前列泰片鹽酸水蘇堿定量測定方法改進

汪愛霞， 張惠萍， 安雙生， 范富元

（甘肅河西制藥有限責任公司，甘肅張掖 734000）

前列泰片鹽酸水蘇堿定量測定方法改進

汪愛霞， 張惠萍， 安雙生， 范富元

（甘肅河西制藥有限責任公司，甘肅張掖 734000）

目的 改進前列泰片藥品標準鹽酸水蘇堿定量測定方法。方法 采用薄層掃描法 （TLCS法）；供試品溶液制備中將1%鹽酸甲醇溶液提取調(diào)整為甲醇溶液提?。粚φ掌焚|(zhì)量濃度由1 mg/mL調(diào)整為2 mg/mL，點樣量為2μL和4 μL；供試品點樣量由2 μL調(diào)整為4 μL；顯色條件改為薄層板在105℃加熱15 min，放冷，噴以稀碘化鉍鉀試液－1%三氯化鐵乙醇溶液 （10∶1）的混合液顯色。結(jié)果 鹽酸水蘇堿在2.284～11.420 μg范圍內(nèi)，線性關系良好，r=0.999 1；對照品斑點與供試品斑點顯色更加清晰、集中，分離度、穩(wěn)定性、重復性好。結(jié)論 改進后的方法提升了檢驗結(jié)果的準確性和可靠性，可有效地控制前列泰片的質(zhì)量。

前列泰片；薄層掃描法；鹽酸水蘇堿

前列泰片為國家食品藥品監(jiān)督管理局《國家藥品標準新藥轉(zhuǎn)正標準第34冊》收載品種，標準號WS3－090（Z－015）－2002（Z）［1］，由益母草、萹蓄、紅花、油菜蜂花粉、知母、黃柏等中藥材加工制成，具有清熱利濕，活血散結(jié)的功效，臨床用于慢性前列腺炎濕熱挾瘀證。該藥品標準采用薄層掃描法測定鹽酸水蘇堿，在具體實驗中，存在顯色后薄層板上的斑點顏色淺，且斑點容易迅速擴散呈空心狀，影響掃描峰形，測定結(jié)果誤差較大。針對這一問題，我們查閱了相關鹽酸水蘇堿檢測方法［2-3］和薄層掃描定量的影響因素及其方法學驗證［4-5］等資料，并通過實驗研究，對原測定方法中的提取溶劑、提取時間、對照品配制質(zhì)量濃度、薄層板的預處理及顯色方法［6］進行了研究改進。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 CS-9301型雙波長薄層掃描儀，日本島津；定量毛細點樣管，日本島津；硅膠G薄層板，青島海洋化工廠；十萬分之一電子天平，型號：AG135型，梅特勒-托利多儀器有限公司；萬分之一電子天平，型號：FA1004型，上海恒平科學儀器有限公司。

1.2 試藥 鹽酸水蘇堿對照品 （中國藥品生物制品檢定所，批號：110712-200508）；前列泰片 （甘肅河西制藥有限責任公司提供，規(guī)格：每素片質(zhì)量0.44g，批號：100901、101101、101102）；水為重蒸水，其它試劑均為分析純。

2 實驗方法與結(jié)果

2.1 供試品溶液的制備 取本品40片，除去包衣，精密稱定，研細，取約4.4 g，精密稱定，置索氏提取器中，加乙酸乙酯回流至提取液無色 （約7 h），藥渣揮干，繼用甲醇回流至提取液無生物堿反應 （約7 h），提取液濃縮至干，殘渣中精密加入水20 mL置平底燒瓶中，稱定質(zhì)量，置沸水浴上加熱5 min后，再稱定質(zhì)量，用水補足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液10 mL，置水浴上蒸干，殘渣用甲醇溶解轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取鹽酸水蘇堿對照品 （置五氧化二磷減壓干燥器中干燥12 h）適量，加甲醇制成每1 mL含2 mg的溶液，即得。

2.3 層析條件 點樣方式：交叉點樣；吸附劑：硅膠G板；展開劑：正丁醇－鹽酸 （36%）－乙酸乙酯 （8∶3∶1），混勻，展開劑無分層；展開方式：上行展開，薄層板展開后，取出，晾干，在105℃加熱15 min，放冷，噴以稀碘化鉍鉀試液－1%三氯化鐵乙醇溶液 （10∶1）的混合液至斑點顯色清晰，在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定。

2.4 掃描條件 照薄層色譜法（《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥB薄層掃描法）進行反射法鋸齒掃描，狹縫：0.4 mm×0.4 mm，掃描波長 λ=510 nm，掃描寬度：16 mm。

2.5 顯色結(jié)果 顯色后薄層板上的斑點顏色深、集中，并且不易擴散。見圖1。

圖1 對照品色譜圖

2.6 線性關系考察 精密吸取對照品溶液1、2、3、4、5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，按上述層析條件展開、顯色后，并按上述掃描條件測定峰面積積分值，以鹽酸水蘇堿含有量為橫坐標，相應的峰面積積分值為縱坐標，計算得回歸方程為Y=353.49X－464.84，相關系數(shù)r=0.999 1，在2.284～11.420 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關系。掃描后峰形見圖2。

圖2 線性關系考察薄層掃描圖

2.7 精密度試驗 分別精密吸取對照品溶液2 μL、4 μL交叉點于同一硅膠G薄層板上，連續(xù)6次，按上述薄層色譜條件展開并掃描，測定峰面積積分值，結(jié)果2 μL峰面積RSD為1.32%（n=5），4 μL峰面積積分值RSD為0.53%（n=5），掃描后峰形見圖3。

