分光光度法測定青果多酚的含量

向麗 周鐵軍 王光西

摘要：以沒食子酸為標準品，使用酚試劑，采用分光光度法對青果（Ｆｒｕｃｔｕｓ ｃａｎａｒｉｉ）多酚的含量進行檢測。結(jié)果表明，酚試劑用量為１．５ ｍＬ，與６ ｍＬ質(zhì)量分數(shù)１０％的Ｎａ２ＣＯ３溶液混合，３０ ℃反應６０ ｍｉｎ，于７６５ ｎｍ處測定吸光度，沒食子酸濃度在０．５～２．５ ｍｇ／Ｌ范圍內(nèi)與吸光度有良好的線性關系，回歸方程為y＝０．１２１ ２x＋０．００４ 0。該方法能較準確地定量分析青果多酚含量，具有簡便、快速、穩(wěn)定，重現(xiàn)性好的優(yōu)點。

關鍵詞：分光光度法；酚試劑；青果（Ｆｒｕｃｔｕｓ ｃａｎａｒｉｉ）；多酚

中圖分類號：Ｏ６５７．３２文獻標識碼：Ａ文章編號：0439－８114（２０12）06－1242-03

Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Pｏｌｙｐｈｅｎｏｌ ｆｒｏｍ Ｆｒｕｃｔｕｓ ｃａｎａｒｉｉ ｂｙ Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ

ＸＩＡＮＧ Ｌｉａ，ＺＨＯＵ Ｔｉｅ－ｊｕｎｂ，ＷＡＮＧ Ｇｕａｎｇ－ｘｉａ

（ａ． Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐａｔｈｏｇｅｎ Ｂｉｏｌｏｇｙ；ｂ． Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，Ｌｕｚｈｏｕ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ， Ｌｕｚｈｏｕ ６４６０００，Ｓｉｃｈｕａｎ，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ in Ｆｒｕｃｔｕｓ cａｎａｒｉｉ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ ｗｉｔｈ Ｆｏｌｉｎ－Ｃｉｏｃａｌｔｅｕ ｒｅａｇｅｎｔ ａｎｄ gａｌｌｉｃ ａｃｉｄ as standard． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ that ｔｈｅ ｂｅｓｔ detection ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ｗａｓ ｔｈａｔ mixing １．５ ｍＬ Ｆｏｌｉｎ－Ｃｉｏｃａｌｔｅｕ ｒｅａｇｅｎｔ ｗｉｔｈ ６ ｍＬ １０％ Ｎａ２ＣＯ３（ｍ／Ｖ）， ａｎｄ ｔｈｅｎ reacting ｆｏｒ ６０ ｍｉｎ ａｔ ３０ ℃ ａｎｄ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ａｔ ７６５ ｎｍ． Ｔｈｅ ｌｉｎｅａｒ ｒａｎｇｅ ｏｆ ｓｔａｎｄａｒｄ ｃｕｒｖｅ ｗａｓ ０．５～２．５ ｍｇ／Ｌ in which ｔｈｅ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｅｑｕａｔｉｏｎ ｗａｓ y＝０．１２１ ２x＋０．００４ 0． Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｓｉｍｐｌｅ， ｆａｓｔ， ｓｔａｂｌｅ ａｎｄ ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ in Ｆｒｕｃｔｕｓ cａｎａｒｉｉ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ； Ｆｏｌｉｎ－Ｃｉｏｃａｌｔｅｕ ｒｅａｇｅｎｔ； Ｆｒｕｃｔｕｓ cａｎａｒｉｉ； ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ

青果（Ｆｒｕｃｔｕｓ ｃａｎａｒｉｉ）別名橄欖，為橄欖科植物橄欖的果實，青果具有抗菌［１］、抗病毒［２］、抗腫瘤和抗氧化作用［３－５］，有較高的藥用價值。青果化學成分包括揮發(fā)性成分、三萜類化合物、香豆精、多酚、蛋白質(zhì)和氨基酸、脂肪和脂肪酸、礦物質(zhì)、微量元素等多種成分。其中，多酚為青果中的重要化合物，是其主要功效成分。瀘州合江是四川省青果生產(chǎn)基地，具有豐富的種質(zhì)資源，開發(fā)青果的藥用價值對繼承和發(fā)展我國傳統(tǒng)醫(yī)學以及帶動和促進當?shù)厍喙漠a(chǎn)業(yè)化發(fā)展具有重要意義。本研究應用福林－酚比色法對青果多酚進行定量分析，為進一步篩選青果品種，綜合開發(fā)其藥用價值提供參考。

１材料與方法

１．１材料與儀器

材料：青果（購自瀘州寶光醫(yī)藥有限公司，選擇優(yōu)質(zhì)果實洗凈，風干，粉碎）。

分析純試劑：乙醇、碳酸鈉、沒食子酸標準品（批號ＭＵＳＴ－１００８０４０１，純度≥９８％，中國食品藥品檢定所）；化學純試劑：酚試劑。

儀器：ＪＹ９６－Ⅱ超聲粉碎儀（寧波新芝生物科技股份有限公司）；ＡＬ１０４／００電子天平（梅特勒－托利多儀器有限公司）；ＳＰ－７５２型紫外－可見分光光度計（上海光譜儀器有限公司）；ＤＫ－９８－１恒溫水浴鍋（天津泰斯特儀器有限公司）。

