e抗原陽性乙肝患者細(xì)胞免疫狀態(tài)對干擾素療效的影響

奚偉星

[摘要] 目的 探討基線細(xì)胞免疫狀態(tài)對干擾素（IFN）療效的影響。 方法 選擇e抗原陽性CHB患者67例，采用聚乙二醇IFNα-2a 180 μg皮下注射。基線時用流式細(xì)胞術(shù)（FCM）檢測CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、自然殺傷（NK）細(xì)胞，按治療結(jié)束時的完全應(yīng)答（CR）或非完全應(yīng)答（NCR）分為兩組，比較兩組基線時淋巴細(xì)胞亞群及ALT、HBV DNA定量、年齡等的差異。 結(jié)果 兩組間基線時CD8+、ALT、年齡差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P ＞ 0.05）；CR組基線HBV DNA定量低于NCR組，CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK均高于NCR組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P ＜ 0.05）。 結(jié)論 通過血淋巴細(xì)胞亞群的檢測可以監(jiān)控患者的免疫狀態(tài)，從而為抗病毒治療提供幫助。

[關(guān)鍵詞] 慢性乙型肝炎；淋巴細(xì)胞亞群；聚乙二醇干擾素

[中圖分類號] R512.6+2[文獻(xiàn)標(biāo)識碼] B[文章編號] 1673-9701（2012）16-0113-02

The influence of baseline cellular immunity to the therapeutic responses of interferon in HBeAg positive hepatitis B patients

XI Weixing

Department of Clinical Laboratory，Tongde Hospital in Zhejiang Province, Hangzhou 310012, China

[Abstract] Objective To explore the influence of baseline cellular immunity to the therapeutic responses of interferon. Methods Selected 67 cases of e antigen positive CHB patients and treated with subcutaneous injection of 180 μg polyethylene glycol IFNα-2a. Levels of CD3+, CD4+, CD8+, CD4+/CD8+, natural killer (NK) cells at baseline were determined by flow cytometry (FCM). The patients were divided into two groups according to complete response (CR) or non-complete response (NCR) at the end of treatment. The differences of lymphocyte subsets, ALT, HBV DNA quantitation and age at baseline of two groups were compared. Results There were no significant difference for CD8+, ALT, age at baseline of the two groups (P ＞ 0.05); Baseline HBV DNA quantitation of CR group was lower than that of NCR group, and CD3+, CD4+, CD4+/CD8+, NK of the CR group were higher than the NCR group, and the differences were statistically significant (P ＜ 0.05). Conclusion Through the blood lymphocyte subsets testing can monitor patients'' immune status, so as to provide help for antiviral treatment.

[Key words] Chronic hepatitis B; Lymphocyte subsets; PEG-interferon

乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）是引起慢性肝炎、肝硬化、甚至肝細(xì)胞癌的主要病原體。乙型肝炎的發(fā)病機制復(fù)雜，至今尚未完全闡明。目前普遍認(rèn)為宿主的免疫應(yīng)答在乙型肝炎的發(fā)病機制中起主要作用，細(xì)胞免疫反應(yīng)是HBV感染后引起肝細(xì)胞損害的主要機制。研究表明，機體感染HBV后，外周血淋巴細(xì)胞亞群間的平衡被打破，細(xì)胞亞群之間的調(diào)節(jié)紊亂是體內(nèi)不能清除HBV及HBV在肝內(nèi)持續(xù)復(fù)制的主要原因。干擾素抗病毒的作用機制有兩個方面：①調(diào)節(jié)機體免疫，加強輔助T細(xì)胞1型（Th1）作用，分泌IL-2等細(xì)胞因子，促進HBV特異細(xì)胞毒T細(xì)胞（CTL）和自然殺傷（NK）細(xì)胞的活性，又刺激巨噬細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子，增強細(xì)胞免疫。②IFN-α與細(xì)胞膜上干擾素受體1（IFN-R1）結(jié)合，誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)染色體產(chǎn)生抗病毒蛋白。因此聚乙二醇IFN-α作為慢性乙型肝炎抗病毒治療的首選藥物之一。影響IFN-α療效的因素頗多，報道結(jié)果亦多有差異，總體來看可分為病毒因素和宿主因素兩大類。在病毒因素方面，有病毒載量、基因型等；而宿主因素則較復(fù)雜，除性別、年齡、感染時間長短、ALT基線值的高低等外，宿主的細(xì)胞免疫狀態(tài)也是決定療效的重要因素，甚至可能是最重要的宿主因素，其他因素可能只是免疫因素的外在反映?？共《局委熐暗募?xì)胞免疫狀態(tài)對應(yīng)答率的影響目前報道較少。外周血細(xì)胞亞群是反映慢性乙型肝炎患者免疫狀態(tài)的重要指標(biāo)[1]。本研究通過比較不同應(yīng)答組之間淋巴細(xì)胞亞群、HBV DNA定量、ALT、年齡等的差異，探討CHB患者IFN治療前細(xì)胞免疫狀態(tài)對抗病毒療效的影響。

