抑亢丸中芍藥苷的質(zhì)量控制

李丹 韓晶

摘 要：目的：采用薄層色譜法和高效液相色譜法對(duì)抑亢丸中芍藥苷進(jìn)行質(zhì)量控制。薄層色譜法對(duì)芍藥苷進(jìn)行了定性分析，結(jié)果清晰明顯，陰性對(duì)照無(wú)干擾；高效液相色譜法對(duì)芍藥苷進(jìn)行了定量分析，結(jié)果芍藥苷在0.0687～0.6870?g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)r=0.9999，平均回收率（n=6）為99.97%，RSD為1.09%，證明此測(cè)定方法專屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性好，簡(jiǎn)便，快速?？捎糜谝挚和柚猩炙庈盏馁|(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：抑亢丸 芍藥苷 薄層色譜法 高效液相色譜法 質(zhì)量控制

中圖分類號(hào)：R927 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1674-098X（2012）12（a）-0-02

抑亢丸由羚羊角、白芍、天竺黃、桑椹、延胡索（醋炙）、青皮（醋炙）、香附、玄參、石決明、黃精、黃藥子、天冬、女貞子、地黃等十四味藥材組成，具有育陰潛陽(yáng)，豁痰散結(jié)，降逆和中等功效，用于癭?。谞钕贆C(jī)能亢進(jìn)）引起的突眼，多汗心煩，心悸怔忡，口渴，多食，肌體消瘦，四肢震顫等[1]。抑亢丸方中主要成分白芍為毛茛科植物芍藥Paeonia lacti flora Pall.的干燥根[2]。本實(shí)驗(yàn)采用薄層色譜法和高效液相色譜法對(duì)白芍中芍藥苷進(jìn)行了質(zhì)量控制，方法易于操作，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性良好。

1 薄層色譜法

1.1 儀器設(shè)備與試劑試藥

烘箱；硅膠G薄層板；芍藥苷對(duì)照品（由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供）批號(hào)：110736-200526；抑亢丸樣品由生產(chǎn)企業(yè)提供；水為純化水，其他試劑均為分析純。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法與實(shí)驗(yàn)結(jié)果

取本品水蜜丸15 g，研細(xì)；或取小蜜丸15 g或大蜜丸2丸，剪碎，加水10 mL使溶散，加水飽和正丁醇50 mL，加熱回流1 h，濾過(guò)，濾液用正丁醇飽和的水40 mL洗滌，正丁醇層蒸干，殘?jiān)由倭考状既芙猓枞肷僭S中性氧化鋁，水浴上拌勻干燥，裝入一預(yù)先填好的中性氧化鋁小柱（100～200目，3 g，內(nèi)徑1～1.5 cm）上，用乙酸乙酯-甲醇（1∶1）混合溶液40 mL洗滌，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。另取芍藥苷對(duì)照品，加乙醇制成每1 mL含1 mg溶液，作為對(duì)照品溶液。再取除白芍外的全部樣品成分，同法制成陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法（中國(guó)藥典2010年版一部附錄VI B）試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10 ?1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40：5：10：0.2）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的藍(lán)紫色斑點(diǎn)。陰性對(duì)照無(wú)干擾。

2 高效液相色譜法

2.1 儀器設(shè)備與試劑試藥

日本島津LC-2010AHT高效液相色譜儀；芍藥苷對(duì)照品（由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供）批號(hào)：110736-200526；抑亢丸樣品由生產(chǎn)企業(yè)提供；乙腈為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純。

2.2 實(shí)驗(yàn)方法與實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 色譜條件

色譜柱：kromasil C18（4.6×250 mm，5 ?m）；流動(dòng)相：乙腈-水（13：87）；流速：0.7 mL/min；柱溫：40 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：230 nm；理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算應(yīng)不低于6000。

2.2.2 溶液制備

2.2.2.1 對(duì)照品溶液。精密稱取芍藥苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含60 ?g的溶液，即得。

2.2.2.2 供試品溶液。取本品小蜜丸或重量差異項(xiàng)下的大蜜丸，剪碎，取約3 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇50 mL，密塞，稱定重量，超聲處理30 min，使溶散，取出，放至室溫，稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 專屬性試驗(yàn)

按照處方制備不含白芍的抑亢丸陰性對(duì)照樣品，按“2.2.2.2”項(xiàng)下方法制備陰性對(duì)照溶液。取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液，依法進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果，陰性樣品色譜在與芍藥苷峰相應(yīng)的保留時(shí)間附近無(wú)干擾峰檢出，表明抑亢丸中其他藥味及輔料等對(duì)本方法測(cè)定無(wú)干擾。