１．2方法

準確稱?。保?ｍｇ沒食子酸標準品，定容于１０ ｍＬ容量瓶中，配制成１ ｍｇ／ｍＬ標準液，?。?ｍＬ標準液定容至１００ ｍＬ，得１０ μｇ／ｍＬ工作液。準確稱取青果果實粉２．０ ｇ，溶于４０ ｍＬ的４０％乙醇（體積分數(shù)）中，超聲４５ ｍｉｎ后，取提取液抽濾，即為樣品液，采用分光光度法對青果多酚的含量進行檢測［６－８］。

２結(jié)果與分析

２．１測定波長的選擇

分別取沒食子酸標準溶液和青果樣品液在４００～９００ ｎｍ范圍內(nèi)掃描，兩者在７６５ ｎｍ處均有最大吸收峰，故選擇７６５ ｎｍ為測定波長。

２．２試劑用量的確定［９］

酚試劑與１０％的Ｎａ２ＣＯ３（質(zhì)量分數(shù)，下同）溶液比例的確定：?。保?ｍＬ沒食子酸標準溶液，加入１．５ ｍＬ酚試劑，混勻后分別加入０．７５、１．５、３．０、４．５、６．０和７．５ ｍＬ 10% Ｎａ２ＣＯ３溶液，定容至１５ ｍＬ，３０ ℃水浴反應顯色后，于７６５ ｎｍ處測定吸光度。結(jié)果表明，當10% Ｎａ２ＣＯ３溶液加入量為６ ｍＬ時，體系顯色反應較為完全，故確定酚試劑與１０％ Ｎａ２ＣＯ３溶液的體積比為１∶４。

酚試劑用量的確定：?。保?ｍＬ沒食子酸標準溶液，分別加入０．５、１．０、１．５、２．０、３．０和４．０ ｍＬ酚試劑，混勻后加入酚試劑４倍體積的１０％ Ｎａ２ＣＯ３溶液，定容至２１．５ ｍＬ，３０ ℃水浴反應顯色后，測定７６５ ｎｍ處吸光度。結(jié)果表明，當酚試劑加入量大于１．５ ｍＬ后吸光度達到最大，并趨于穩(wěn)定，所以確定酚試劑用量為１．５ ｍＬ。

２．３穩(wěn)定性檢測［１０］

酚比色法的穩(wěn)定性結(jié)果見表１。由表１可知，在反應前期吸光度隨時間增加而上升，１２０ ｍｉｎ內(nèi)吸光度變化較為平緩，表明反應完全，在此階段穩(wěn)定性好，從提高效率的角度考慮選擇反應時間為６０ ｍｉｎ。

２．４精密度試驗

取３份青果樣品液各１．５ ｍＬ，按照上述方法加樣，反復測定５次，結(jié)果見表２。結(jié)果表明該方法具有較高的精密度，能滿足樣品分析的要求。

２．５標準曲線的制作

?。抵В保?ｍＬ具塞試管，分別加入０、０．５、１．０、１．５、２．０和２．５ ｍＬ １０ μｇ／ｍＬ的標準溶液，１．５ ｍＬ酚試劑和６ ｍＬ １０％ Ｎａ２ＣＯ３溶液，30 ℃水溶60 min后測定OD765 nm。以濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線，回歸方程為：y＝０．１２１ ２x＋０．００４，Ｒ２＝０．９９８ ６（圖１），表明沒食子酸濃度在０．５～２．５ ｍｇ／Ｌ范圍內(nèi)與OD765 nm呈現(xiàn)良好的線性關系，方程可用于青果多酚的定量測定。

２．６重現(xiàn)性試驗

檢測６份同一青果樣品液中多酚的含量，結(jié)果見表３。結(jié)果表明在該條件下青果多酚的平均含量為３．３０９％，ＲＳＤ＝２．８２１％，重現(xiàn)性符合要求。

２．７回收試驗［１１］

將已知含量的青果樣品液６份，０．４ ｍＬ／份，分３組，各精確加入沒食子酸４，８和１２ μｇ，按照上述方法測吸光度，取平均吸光度計算多酚含量。按照下列公式計算回收率：

回收率＝（總多酚含量－原樣液多酚含量）／加標量×１００％

其回收率在９６．２７５～１０３．６００％之間，平均回收率為１００．２０１％，ＲＳＤ為３．１２１％（表４）。結(jié)果表明該方法準確可靠，可用于青果多酚的定量分析。

３小結(jié)

目前多酚含量的測定方法主要有高錳酸鉀法、比色法、色譜法等。其中高錳酸鉀法簡便易行，但被測液中的還原性物質(zhì)一般均能被氧化，選擇性不高；色譜法測定速度快、靈敏度高，但需要進行繁雜的衍生前處理，且分析成本高。相比較而言，分光光度比色法測定總多酚含量簡便、快速［１１］。青果為藥食兼用型水果，多酚是青果的重要藥效成分，主要集中在果肉中，與青果的苦澀味和藥理作用密切相關［７］。本試驗采用福林－酚比色法測定青果中的多酚含量，其最佳條件為：酚試劑１．５ ｍＬ、１０％ Ｎａ2ＣＯ３ ６ ｍＬ、在３０ ℃下反應６０ ｍｉｎ，測定波長為７６５ ｎｍ。該方法操作簡便、穩(wěn)定、重現(xiàn)性好、結(jié)果準確可靠。

參考文獻：

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