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    設計優(yōu)化微波輔助法提取草石蠶中水蘇糖

    2022-03-09 01:48:22欒凱雯賀夢瑤劉佳欣湯興楠朱建星張萬忠
    食品工業(yè) 2022年2期
    關(guān)鍵詞:水蘇干品微波

    欒凱雯,賀夢瑤,劉佳欣,湯興楠,朱建星,張萬忠

    沈陽化工大學制藥與生物工程學院(沈陽 110142)

    水蘇糖是在唇形科、豆科、玄參科等多種植物中存在的功能性低聚糖,其中在草石蠶中含量最高。水蘇糖分子式為C24H42O21,分子量666.59,屬于低聚半乳糖,被譽為“超強雙歧因子”,被廣泛用于食品、醫(yī)藥等領域[1-2]。 水蘇糖對腸道有益菌如雙歧桿菌、乳桿菌有特異性的增殖作用[3],每天攝入0.5~3 g水蘇糖即有效果[4]。水蘇糖能增加機體對礦物元素的吸收,被認為與盲腸中的L-乳酸的提高有關(guān)[5]。

    微波輔助提取法具有快速高效、節(jié)省溶劑、工藝簡單、應用面廣泛等特點[6-10]。此次試驗采用微波輔助法對干品草石蠶中水蘇糖進行提取,借助響應曲面以水蘇糖提取率為響應值,對微波輔助提取草石蠶中水蘇糖的工藝進行優(yōu)化(微波功率、微波時間、微波溫度和料液比),得到最優(yōu)的提取條件。

    1 材料與方法

    1.1 主要試劑與儀器

    草石蠶干品(亳州市康易飲生物科技有限公司);蒸餾水;水蘇糖標準品(純度98%,廣東深圳潤慧生物科技有限公司);乙腈(色譜純,德國SIMARK)。

    GB1302型電子精密天平(梅特勒托利多儀器公司);Agilent1200高效液相色譜儀;Mars6微波消解儀[培安CEM微波化學(中國)技術(shù)中心];小型高速粉碎機(北京興時利和科技發(fā)展有限公司);SHZ-D(Ⅲ)循環(huán)水式真空泵(鞏義市予華儀器責任公司)。

    1.2 試驗方法

    1.2.1 水蘇糖標準溶液的配制

    稱取100 mg水蘇糖標準品溶于10 mL容量瓶中,加入蒸餾水溶解定容到10 mL,此時得到10 mg/mL的標準品溶液,將此標準溶液逐級稀釋成8,6,4和2 mg/mL的標準溶液,經(jīng)孔徑0.45 μm微孔膜過濾后待用。

    1.2.2 水蘇糖標準曲線的繪制

    將過膜后不同濃度的水蘇糖標準品分別利用高效液相法[11-14]進行分析,進樣量均為20 μL,每種濃度標準品重復進樣3次,取平均值,以水蘇糖的濃度(X,mg/mL)與它們對應的峰面積(Y)進行線性回歸,繪制水蘇糖的標準曲線,得到水蘇糖標準曲線Y= 58 017.1X-43 538.4,R2=0.999 5。

    1.2.3 色譜條件

    色譜柱,TIANHE Kromasil NH2柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流動相為V乙腈∶V水=70∶30;流速1 mL/min,柱溫40 ℃,進樣量20 μL。

    1.3 水蘇糖的提取工藝及提取率測定

    草石蠶干品粉碎過0.150 mm(100目)篩,得到草石蠶干品粉末,稱取若干份草石蠶粉末,以微波輔助法提取,抽濾得到上層溶液后過膜進樣,計算草石蠶中水蘇糖含量。水蘇糖提取率按式(1)計算。

    式中:n為稀釋倍數(shù);V為提取液體積,mL;Q為提取液水蘇糖含量,mg/mL;W為干粉質(zhì)量,g。

    1.4 單因素試驗

    選擇料液比(1∶10,1∶15,1∶20,1∶25和1∶30 mg/mL)、提取溫度(40,50,60,70和80 ℃)、提取時間(2,4,6,8和10 min)、微波功率(200,300,400,500和600 W)進行單因素試驗,考察其對草石蠶中水蘇糖提取率的影響。

    1.5 響應面優(yōu)化試驗

    在單因素試驗基礎上,根據(jù)Box-Behnken試驗設計原理,采用Design-Expert軟件,以水蘇糖提取率為影響值進行響應曲面優(yōu)化,響應面因素和水平見表1。

    表1 響應面因素和水平表

    1.6 數(shù)據(jù)分析

    通過SPSS 17.0軟件統(tǒng)計進行數(shù)據(jù)方差分析,p< 0.01表示差異具有顯著統(tǒng)計學意義,試驗結(jié)果用作圖軟件Origin 9.0繪圖。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 單因素試驗結(jié)果

