桑仙降壓顆粒對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠心臟超微結(jié)構(gòu)的作用

張?zhí)N慧

(山東省中醫(yī)院心內(nèi)科，山東省濟(jì)南市文化西路42號(hào)，250014)

高血壓常導(dǎo)致心臟超微結(jié)構(gòu)的損害、進(jìn)而影響心功能，使病情惡化。人們?cè)噲D尋找某些對(duì)心臟超微結(jié)構(gòu)有保護(hù)作用的降壓藥物。桑仙降壓顆粒為全國(guó)名老中醫(yī)林慧娟教授的經(jīng)驗(yàn)方，臨床應(yīng)用降壓療效顯著［1］，但能否在降壓的同時(shí)對(duì)心臟超微結(jié)構(gòu)起保護(hù)作用尚待研究。本研究通過(guò)動(dòng)態(tài)觀察各組大鼠血壓及心臟超微結(jié)構(gòu)的變化，探討桑仙降壓顆粒的降壓作用及對(duì)心臟超微結(jié)構(gòu)的保護(hù)效應(yīng)，為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SHR 42只，雄性，4周齡，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，體重70～110g。動(dòng)物合格證號(hào):SCXK(京)2006-0009。Wistar大鼠18只，雄性，4周齡，購(gòu)自山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，體重160～190g。動(dòng)物合格證號(hào):SCXK(魯)20090001。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥品

1.2.1 桑仙降壓顆粒 原生藥處方:桑寄生30g，淫羊藿 30g，川芎 12g，丹參 30g，杜仲 30g，黃芪 25g，野葛根30g，酸棗仁30g。桑仙降壓顆粒劑由山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院中藥制劑室按正交試驗(yàn)法優(yōu)選工藝制成，每克顆粒劑含6g生藥。實(shí)驗(yàn)前加生理鹽水適量，制備成濃度0.8g生藥/mL混懸液，置4℃冰箱保存?zhèn)溆?，使用前振蕩，充分搖勻。

1.2.2 吲噠帕胺片 2.5mg/粒，由天津力生制藥股份有限公司提供，批號(hào):070532。

1.2.3 戊巴比妥鈉，由山東省中醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器 1)ALC-NIBP無(wú)創(chuàng)血壓儀，上海奧爾科特生物科技有限公司產(chǎn)品;2)METTLER AE20型電子分析天平，上海海特勒-托利多儀器有限公司;3)康樂(lè)電熱恒溫水浴槽，上海醫(yī)療器件七廠;4)H-800透射電鏡，日本日立公司出產(chǎn)，由山東大學(xué)電鏡室提供。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 分組方法 以A標(biāo)示正常對(duì)照組即Wistar大鼠組;B、C、D分別標(biāo)示SHR不同的給藥方式:B為空白對(duì)照即SHR給予蒸餾水組，C為SHR給予吲噠帕胺組，D為SHR給予桑仙降壓組;再者，根據(jù)0周、4周、8周不同觀測(cè)時(shí)間隨機(jī)分組，A組分為A0、A1、A2，B組分為 B0、B1、B2，C 組分為 C1、C2，D 組分為 D1、D2。根據(jù)隨機(jī)分組方法，每組6只。

1.4.2 給藥方法 A組和B組給予蒸餾水灌胃，C組每天給予吲噠帕胺0.25mg/kg，D組每天給予桑仙降壓顆粒8g生藥/kg。根據(jù)每周的體重變化調(diào)整給藥量。每天用藥1次。

1.4.3 觀測(cè)時(shí)相點(diǎn) 0組的觀測(cè)時(shí)間為Wistar、SHR4周齡;1、2組的觀測(cè)時(shí)間為Wistar、SHR給藥后4周后、8周后。

1.4.4 取材及檢測(cè) 1)大鼠尾動(dòng)脈收縮壓觀測(cè):采用無(wú)創(chuàng)性套尾法測(cè)定大鼠清醒狀態(tài)下尾動(dòng)脈收縮壓。2)取心臟標(biāo)本:末次用藥后禁食不禁水12h后，用戊巴比妥鈉(40mg/kg)腹腔注射，麻醉后立即經(jīng)腹主動(dòng)脈注入4℃生理鹽水，切開(kāi)下腔靜脈放血，待沖洗液干凈無(wú)色后，立即開(kāi)胸，快速分離、摘取心臟，置入4℃生理鹽水中快速?zèng)_洗3次。3)心臟超微結(jié)構(gòu)的觀察:取左心室游離壁中層心肌組織，于冰上迅速切為1mm3大小，立即置于冰冷的2.5%戊二醛固定2h以上，磷酸緩沖液浸洗30min，四氧化鋨固定液4℃后固定2h，磷酸緩沖液再次浸洗后乙醇梯度脫水，環(huán)氧樹(shù)脂Epon812浸透包埋，常規(guī)超薄切片，鈾鉛雙重染色，H-800透射電鏡下觀察。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 全部數(shù)據(jù)采用SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)軟件分析處理。計(jì)量資料數(shù)據(jù)以(ˉx±s)表示，組間差異性比較采用t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)SHR尾動(dòng)脈SBP的影響 實(shí)驗(yàn)前各組血壓無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);實(shí)驗(yàn)4及8周后，與空白對(duì)照組相比，桑仙降壓組、吲噠帕胺組血壓明顯降低(P＜0.01);桑仙降壓組與吲噠帕胺組相比，實(shí)驗(yàn)4周時(shí)，兩者無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);實(shí)驗(yàn)8周時(shí)，桑仙降壓組相較吲噠帕胺組血壓偏高，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。數(shù)據(jù)結(jié)果見(jiàn)表1。