1對象與方法

1.1研究對象

選擇2006年8月～2008年8月我科門診及住院的e抗原陽性慢性乙型肝炎患者67例，臨床診斷均符合2005年中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)分會、中華醫(yī)學(xué)會感染病學(xué)分會聯(lián)合制訂的《慢性乙型肝炎防治指南》[2]的診斷標(biāo)準(zhǔn)。所選患者均為男性，基因型均為C型，中位年齡36（18～60）歲，1年內(nèi)均未應(yīng)用過抗病毒及免疫調(diào)節(jié)劑治療，并排除以下疾?。褐丿BHAV、HCV、HDV、HEV或HIV感染與脂肪肝、酒精性肝病、藥物性肝病、自身免疫性肝病、肝硬化、肝癌。

1.2 治療方法及療效判斷標(biāo)準(zhǔn)

全部患者采用聚乙二醇IFNα-2a 180 μg皮下注射，每周1次，療程52周。治療期間不合并使用免疫調(diào)節(jié)藥物，但允許加用利血生片、地榆升白片或重組人粒細(xì)胞集落刺激因子等升白細(xì)胞藥物輔助治療。52周治療結(jié)束時完全應(yīng)答標(biāo)準(zhǔn)為HBV DNA＜1 000拷貝/mL、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（alanine aminotransferase，ALT）正常、e抗原轉(zhuǎn)陰、e抗體轉(zhuǎn)為陽性。符合完全應(yīng)答者為完全應(yīng)答（complete response，CR）組，其余為非完全應(yīng)答（non-complete response，NCR）組。

1.3 指標(biāo)檢測

采用美國Becton Dickinson公司的FACS Canto流式細(xì)胞分析儀及試劑用于檢測基線時CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、自然殺傷（NK）細(xì)胞，正常值范圍：CD3+ 50%～84%、CD4+ 27%～51%、CD8+ 15%～44%、CD4+/CD8+ 0.71%～2.78%、NK 7%～40%。肝臟生化學(xué)指標(biāo)及血清HBV標(biāo)志物檢測采用美國Abbott公司ARCHITECT ci8200型生化、免疫分析儀及原裝試劑，正常值范圍：ALT（0～40）U/L，HBeAg（0～1）s/co為陰性，HBeAb（0～1）s/co為陽性。HBV DNA定量采用Roche Light Cycler熒光定量PCR分析儀檢測，試劑由深圳匹基生物工程有限公司提供，最低檢測限為1 000 copies/mL。觀察基線、治療52周時血清ALT、HBV DNA定量的情況及HBeAg血清轉(zhuǎn)換情況。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行分析，非正態(tài)分布數(shù)據(jù)采用Mann-Whitney檢驗，正態(tài)分布數(shù)據(jù)采用t檢驗，P ＜ 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者基線一般情況比較

CR組與NCR組基線HBV DNA定量Log值分別為6.04±0.70和7.23±0.68，t值為-6.97，P ＜ 0.05，表明CR組HBV DNA定量低于NCR組，且差異有統(tǒng)計學(xué)意義；兩組年齡（歲）中位數(shù)分別為35（18～58）和36（23～60），秩均值分別為32.21和35.28，秩和分別為902和1 376，Z值為-0.64，P ＞ 0.05；ALT（U/L）中位數(shù)分別為223（120～910）和158（117～537），秩均值分別為39.20和30.27，秩和分別為1 097.50和1 180.50，Z值為-1.85，P ＞ 0.05，提示兩組之間年齡及ALT差異無統(tǒng)計學(xué)意義。見表1。