    2.1.1 料液比對水蘇糖提取率的影響

    在提取溫度50 ℃、提取時間4 min、微波功率400 W的條件下,料液比對水蘇糖提取率的影響如圖1所示。隨著液體比例不斷增加,提取率不斷增加,料液比1∶25 mg/mL時達到最大值,因為隨著溶液體積分數(shù)增加,草石蠶干品與溶液得到充分接觸,使得水蘇糖溶解率增加。料液比超過1∶25 mg/mL時,水蘇糖的溶解度達到飽和,其他雜質(zhì)溶出影響水蘇糖的溶出,使得提取率下降。故料液比1∶25 mg/mL最合適。

    圖1 料液比對水蘇糖提取率的影響

    2.1.2 提取溫度對水蘇糖提取率的影響

    在料液比1∶25 mg/mL、提取時間4 min、微波功率400 W的條件下,提取溫度對水蘇糖提取率的影響如圖2所示。隨著提取溫度不斷增加,提取率不斷增加,提取溫度60 ℃時達到最大值,當溫度繼續(xù)增加時,水蘇糖得率不斷下降,可能是因為溫度短時間內(nèi)迅速升高加速其他雜質(zhì)大量溶出,阻礙水蘇糖的溶出。故提取溫度選擇60 ℃最合適。

    圖2 提取溫度對水蘇糖提取率的影響

    2.1.3 提取時間對水蘇糖提取率的影響

    在提取溫度60 ℃、料液比1∶25 mg/mL、微波功率400 W的條件下,提取時間對水蘇糖提取率的影響如圖3所示。隨著提取時間增加,水蘇糖得率先增加后下降,在6 min時得率達到峰值,8 min時開始下降,可能是使用微波提取時間過長會引起水蘇糖結(jié)構(gòu)的破壞,故提取時間6 min最合適。

    圖3 提取時間對水蘇糖提取率的影響

    2.1.4 微波功率對水蘇糖提取率的影響

    在提取溫度60 ℃、提取時間6 min、料液比1∶25 mg/mL的條件下,微波功率對水蘇糖提取率的影響如圖4所示。微波功率對水蘇糖的提取影響較大,隨著微波功率增加,提取率大幅增加,400 W時達到最大值。原因可能是隨著微波功率增加,分子運動逐漸劇烈,增加了水蘇糖的溶出,微波功率繼續(xù)增大,微波產(chǎn)生的強烈作用使水蘇糖結(jié)構(gòu)遭到破壞,提取率下降。故微波功率選擇400 W最合適。

    圖4 微波功率對水蘇糖得率的影響

    2.2 響應面優(yōu)化試驗結(jié)果

    2.2.1 回歸模型的構(gòu)建及方差分析

    水蘇糖提取設計方案及結(jié)果見表2,回歸方差分析見表3,擬合所得多元二次回歸方程:Y=41.23+ 0.51A-0.13B-0.23C+0.036D-1.18AB-0.70AC+7.500E-003AD+0.38BC+0.48BD+0.12CD-1.07A2-1.88B2-2.50C2-1.32D2。

    表2 響應面試驗設計和試驗結(jié)果

    由表3可知,該回歸模型達到極顯著水平(p< 0.01),失擬項不顯著,R2=0.916 0,表明該模型的擬合程度較好,水蘇糖的提取率可以用該模型進行分析和預測。通過對比表3中的F值可以得出,影響水蘇糖提取率的主次順序為A>C>B>D,即提取功率>提取溫度>提取時間>料液比。

    表3 回歸模型方差分析表

    2.2.2 各因素間的交互作用

    根據(jù)回歸方程做出的各兩因素交互作用的響應面分析見圖5。微波功率(A)和提取時間(B)交互(AB)的影響顯著。

    圖5 各兩因素交互作用響應面

    2.2.3 最優(yōu)條件的確定及驗證試驗

    用Design-Expert 8.0.6軟件對二次多項式回歸方程進行計算,得到提取水蘇糖的最佳工藝條件:微波功率400 W、提取時間5.6 min、提取溫度60 ℃、料液比1∶25 mg/mL。水蘇糖提取率的理論最優(yōu)值是41.35%。參照試驗條件進行驗證試驗,得到的水蘇糖提取率為41.18%,與理論值的相對誤差為0.17%,說明該方法具有一定可操作性。

    3 結(jié)論

    以響應曲面法來優(yōu)化微波輔助法提取水蘇糖條件,確定最佳提取條件:提取時間5.6 min、提取溫度60 ℃、微波功率400 W,料液比1∶25 mg/mL,水蘇糖的提取率可達41.18%。綜上,利用響應曲面法對草石蠶中水蘇糖的提取工藝進行優(yōu)化的方法是科學的,為從草石蠶中提取水蘇糖以及對水草石蠶中水蘇糖的開發(fā)利用提供了理論依據(jù)。

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