早搏靈膠囊對快速性心律失常家兔模型心肌Ca2+－ATPase活性的影響

陳波，郝景永，林紅

(1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150040;2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040)

心血管疾病是目前危害人類生命健康的主要疾病之一。其中，心律失常發(fā)生率相應(yīng)增多。中醫(yī)學(xué)對本病的病因、病機、辨證施治積累了豐富的臨床經(jīng)驗。本研究初步探討早搏靈膠囊防治快速性心律失常的作用機理，為中醫(yī)藥防治快速性心率失常的研究提供了客觀依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 健康新西蘭家兔24只，雌雄各半，體質(zhì)量(2.0±0.5)kg，購自黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗中心。飼養(yǎng)溫度17～24℃，通風(fēng)良好，溫度適宜，固體飼料，自由飲水。

1.2 實驗藥品與試劑 早搏靈膠囊(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院制劑室制備，批號20100205);鹽酸維拉帕米片(江蘇連云港制藥廠，批號100123);水合氯醛(青島宇龍海藻有限公司，批號20091216);注射用生理鹽水(黑龍江哈爾濱三聯(lián)藥業(yè)有限公司提供，批號201002);烏頭堿(中國藥品生物制品檢定所，批號110720－200910);ATP酶檢測試劑盒、考馬斯亮蘭蛋白測定試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號201003)。

1.3 實驗儀器與設(shè)備 電子分析天平(梅特勒－托利多儀器(上海)有限公司);心電機(655I型，上海KOHDEN電子有限公司);高速冷凍離心機(HITACHI himac CR21型，美國 Eppendorf公司);BECKMANDU640紫外分光光度儀(美國Pharmacia Biotech公司);電熱恒溫水溫箱(HH.W21.CU600，溫度范圍:37～65℃，上海醫(yī)療器械廠);低溫冰箱(MDF－U50V日本三洋公司);液氮罐(YDS.10型，成都金風(fēng)液容器有限公司)。

1.4 實驗方法

1.4.1 動物分組及給藥 新西蘭家兔隨機分為4組，每組各6只，各組在相同的條件下飼養(yǎng)。生理鹽水組:灌服生理鹽水5ml/kg;模型組:灌服生理鹽水5ml/kg;早搏靈組:灌服49.5mg/ml早搏靈溶液5ml/kg;維拉帕米組:灌服2.64mg/ml維拉帕米溶液5ml/kg。

1.4.2 心律失常持續(xù)時間測定 心律失常家兔模型的制備各組均在同等條件下飼養(yǎng)，均每日1次，連續(xù)2周給藥，末次給藥24h后，用10%水合氯醛(30mg/kg)腹腔注射麻醉后，背位固定。用針型電極刺入四肢，記錄心電圖(記錄標(biāo)準(zhǔn)肢導(dǎo)Ⅱ?qū)?lián)，紙速50mm/s);股靜脈緩慢注射 6μg/ml的烏頭堿 100μg/kg，1min內(nèi)注完，描記此時的心電圖，心律失常消失恢復(fù)竇性心律300s以上或者出現(xiàn)瀕死性心律失常后停止記錄。

1.4.3 Ca2+－ATPase測定 心電記錄完畢后，立即開胸，取出心臟，用冷0.9%氯化鈉溶液沖洗血液，放入用DEPC水處理過的EP管中，用液氮速凍，以－70℃低溫冰箱保存。實驗采用定磷法，通過測酶促反應(yīng)過程中無機磷的釋放量來測定心肌組織ATPase的活力，ATP酶可分解成ADP及無機磷，測定無機磷的量可判斷ATP酶的活力。考馬斯亮蘭蛋白含量測定原理:蛋白質(zhì)分子具有－NH3+基團，當(dāng)棕紅色的CBBG250顯色劑加入蛋白標(biāo)準(zhǔn)液或樣品時，考馬斯亮蘭染料上的陰離子與蛋白－NH3+結(jié)合，使溶液變?yōu)樗{色，通過計算吸光度可計算出蛋白含量。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理 所有數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料以(s)表示，采用單因素方差分析LSD－t檢驗，置信區(qū)間95%。

2 結(jié)果

2.1 各組家兔心律失常持續(xù)的時間 見表1。

表1 各組心律失常持續(xù)時間(s)

表1 各組心律失常持續(xù)時間(s)

注:與模型組比較，*P＜0.05;與維拉帕米組比較，▲P＞0.05。

組別 n 心律失常持續(xù)的時間(s)生理鹽水組6－模型組 6 53.65 ±4.45早搏靈組 6 24.43 ±3.05＊▲維拉帕米組 6 24.85 ±3.44*

經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析后顯示:早搏靈組、維拉帕米組與模型組經(jīng)檢驗具有正態(tài)性，方差齊。三組快速性心律失常持續(xù)時間經(jīng)單因素方差分析，具有顯著性差異(P＜0.05)。在此之后行LSD－t檢驗，其中維拉帕米組與模型組、早搏靈組與模型組比較，快速性心律失常持續(xù)時間均縮短，均有極顯著差異(P＜0.01);早搏靈組與維拉帕米組比較，差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，不能說明兩者對心律失常持續(xù)時間的影響有差異。

2.2 各組家兔心肌組織 Ca2+－ATPase的活性 見表2。

表2 各組家兔心肌組織Ca2+－ATPase活性(s)