2.2.4 線性關(guān)系考察

精密稱取芍藥苷對(duì)照品適量，加稀乙醇制成每1 mL含68.70 ?g的溶液，分別精密吸取1、2、4、6、8、10 ?l進(jìn)樣測(cè)定，以對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程，回歸方程為y=1522250.28x+127.26（r=0.9999），表明芍藥苷在0.0687-0.6870 ?g范圍內(nèi)與峰面積值成良好線性關(guān)系。

2.2.5 精密度試驗(yàn)

取同一批樣品，依“2.2.2.2”項(xiàng)下方法制成供試品溶液。精密吸取供試品溶液10 ?l，注入液相色譜儀，重復(fù)6次，測(cè)定其色譜峰面積值，結(jié)果樣品含量的RSD為0.04%，結(jié)果表明本實(shí)驗(yàn)所用色譜儀精密性較良好。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一批樣品，依法“2.2.2.2”項(xiàng)下方法制成供試品溶液。按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件，分別在0，2，4，8，12、24 h進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，其芍藥苷的RSD為0.20%，結(jié)果表明24 h內(nèi)供試品溶液中芍藥苷的含量基本穩(wěn)定。

2.2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取取同一批樣品，按“2.2.2.2”項(xiàng)下方法平行制備6份，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算其含量，結(jié)果芍藥苷的平均含量為0.4762 mg/g，RSD為1.54%，結(jié)果表明本法具良好的重復(fù)性。

2.2.8 回收率試驗(yàn)

精密稱取含量已知的供試品（批號(hào)：061202）約1.5 g，共6份，分別精密加入對(duì)照品溶液（0.01619 mg/mL）50 mL，按“2.2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依該法測(cè)定，計(jì)算其回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

如表1所示，測(cè)得芍藥苷的平均回收率為99.97%，RSD=1.09%。結(jié)果表明本法回收率較好，準(zhǔn)確度較高。

3 討論

3.1 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇

取芍藥苷對(duì)照品的稀乙醇溶液，經(jīng)UV-2550紫外分光光度計(jì)在200～300 nm范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，結(jié)果芍藥苷在231 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，并參照中國(guó)藥典2010年版一部白芍項(xiàng)下，選擇230 nm作為測(cè)定波長(zhǎng)。

3.2 柱的選擇及柱效的考察

實(shí)驗(yàn)中考察了Gracesmart HP C18（4.6×250 mm，5 ?m）色譜柱、VP-ODS C18（4.6×150 mm，5 ?m）色譜柱及kromasil C18（4.6 mm×250 mm，5 ?m）色譜柱，結(jié)果kromasil C18的柱子分離度較好，理論塔板數(shù)大于10000，所以使用kromasil C18柱進(jìn)行本次實(shí)驗(yàn)，暫定柱效應(yīng)不低于6000。

3.3 《中國(guó)藥典》2010年版一部白芍的含量最低限度為1.6%

大蜜丸制造處方中白芍的投料量為18.8 g，制成量為55丸，按100%提取率計(jì)，每丸含量應(yīng)不得少于5.47 mg，本品制法中白芍為粉末入藥，考慮到生產(chǎn)工藝的波動(dòng)，暫時(shí)按80%提取率計(jì)算，本品大蜜丸每丸含白芍以芍藥苷計(jì)不得少于4.40 mg；小蜜丸制造處方中白芍的投料量為18.8 g，制成量為2500丸，每丸重約0.15 g，即制成量約為375 g，按100%提取率計(jì)，每克含量應(yīng)不得少于0.80 mg，本品制法中白芍為粉末入藥，考慮到生產(chǎn)工藝的波動(dòng)，暫時(shí)按80%提取率計(jì)算，本品小蜜丸每克含白芍以芍藥苷計(jì)不得少于0.64 mg；濃縮水蜜丸制造處方中白芍的投料量為18.8 g，制成量為1500丸，每25丸重5 g，即制成量為300 g，按100%提取率計(jì)，每克含量應(yīng)不得少于1.00 mg，本品制法中白芍為粉末入藥，考慮到生產(chǎn)工藝的波動(dòng)，暫時(shí)按70%提取率計(jì)算，本品濃縮水蜜丸每克含白芍以芍藥苷計(jì)不得少于0.70 mg。

參考文獻(xiàn)

[1] 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第三冊(cè)

[2] 中國(guó)藥典2010年版一部.