HPLC法測(cè)定復(fù)方三七丸中有效成分的含量

梁盛

復(fù)方三七丸為我院自制的一種水蜜丸中藥制劑，是由中藥三七、元胡等組成，在臨床上具有活血化瘀、消腫止痛、舒絡(luò)通經(jīng)、強(qiáng)身健體的功效。主要用于治療跌打損傷，各種痛癥、血癥，潰瘍以及心血管等疾病。三七是復(fù)方三七丸中主要的藥物，復(fù)方三七丸中的三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1為該藥制的主要有效成分。本文通過使用高效液相色譜對(duì)本院自制的復(fù)方三七丸中有效成分的含量進(jìn)行測(cè)量，為更好的控制該藥的質(zhì)量制定了很好的方法，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 儀器與試藥 美國(guó)進(jìn)口高效液相色譜儀, 上海產(chǎn)電子分析天平，上海產(chǎn)超聲波清洗器，上海產(chǎn)索氏提取器[1]。

本院自制的復(fù)方三七丸樣品，三七皂苷R1的對(duì)照品，人參皂苷Rg1的對(duì)照品，人參皂苷Rb1的對(duì)照品，乙腈是色譜純，超純水，其它的試劑均為分析純。

1.2 方法

1.2.1 對(duì)照品溶液的制備方法[2]各取經(jīng)過進(jìn)行過減壓干燥的對(duì)照品：三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1適量，全部放置在量瓶中，加入甲醇溶液定容，配制成含量為每1毫升中含有三七皂苷R1為0.6毫克，人參皂苷Rg1為2.1毫克，人參皂苷Rb1為1.2毫克的混合溶液，搖晃均勻，制成了對(duì)照品溶液。

1.2.2 供試品溶液的制備方法 取復(fù)方三七丸，進(jìn)行研磨，制成細(xì)粉，過80目篩，精密稱取1 克復(fù)方三七丸的細(xì)粉,放置到索氏提取器中，加入適量的乙醚，放置水浴上進(jìn)行回流提取兩個(gè)小時(shí)，過濾除去乙醚液，將濾紙筒取出后揮發(fā)盡乙醚，將藥渣轉(zhuǎn)移到有塞的錐形瓶中，再精密量取并加入甲醇溶液100毫升，進(jìn)行稱定其重量，再進(jìn)行超聲處理30分鐘，取出放冷后，再進(jìn)行稱重，使用甲醇溶液補(bǔ)足揮發(fā)減失的重量，進(jìn)行過濾，取出續(xù)濾液制成為供試品的溶液。

1.2.3 系統(tǒng)適應(yīng)性的試驗(yàn)[3]為使試驗(yàn)順利進(jìn)行先進(jìn)性系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)，首先分別的精密吸取對(duì)照品溶液以及供試品的溶液各10 l，注入到液相色譜儀中，對(duì)照品溶液和供試品溶液出現(xiàn)了三個(gè)峰，是三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1，保留時(shí)間分別是7.21 分鐘、8.64 分鐘、15.93分鐘。

1.2.4 線性關(guān)系的考察 分別精密吸取使用對(duì)照品溶液的制備方法制備的對(duì)照品混和溶液分別取0.5毫升、1毫升、2毫升、4毫升、6毫升、8毫升，分別將其放置于10 ml的量瓶中，加入甲醇溶液稀釋至量瓶刻度線，再每瓶精密吸取10μl，依次進(jìn)樣后，記錄色譜圖。以色譜峰的面積做為縱坐標(biāo)(Y)，以溶液中的對(duì)照品質(zhì)量做為橫坐標(biāo)(X)，進(jìn)行回歸性運(yùn)算。

1.2.5 精密度的試驗(yàn) 進(jìn)行精密吸取對(duì)照品溶液10μl，連續(xù)進(jìn)樣五次，記錄色譜圖[4]，得出三七皂苷R1，人參皂苷Rg1，人參皂苷Rb1的峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。

1.2.6 穩(wěn)定性的試驗(yàn) 分別精密吸取對(duì)照品的溶液10μL,分別配置好后在0小時(shí)、1小時(shí)、2小時(shí)、4小時(shí)、6小時(shí)、8小時(shí)、12 小時(shí)進(jìn)樣進(jìn)行測(cè)定，記錄測(cè)量的色譜圖。

1.2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 分別精密稱取同一批次制作的復(fù)方三七丸的樣品五份，按照同樣的方法制備五份供試品的溶液并按色譜條件和系統(tǒng)適應(yīng)性的試驗(yàn)項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行分別測(cè)定。

2 結(jié)果

2.1 線性關(guān)系考察結(jié)果 測(cè)定出三七皂苷的R1、人參皂苷的Rg1、人參皂苷Rb1的回歸方程分別是：Y＝278.45X+7.987(r＝0.999 9)、 Y＝289.78X+20.156(r＝0.999 6)、 Y＝241.031 X＋13.341 (r＝0.999 8)，可得出三七皂苷的R1、人參皂苷的Rg1、人參皂苷Rb1的質(zhì)量分別在0.305g～6.156g、1.108g～21.382g、0.6135g～12.473g有良好的線性關(guān)系。

2.2 精密度試驗(yàn)結(jié)果 三七皂苷R1，人參皂苷Rg1，人參皂苷Rb1的峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差—RSD分別是0.72%，0.81%，0.62%，試驗(yàn)結(jié)果表明此試驗(yàn)的精密度良好。

2.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果 對(duì)照品中三七皂苷R1和人參皂苷Rg1以及人參皂苷Rb1的峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差—RSD分別是1.86%，1.58%，1.35%。試驗(yàn)結(jié)果表明此試驗(yàn)對(duì)三七丸中有效成分的測(cè)定，在對(duì)照品在進(jìn)行制備后十二小時(shí)內(nèi)進(jìn)行測(cè)定，實(shí)驗(yàn)結(jié)果均穩(wěn)定。

2.4 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果 試驗(yàn)結(jié)果表明復(fù)方三七丸中的三七皂苷R1，人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1的峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差—RSD分別是3.85%，2.56%和3.21%。試驗(yàn)結(jié)果表明此試驗(yàn)具有非常好的重復(fù)性。

3 討論

用高效液相色譜法對(duì)復(fù)方三七丸中有效成分的含量測(cè)定具有操作簡(jiǎn)便、方便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好的特點(diǎn),可用于復(fù)方三七丸中有效成分的含量檢測(cè)，并經(jīng)考察同樣適用于三七中藥材的質(zhì)量檢測(cè)。

[1]唐云,倪瑋燁,束志凌.HPLC法測(cè)定散結(jié)鎮(zhèn)痛膠囊中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1及人參皂苷Rb1的含量[J].藥學(xué)進(jìn)展,2009,33(7):328-329.

[2]張玲,李濤,李秀娟,等.HPLC法測(cè)定元胡及配伍藥對(duì)中元胡索乙素的含量[J].蘭州大學(xué)學(xué)報(bào),2007,33(2):48-51.

[3]李延雪,蘇玉娟,宋寶鵬.HPLC法測(cè)定元胡止痛片中延胡索乙素的含量[J].中國(guó)藥事,2006,20(9):544-545.

[4]陳玉霞,曾偉杰,楊麗雅.HPLC法快速測(cè)定三七提取物中皂苷的含量[J].現(xiàn)代食品科技,2010,26(7):753-755.