2.2 心臟超微結(jié)構(gòu) 與正常對(duì)照組比較，4周齡SHR開(kāi)始出現(xiàn)少數(shù)線粒體腫脹，實(shí)驗(yàn)4周出現(xiàn)心肌纖維局部皺縮、缺失，線粒體灶性聚集，核內(nèi)出現(xiàn)異染色質(zhì)，實(shí)驗(yàn)8周心肌肌原纖維灶性溶解，線粒體嵴碎裂溶解，間隙增寬，可見(jiàn)空泡樣變及自噬小體，潤(rùn)盤間隙增寬;桑仙降壓組實(shí)驗(yàn)4周線粒體減少，少量線粒體腫脹，實(shí)驗(yàn)8周心肌肌原纖維局部出現(xiàn)皺縮、缺失，線粒體灶性聚集，可見(jiàn)少量自噬小體，核內(nèi)出現(xiàn)異染色質(zhì)，潤(rùn)盤間隙增寬;吲噠帕胺組實(shí)驗(yàn)4周線粒體減少，少量線粒體腫脹，核內(nèi)出現(xiàn)異染色質(zhì)，潤(rùn)盤間隙增寬，實(shí)驗(yàn)8周心肌肌原纖維灶性溶解，線粒體灶性聚集、腫脹，部分嵴開(kāi)始溶解，可見(jiàn)少量自噬小體。

表1 各組SBP的變化比較(ˉx±s，mmHg)

3 討論

高血壓是心血管疾病的重要病因和危險(xiǎn)因素，高血壓常引發(fā)心肌超微結(jié)構(gòu)的損害［2-4］，心肌結(jié)構(gòu)改變不能得到及時(shí)有效的阻止和逆轉(zhuǎn)，最終會(huì)導(dǎo)致功能喪失，嚴(yán)重影響預(yù)后。SHR心肌超微結(jié)構(gòu)變化主要在于線粒體、肌漿網(wǎng)、細(xì)胞膜、T管、潤(rùn)盤、細(xì)胞核等結(jié)構(gòu)的損害。其中，線粒體損害相對(duì)較早出現(xiàn)［2］，我們也觀測(cè)到其變化等早在SHR在4周即出現(xiàn)，同時(shí)，其作為清除氧自由基酶系統(tǒng)活力最重要的部位，是決定細(xì)胞由可逆到不可逆改變的關(guān)鍵細(xì)胞器，也是反應(yīng)心肌細(xì)胞損傷的敏感指標(biāo)［3］;同樣重要的是，心肌細(xì)胞線粒體的異常、三羧酸循環(huán)障礙，ATP生成減少，從而影響心肌的能量供給，隨著病程延長(zhǎng)，心肌組織的代謝紊亂，進(jìn)一步引起心肌肌絲斷裂，肌原纖維數(shù)量減少;潤(rùn)盤粘合膜間隙的擴(kuò)張和壞死性改變也可干擾心肌收縮的興奮傳遞，影響心肌收縮的同步性。

本研究顯示，桑仙降壓顆粒能顯著降低SHR尾動(dòng)脈收縮壓，雖與吲噠帕胺降壓作用相比仍有差異，但在改善SHR心臟超微結(jié)構(gòu)方面，桑仙降壓顆粒顯著優(yōu)于吲噠帕胺;結(jié)果提示，桑仙降壓顆粒對(duì)心臟超微結(jié)構(gòu)保護(hù)不僅僅依賴于降壓機(jī)制，可能與其組分的作用有關(guān)。現(xiàn)代藥理研究表明，以淫羊藿為主要成分的方藥能明顯減輕心肌缺血再灌注損傷的心肌線粒體腫脹［4］;丹參可穩(wěn)定線粒體膜性結(jié)構(gòu)［5］，同時(shí)有人認(rèn)為可抑制Ca2+大量?jī)?nèi)流、減少心肌細(xì)胞內(nèi)鈣超載有關(guān)［6］。川芎嗪具抗氧自由基作用［7-10］，黃芪所含黃芪皂苷保護(hù)心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)特別是線粒體結(jié)構(gòu)［11-13］。據(jù)此，桑仙降壓顆粒的保護(hù)心肌超微結(jié)構(gòu)機(jī)制不僅僅與其降壓有關(guān)，還可能與其抗氧自由基、從而減輕心肌細(xì)胞的損害有一定關(guān)聯(lián)。但由于桑仙降壓顆粒藥味較多，成分復(fù)雜，其單體之間是否存在疊加或削弱效應(yīng)尚不明確，對(duì)SHR心臟超微結(jié)構(gòu)確切的保護(hù)機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

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