圖3 精密度試驗薄層掃描圖

2.8 穩(wěn)定性試驗 分別于0、20、40、60、80、100 min掃描測定同一供試品峰面積積分值，結(jié)果RSD為2.56%（n=6）。

2.9 重復性試驗 取前列泰片樣品 （批號：100901），分別制備供試品溶液6份，對照品點樣2 μL、4 μL與供試品點樣4 μL分別交叉點樣于同一生產(chǎn)廠家同一批號和規(guī)格的6塊薄層板上，展開、掃描，測定每份樣品中鹽酸水蘇堿，結(jié)果樣品中鹽酸水蘇堿平均質(zhì)量分數(shù)為6.09 mg/g，RSD為2.85%（n=6），重復性良好［7］。

2.10 加樣回收試驗 精密稱取已知量的前列泰片樣品6份 （批號：100901，除去包衣平均片質(zhì)量為0.441 3 g，鹽酸水蘇堿質(zhì)量分數(shù)6.09 mg/g），每份約2.2 g，精密加入鹽酸水蘇堿對照品13 mg，按2.1項下供試品溶液制備方法制備，按2.3項下薄層層析條件及2.4項下掃描條件測定鹽酸水蘇堿，結(jié)果鹽酸水蘇堿的平均加樣回收率為100.7%，RSD為2.86%，見表1。

表1 加樣回收試驗

2.11 供試品測定 取3批前列泰片樣品各2份，分別制成供試品溶液，測定鹽酸水蘇堿，測定結(jié)果見表2。掃描后峰形見圖4。

表2 供試品測定結(jié)果

圖4 供試品測定薄層掃描圖

3 討論

3.1 供試品提取溶劑選擇［8］供試品溶液制備時，分別選用1%鹽酸甲醇溶液、0.5%鹽酸甲醇溶液、甲醇溶液作為提取溶劑，其中1%鹽酸甲醇與0.5%鹽酸甲醇提取液均有大量絮狀沉淀生成，而甲醇提取液無沉淀物，供試品制備時采用甲醇溶液作為提取溶劑，斑點顯色清晰，因此選擇甲醇溶液提取。

3.2 供試品提取時間的確定 供試品溶液制備時，精密稱定，置索氏提取器中，加乙酸乙酯回流至提取液無色，提取時間在6～7 h提取液基本無色；藥渣揮干，繼用甲醇回流至提取液無生物堿反應，提取時間在6～8 h提取液無生物堿反應［9］。故選擇兩次提取時間約為7 h較為適宜。

3.3 對照品質(zhì)量濃度及點樣量的調(diào)整［10］原測定方法對照品溶液點樣量為2 μL的斑點穩(wěn)定性差，將對照品質(zhì)量濃度由1 mg/mL調(diào)整為2 mg/mL，點樣量仍為2 μL和4 μL，供試品點樣量相應由2 μL調(diào)整為4 μL，調(diào)整后斑點更穩(wěn)定、集中，掃描峰形良好。

3.4 薄層板的預處理和顯色劑選擇 采用《中國藥典》2010年版一部益母草膏項下收載的鹽酸水蘇堿含量測定項［11］所用的薄層板的預處理方法和顯色方法，即顯色前的薄層板在105℃加熱15 min［12］，放冷，噴以稀碘化鉍鉀試液－1%三氯化鐵乙醇溶液 （10∶1）的混合液顯色，顯色結(jié)果表明，比薄層板晾干后直接采用稀碘化鉍鉀試液顯色的斑點清晰、集中，掃描圖譜無干擾，分離度好。

［1］國家食品藥品監(jiān)督管理局.國家藥品標準新藥轉(zhuǎn)正標準第34冊［S］.2003：8-9.

［2］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：2005年版一部［S］.北京：化學工業(yè)出版社，2005：203-204.

［3］裴香萍，張淑蓉，裴妙榮.薄層掃描法測定婦月康膠囊中鹽酸水蘇堿的含量［J］.中成藥，2007，29（7）：1108-1108.

［4］何麗一.色譜［M］，北京：化學工業(yè)出版社化學與應用化學出版中心出版，2005：177.

［5］林樂明，張 軍.藥物分析中薄層色譜的方法認證［J］.色譜，1997，15（4）：310.

［6］耿秋菊，劉文娟，姬雪禮.薄層色譜法測定益母草藥材中鹽酸水蘇堿含量的方法研究［J］.中華實用中西醫(yī)雜志，2005，18：138-140

［7］孫毓慶，王延琮，林樂明，等.薄層掃描法及其在藥物分析中的應用［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1990.6.

［8］盧艷花，魏東芝，蔣曉萌.中藥有效成分提取分離技術［M］.2版.北京：化學工業(yè)出版社，2008：135

［9］肖崇厚主編.中藥化學［M］.上海：上?？茖W技術出版社，1996：91-92.

［10］林燕翔，樊春燕.薄層掃描法測定八珍益母膏中鹽酸水蘇堿的含量［J］.廣州化工，2010，38（7）：145-146.

［11］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：2010年版一部［S］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：1026.

［12］梁惠珍，李先榮，王瑞民.薄層掃描法測定復方腦清膠囊中鹽酸水蘇堿的含量［J］.中國藥事，2009，23（6）：575-576.

K927.2

B

1001-1528（2012）06-1188-03

2011-04-28

汪愛霞 （1975—），女，主管藥師，從事中藥新產(chǎn)品研發(fā)和檢驗工作。Tel：（0936）8212192，E-mail：gshxzy@126.com