2.2 兩組T細(xì)胞亞群及NK細(xì)胞的比較

應(yīng)用聚乙二醇IFNα-2a治療52周獲得完全應(yīng)答組其基線CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK均高于非完全應(yīng)答組且差異有統(tǒng)計學(xué)意義，但CD8+與非完全應(yīng)答組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

3 討論

CD3+代表T淋巴細(xì)胞總數(shù)，CD8+ T細(xì)胞是與病毒清除直接有關(guān)的細(xì)胞亞群，細(xì)胞溶解或非溶解機制是CD8+ T細(xì)胞清除HBV的主要方式，CD8+ T細(xì)胞在病毒清除過程中起著關(guān)鍵作用[3，4]。但CD4+ T細(xì)胞對CD8+ T細(xì)胞的增殖與活化具有重要調(diào)節(jié)作用，并能通過分泌Th1類細(xì)胞因子下調(diào)HBV的復(fù)制。研究表明，慢性乙型肝炎患者CD4+ T細(xì)胞反應(yīng)有助于優(yōu)化CD8+ T細(xì)胞反應(yīng)，乙型肝炎患者體內(nèi)CD8+ T細(xì)胞反應(yīng)明顯受CD4+ T細(xì)胞調(diào)節(jié)，CD4+ T細(xì)胞下降，影響CD8+ T細(xì)胞的增殖與活性，特別是細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（CTL）的增殖與活性及特異性抗體的產(chǎn)生，從而導(dǎo)致病毒難以被清除[5-8]。本研究選擇男性、C型基因型的患者作為研究對象，去除了性別及基因型對干擾素療效的影響。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，聚乙二醇IFNα-2a治療結(jié)束時完全應(yīng)答組基線時具有較高的CD4+，而較高的CD4+ T細(xì)胞反應(yīng)有助于優(yōu)化CD8+ T細(xì)胞反應(yīng)，提高CD8+ T細(xì)胞的增殖與活性，特別是細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（CTL）的增殖與活性及特異性抗體的產(chǎn)生，從而使病毒容易被清除。完全應(yīng)答組與非完全應(yīng)答組基線時的CD8+差異無統(tǒng)計學(xué)意義，可能為非完全應(yīng)答組較高的病毒負(fù)荷及CD4+ T細(xì)胞的減少對CD8+ T細(xì)胞有負(fù)性調(diào)節(jié)作用所致[6]。非完全應(yīng)答組患者基線CD4+ T細(xì)胞偏低，缺乏Th1細(xì)胞有效輔助，CD8+ T細(xì)胞不能有效清除病毒，CD4+/CD8+比值較低，比例失衡較明顯，免疫紊亂較重，從而可能是造成應(yīng)用干擾素治療應(yīng)答不佳的主要因素之一。NK細(xì)胞是不同于T、B淋巴細(xì)胞而具有直接殺傷靶細(xì)胞效應(yīng)的特殊的淋巴細(xì)胞，是機體天然免疫的承擔(dān)者，具有抗腫瘤、抗感染、免疫調(diào)節(jié)功能，在乙型肝炎的感染、發(fā)病、發(fā)展及轉(zhuǎn)歸中，特別是在HBV感染和造成肝細(xì)胞免疫損害方面都可能有重要意義[9]。本研究提示，完全應(yīng)答組基線NK細(xì)胞水平較高，與非完全應(yīng)答組比較有顯著性差異，提示基線時較高的NK細(xì)胞可使機體干擾病毒復(fù)制和抗感染能力較高，從而在聚乙二醇干擾素的應(yīng)用下可使HBV更容易被清除，并更容易獲得完全應(yīng)答。本研究還顯示，完全應(yīng)答組基線時HBV DNA較低，考慮可能與患者免疫功能較強、較高的CD4+ T細(xì)胞抑制HBV復(fù)制及優(yōu)化CD8+ T細(xì)胞反應(yīng)特別是CTL的增殖與活性從而導(dǎo)致病毒易被清除等有關(guān)。兩組之間ALT及年齡無顯著性差異，進一步表明在年齡、性別、基因型、ALT水平可比的前提下，基線較高的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK可致基線HBV DNA偏低，應(yīng)用干擾素抗病毒治療更容易獲得較好的治療效果。因此，基線時的細(xì)胞免疫狀態(tài)可能影響IFN的應(yīng)答率，可以通過檢測基線時的免疫功能為抗病毒治療提供幫助。

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（收稿日期：2011-11-07）