表2 各組家兔心肌組織Ca2+－ATPase活性(s)

注:與生理鹽水組比較，▲P＜0.05;與模型組比較，◆P＜0.05;與維拉帕米組比較，●P＞0.05。

組別 n Ca2+－ATPase活性(μmolPi/mgprot/h)生理鹽水組1.820 ±0.042模型組 6 0.569 ±0.016▲早搏靈組 6 0.995 ±0.068▲◆●維拉帕米組 6 1.073 ±0.118 6▲◆

經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析后結(jié)果顯示，模型組與生理鹽水組比較，Ca2+－ATPase活性降低，經(jīng)獨立樣本t檢驗，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)，提示造模成功。早搏靈組、維拉帕米組與模型組Ca2+－ATPase活性比較經(jīng)單因素方差分析，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);之后行LSD－t檢驗，早搏靈組與維拉帕米組較模型組Ca2+－ATPase活性高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);早搏靈組Ca2+－ATPase活性低于維拉帕米組，無顯著性差異(P＞0.05)。早搏靈組，維拉帕米組分別與生理鹽水組Ca2+－ATPase活性比較，活性降低，經(jīng)獨立樣本t檢驗均有極顯著差異(P＜0.01)。

以上說明，早搏靈膠囊與維拉帕米均可提高心律失常家兔Ca2+－ATPase活性，但不能使之恢復(fù)至正常水平，且兩藥在提高家兔心律失常心肌Ca2+－ATPase活性方面無顯著差異。

3 討論

早搏靈膠囊方中以紅參為君藥，其性偏溫，更長于大補元氣又能生津、安神，為益肺補脾、安神益智之要藥。臣藥:黃芪為補氣之要藥。大補脾胃之元氣，與紅參相伍，補一身之氣令氣旺血行，瘀去絡(luò)通。麥門冬具有養(yǎng)陰生津、清心除煩之效。當(dāng)歸力能補血，又補中有行，為血中之氣藥。山楂即可消食化積，又能行氣散瘀。丹參善行血脈，祛瘀止痛，又有涼血安神，養(yǎng)心定志之功。三臣藥活血而無耗血之慮，補血而無留瘀之弊。佐藥:青皮辛散溫通，苦泄下行而奏疏肝理氣，散結(jié)止痛之效。與活血、養(yǎng)血藥同用，即行血分瘀滯，又解氣分郁結(jié)，且行氣而無傷陰之弊。黃芩力能清熱燥濕，瀉火解毒?？鄥⒕哂星鍩嵩餄瘢瑲⑾x利尿的功效。黃芩、苦參相伍既能清熱養(yǎng)心，又能防藥物過于滋膩，起到制約的作用。全方標(biāo)本兼治，共奏益氣養(yǎng)陰、理氣活血之功?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，早搏靈膠囊中紅參［1－3］、黃芪［4］、當(dāng)歸［5］等多種藥物均具有減少心肌細胞膜Ca2+內(nèi)流，調(diào)節(jié)細胞內(nèi)Ca2+濃度，減輕細胞內(nèi)鈣超載現(xiàn)象，對抗各種原因引起的快速性心律失常［6］。

烏頭堿誘發(fā)家兔出現(xiàn)的心律失常具有多樣性和復(fù)雜性的特點，并且死亡率高，以室性心律失常如室性早搏、室性心動過速、室顫等多見，對于臨床常見的室上性心律失常卻較為少見。故本實驗主要觀察記錄了實驗性心律失常家兔室早、室速發(fā)生的時間，證明早搏靈膠囊對室性心律失常具有有效的防治作用。

早搏靈組與模型組心肌組織Ca2+－ATPase活性比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，表明早搏靈膠囊能夠提高快速性心律失常家兔心肌組織Ca2+－ATPase活性。維拉帕米組與早搏靈組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義，提示早搏靈膠囊療效和維拉帕米療效相似。本實驗證實，家兔造模成功后，服藥組與模型組均可出現(xiàn)不同程度心律失常，并伴有Ca2+－ATPase活性不同程度地下降。早搏靈組較模型組心律失常持續(xù)時間明顯縮短，Ca2+－ATPase活性也得到保護，且與維拉帕米組無顯著性差異。提示早搏靈膠囊可能通過保護心律失常后Ca2+－ATPase活性，改善心肌能量代謝，從而減輕細胞內(nèi)鈣超載，穩(wěn)定心肌細胞膜結(jié)構(gòu)，保護心肌，從而改善心肌組織傳導(dǎo)性，這可能是其治療快速性心律失常的機制之一。

［1］俞東英.淺析心悸的辨證施治［J］.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2007，16(28):2714.

［2］張愛先.中醫(yī)藥治療快速心律失常的研究概況［J］.中國中西醫(yī)結(jié)合急救雜志，2002，9(1):56 －57.

［3］張克清，趙浩.中醫(yī)藥治療冠心病心律失常研究進展［J］.河南中醫(yī)，2006，26(5):84 －86.

［4］高毅.心律失常的辨治體會［J］.山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2003，27(1):37－38.

［5］施華勝，趙紅霞.寧心寶治療心律失常17例臨床觀察［J］.浙江中醫(yī)雜志，2003，38(5):197 －198.

［6］李楊，吳斌，楊穎.益心定悸方對快速性心律失常家兔模型心肌L型鈣離子通道的影響［J］.中醫(yī)藥學(xué)報，2011，39(3):25 －27.