)春胺乙酯、阿樸長(zhǎng)春胺與長(zhǎng)春西汀之間的分離度均應(yīng)符合要求。理論板數(shù)按長(zhǎng)春西汀峰計(jì)算不低于3 000，見(jiàn)圖3。

圖3 長(zhǎng)春西汀片溶出度測(cè)定系統(tǒng)適用性圖譜

2.3 溶出度測(cè)定方法 取本品，照溶出度測(cè)定法(中國(guó)藥典2010年版二部附錄XC第一法)，以稀鹽酸 12 mL，加水至 500 mL為溶劑，轉(zhuǎn)速為100 r/min，依法操作，經(jīng)30 min時(shí)，取溶液適量，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液適量，作為供試品溶液，進(jìn)樣50 μL;另精密稱取長(zhǎng)春西汀對(duì)照品適量，用溶出介質(zhì)溶解并稀釋制成每1 mL中約含10 μg的溶液，作為對(duì)照品溶液，同法測(cè)定，計(jì)算每片的溶出量。限度為標(biāo)示量的85%，應(yīng)符合規(guī)定，相關(guān)圖譜見(jiàn)圖4。

2.4 輔料干擾試驗(yàn) 取本品輔料適量，用上述溶出介質(zhì)溶解后，按溶出度測(cè)定項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果表明，本品輔料對(duì)測(cè)定無(wú)干擾，見(jiàn)圖5。

圖4 長(zhǎng)春西汀片溶出度測(cè)定HPLC圖譜

圖5 長(zhǎng)春西汀片溶出度測(cè)定空白輔料HPLC圖譜

2.5 線性試驗(yàn) 取長(zhǎng)春西汀對(duì)照品適量，加上述溶出介質(zhì)溶解并稀釋制成濃度為3.0～15.0 μg/mL的溶液，按溶出度測(cè)定項(xiàng)下的色譜條件操作，以長(zhǎng)春西汀的峰面積(A)對(duì)濃度(C)進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程為A=83 984 C-2 830.8，相關(guān)系數(shù) r=0.999 7，結(jié)果表明，在3.12～15.11 μg/mL范圍內(nèi)，長(zhǎng)春西汀色譜峰面積與其濃度呈良好的線性關(guān)系。

2.6 回收率試驗(yàn) 分別按處方比例稱取本品輔料及相當(dāng)于主成分60%、80%及120%的長(zhǎng)春西汀對(duì)照品適量，加溶出介質(zhì)溶解并定量稀釋，按上述條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果本品的回收率為99.4%(n=9)，RSD=0.60%。

2.7 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn) 取任意溶出度測(cè)定溶液，分別于0、2、8、18 h進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明，溶液放置18 h，可保持穩(wěn)定。

2.8 溶出曲線均一性 取本品(批號(hào):100101)，依據(jù)溶出度測(cè)定法，分別在5、13、20、30和45 min取樣測(cè)定，6片樣品的溶出結(jié)果見(jiàn)圖6，表明樣品的溶出均一性良好，長(zhǎng)春西汀片各片溶出趨勢(shì)一致，從第二時(shí)間點(diǎn)開(kāi)始，溶出量的 RSD不超過(guò)10%，30 min時(shí)平均溶出量為 98.2%，RSD為3.3%。

圖6 長(zhǎng)春西汀片溶出曲線均一性(批號(hào):100101)

2.9 樣品累積溶出量測(cè)定 取上述4批樣品，按上述方法進(jìn)行累積溶出量測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 4批樣品累積溶出曲線結(jié)果(%，n=6)

3 討論

3.1 筆者對(duì)本品的溶出度分別采用中國(guó)藥典第一法(籃法)和第三法(小杯法)進(jìn)行了考察，結(jié)果表明，采用小杯法，不同廠家的長(zhǎng)春西汀片各批樣品的溶出量均在50%以下，均一性很差，不適合本品的測(cè)定。且小杯法是對(duì)于小規(guī)格固體制劑，當(dāng)紫外法檢測(cè)無(wú)法滿足測(cè)定要求時(shí)，從第二法(槳法)衍生而來(lái)，截至目前僅我國(guó)收載［2］。該方法對(duì)于某些活性成分無(wú)法滿足溶出度漏槽條件，不能真實(shí)反映藥品的質(zhì)量。因此，在建立溶出度方法時(shí)，通常的趨勢(shì)是盡量不采用小杯法，特別是仿制品種或擬出口的制劑品種，國(guó)際和國(guó)內(nèi)上推薦采用經(jīng)典且公認(rèn)的轉(zhuǎn)籃法及槳法。通過(guò)加大進(jìn)樣量，采用HPLC法等高靈敏度檢測(cè)手段，可滿足低濃度溶出液測(cè)定方法學(xué)驗(yàn)證的要求［3］。

3.2 長(zhǎng)春西汀在0.067 mol/L鹽酸中略溶，而溶出度試驗(yàn)漏槽條件通常規(guī)定為溶出介質(zhì)體積要大于溶解藥物主成分(制劑最大規(guī)格量)所需體積的3～5倍，以保證藥物溶出不受其溶解性的顯著影響，長(zhǎng)春西汀片的規(guī)格為5 mg/片，0.067 mol/L鹽酸作為溶出介質(zhì)則能夠滿足漏槽試驗(yàn)條件，因此，選擇該溶劑為溶出介質(zhì)。

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［1］張冬平，于燕.長(zhǎng)春西汀治療急性腦梗死療效觀察［J］.實(shí)用藥物與臨床，2008，11(5):297-298.

［2］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(二部)［S］.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010.

［3］謝沐風(fēng)，操洪欣.溶出度測(cè)定中的若干問(wèn)題［J］.中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志，2006，37(12):859-861.